夏圻兒，顧 斌，李 軍，楊震宇，張定國，于 洋

（上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院泌尿外科，上海201299）

近年來我國男性前列腺癌發(fā)病人數(shù)逐漸增多，已逐漸成為男性主要惡性腫瘤之一，給患者身體健康造成嚴(yán)重影響，阻礙正常工作生活，導(dǎo)致生活質(zhì)量下降［1］。前列腺癌是指發(fā)生在前列腺上皮細(xì)胞惡性腫瘤，根據(jù)病理類型可分為鱗狀細(xì)胞癌、腺癌以及尿路上皮癌等多種類型［2］，該病的發(fā)生與年齡密切相關(guān)，55歲以前發(fā)病幾率較小，隨著年齡增大發(fā)病率逐漸提升，同時(shí)疾病的發(fā)生也和患者生活習(xí)慣、遺傳、膳食結(jié)構(gòu)和性生活等因素有關(guān)［3］。前列腺癌早期階段病情隱匿，無明顯癥狀，部分患者確診時(shí)腫瘤組織已發(fā)生轉(zhuǎn)移，延誤最佳治療時(shí)機(jī)。因此尋找診斷腫瘤的有效標(biāo)志物確診前列腺癌，對(duì)盡早展開治療和改善預(yù)后具有重要意義。上皮鈣黏素（E-cadherin）能夠抑制腫瘤細(xì)胞原發(fā)病灶脫落，防止腫瘤轉(zhuǎn)移，而轉(zhuǎn)錄因子Snail也和腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移存在密切聯(lián)系，臨床認(rèn)為2者對(duì)于前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展以及預(yù)后存在密切聯(lián)系［4］。本文將對(duì)在前列腺癌組織中Ecadherin和轉(zhuǎn)錄因子Snail的表達(dá)以及與根治術(shù)后生化復(fù)發(fā)的關(guān)系展開討論。

材料和方法

1 研究對(duì)象

將2018年5月～2019年7月于上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院接受治療的52例前列腺癌患者作為本次研究對(duì)象并設(shè)為腫瘤（tumor）組，所有患者均接受前列腺癌根治術(shù)，病理檢查確診為前列腺癌，年齡≥50歲、病史資料齊全、自愿參與研究且簽署協(xié)議書等標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)排除并有嚴(yán)重腎臟疾病、其他器官惡性腫瘤、內(nèi)分泌疾病、凝血功能障礙和精神異常等情況?；颊咂骄挲g（61.25±2.14）歲，依照Gleason分級(jí)（評(píng)分越低，惡性程度越低；評(píng)分越高，惡性程度越高，共10分，以此進(jìn)行分級(jí)共為5級(jí)）進(jìn)行腫瘤組織分化分級(jí)，其中16例為3級(jí)及以上（均為3級(jí)），22例為2級(jí)，14例為1級(jí)；在TNM分期上，8例為Ⅰ期、12例為Ⅱ期、24例為Ⅲ期、8例為Ⅳ期。選取同期在我院收治的46例良性前列腺增生患者作為對(duì)照（con‐trol）組，所有患者經(jīng)尿道前列腺氣化電切術(shù)治療，病理檢查均確診為良性前列腺增生，患者平均年齡（61.14±2.08）歲。我院倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)了此次研究，2組患者的一般性臨床資料對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），存在可比性。2組患者均接受生化檢驗(yàn)。

2 方法

2.1 免疫組織化學(xué)測(cè)定E-cadherin和Snail的表達(dá)

收集患者病理組織標(biāo)本，甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，脫蠟至水，EDTA液高溫狀態(tài)下實(shí)施抗原修復(fù)，隨后使用PBS清洗，在H2O2環(huán)境中孵育10 min，消除內(nèi)部過氧化酶活性。再次用PBS清洗，將正常血清滴入其中，室溫狀態(tài)下孵育15 min。I抗采用免抗人E-cadherin和Snail多克隆抗體，4℃的環(huán)境下放置過夜，使用PBS沖洗，將Ⅱ抗滴入，孵育15 min后再次使用PBS清洗，通過DAB顯色劑處理，采用二甲苯透明，封固措施選擇中性樹膠封閉，陰性對(duì)照將Ⅰ抗更換為PBS進(jìn)行。切片過程通過顯微鏡觀察，采取5個(gè)高倍鏡視野觀察每個(gè)切片。兩組患者術(shù)后接受隨訪，定期到醫(yī)院進(jìn)行血前列腺特異抗原水平檢測(cè)。生化復(fù)發(fā)標(biāo)準(zhǔn)前列腺癌根治術(shù)后每間隔3個(gè)月的血前列腺特異抗原水平檢測(cè)中，連續(xù)2次指標(biāo)大于0.2μg/L判定為生化復(fù)發(fā)。

2.2 觀察指標(biāo) （1）通過雙盲法對(duì)免疫組化染色結(jié)果閱片，以細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)是否存在棕黃色染色的強(qiáng)度和著色比例對(duì)E-cadherin和Snail陽性實(shí)施評(píng)分。染色強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)：0分表示未存在染色，1分表示弱染色，2分表示強(qiáng)染色。著色細(xì)胞比例標(biāo)準(zhǔn)：1分表示占據(jù)1%～25%之間，2分表示占據(jù)26%～50%之間，3分表示占據(jù)51%～75%之間，4分表示占據(jù)比例在75%以上。判定結(jié)果等于染色強(qiáng)度分值×著色細(xì)胞比例分值，1～2分為陰性，3分以上為陽性。（2）靈敏度（%）=真陽性人數(shù)/（真陽性人數(shù)+假陰性人數(shù)）×100%。特異性（%）=真陰性人數(shù)/（真陰性人數(shù)+假陽性人數(shù)））×100%。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS21.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料經(jīng)χ2檢驗(yàn)，以（%）表示，采用Pearson進(jìn)行相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 E-cadherin和Snail陽性表達(dá)情況的對(duì)比

腫瘤組E-cadherin陽性表達(dá)率顯著低于對(duì)照組（P<0.01）；腫瘤組Snail陽性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組（P<0.01），見表1。

表1 兩組患者E-cadherin和Snail陽性表達(dá)率對(duì)比Table 1.Comparison of positive expression rates of E-cadherin and Snail between 2 groups of patients［n（%）］

2 前列腺癌患者E-cadherin和Snail陽性表達(dá)情況與病理特征的關(guān)系

在分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移上，前列腺癌患者E-cadherin和Snail陽性表達(dá)情況差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），同時(shí)前列腺癌患者前列腺癌組織中E-cadherin和Snail表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.758，P<0.05），見表2。

表2 前列腺癌患者E-cadherin和Snail陽性表達(dá)率與病理特征的關(guān)系Table 2.The relationship between the positive expression rate of E-cadherin and Snail and pathological characteristics in patients with prostate cancer

3 前列腺癌患者根治術(shù)后生化復(fù)發(fā)與E-cadherin和Snail表達(dá)情況的關(guān)系

Kaplan-Meier分析結(jié)果可見前列腺癌患者根治術(shù)后無生化復(fù)發(fā)率，E-cadherin陽性表達(dá)者明顯高于E-cadherin陰性表達(dá)者，Snail陰性表達(dá)者明顯高于Snail陽性表達(dá)者（P<0.05），見圖1。

4 E-cadherin和Snail在前列腺癌組織中的相關(guān)性分析

將E-cadherin蛋白表達(dá)和Snail陽性率納入Pear‐son相關(guān)系數(shù)進(jìn)行分析，隨著E-cadherin的陽性降低Snail的陽性升高，Snail蛋白和E-cadheri蛋白表達(dá)為負(fù)向相關(guān)關(guān)系（r=-0.69，P<0.05）。

E-cadherin和Snail聯(lián)合診斷的陽性率靈敏度、準(zhǔn)確性以及特異性差異高于E-cadherin和Snail單獨(dú)診斷，對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

表3 E-cadherin和Snail在前列腺癌組織中的相關(guān)性分析Table 3.Correlation analysis of E-cadherin and Snail in prostate cancer tissue（%）

討 論

Figure 1.The relationship between biochemical recurrence and the expression of E-cadherin and Snail in the patients with prostate cancer after radical resection.圖1 前列腺癌患者根治術(shù)后生化復(fù)發(fā)與E-cadherin和Snail表達(dá)情況的關(guān)系

在成體組織器官的構(gòu)成過程中，鈣黏蛋白作為同親型結(jié)合、Ca依賴的細(xì)胞粘著糖蛋白促進(jìn)了胚胎發(fā)育中的細(xì)胞識(shí)別和組織分化［5］。E-Cadherin是一種在上皮細(xì)胞中表達(dá)的黏附蛋白，它的表達(dá)改變一定程度上會(huì)對(duì)組織內(nèi)部細(xì)胞粘附狀態(tài)造成影響，同時(shí)影響腫瘤細(xì)胞分化［6］。E-cadherin還能維持上皮細(xì)胞正常的組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)，起到細(xì)胞間的介導(dǎo)作用［7］。并且對(duì)腫瘤細(xì)胞形成有抑制效果，防止腫瘤轉(zhuǎn)移［8］。惡性腫瘤的發(fā)生與上皮細(xì)胞向間充質(zhì)的轉(zhuǎn)化存在密切聯(lián)系，參與了其中各個(gè)環(huán)節(jié)，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移［9］。當(dāng)E-cadherin出現(xiàn)基因突變，異常修飾，腫瘤細(xì)胞自身黏附度下降，加快腫瘤細(xì)胞分解速度，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移和浸潤［10］。

從本次研究結(jié)果得知，腫瘤組E-cadherin陽性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組，Snail陽性表達(dá)率明顯高于于對(duì)照組，說明E-cadherin低表達(dá)狀態(tài)與前列腺癌的發(fā)生存在密切聯(lián)系。在前列腺癌患者TNM分期上，Ⅰ～Ⅱ期患者中的E-cadherin陽性表達(dá)率明顯高于Ⅲ～Ⅳ期患者，表明前列腺癌患者晚期階段E-cadherin陽性表達(dá)率相較于早期階段更低。并且存在前列腺癌組織遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者E-cadherin陽性表達(dá)率明顯低于癌組織未轉(zhuǎn)移患者，并且存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者其E-cadherin陽性表達(dá)率也低于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移的患者，原因可能是E-鈣黏蛋白基丟失后表達(dá)減少，腫瘤細(xì)胞在缺少接觸抑制后大量增多，造成局部腫瘤細(xì)胞發(fā)生脫落，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移［11-13］。現(xiàn)階段臨床對(duì)于E-cadherin陽性表達(dá)率與根治術(shù)后生化復(fù)發(fā)關(guān)系的研究較少，本次研究中發(fā)現(xiàn)E-cadherin陽性表達(dá)者無生化復(fù)發(fā)率明顯高于E-cadherin陰性表達(dá)者，一定程度說明前列腺根治術(shù)后患者E-cad‐herin呈陽性時(shí)生化復(fù)發(fā)幾率更低，預(yù)后效果良好。

轉(zhuǎn)錄因子Snail是Snail超家族中的一類，在胚胎發(fā)育以及創(chuàng)口愈合等生理過程中Snail超家族起到了關(guān)鍵作用［14-16］。最早在果蠅中發(fā)現(xiàn)了Snail是一種高度不穩(wěn)定的蛋白。隨著研究的深入，在胰腺癌、乳腺癌以及結(jié)腸癌等惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了Snail的存在，同時(shí)與大多數(shù)腫瘤的臨床分期、組織學(xué)分級(jí)和預(yù)后效果存在密切聯(lián)系［17］。臨床發(fā)現(xiàn)，鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子在Snail超家族中占據(jù)重要地位，Snail超家族大多具有類似的結(jié)構(gòu)，都由一個(gè)高度可變的氨基末端和一個(gè)非常保守的羧基末端構(gòu)成，Snail轉(zhuǎn)錄因子中包含E-box，在生理過程中轉(zhuǎn)錄抑制因子可被Snail替代，起到相似的作用［18］。同時(shí)Snail在機(jī)體腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用，可加快腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)變?cè)谀[瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵性作用，Snail是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中的一個(gè)不可或缺的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子，它在上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)變過程中表達(dá)升高，然后直接結(jié)合E-cadherin的啟動(dòng)子上抑制E-cad‐herin的轉(zhuǎn)錄從而下調(diào)E-cadherin，且并不影響Snail的蛋白水平變化，而是直接抑制它的功能［19］。

從本次研究結(jié)果得知，腫瘤組Snail陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，同時(shí)隨著分化程度的下降Snail陽性表達(dá)率出現(xiàn)升高，說明了前列腺癌惡性程度與Snail蛋白存在密切聯(lián)系。在前列腺癌患者TNM分期上，Ⅰ～Ⅱ期患者中的Snail陽性表達(dá)率明顯低于Ⅲ～Ⅳ期患者，表明前列腺癌患者晚期階段E-cad‐herin陽性表達(dá)率相較于早期階段更高［20］。同時(shí)存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的前列腺癌患者Snail陽性表達(dá)率明顯高于未轉(zhuǎn)移的患者，而且存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者相較于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移的患者其Snail陽性表達(dá)率明顯更高。在無生化復(fù)發(fā)率上，Snail陰性表達(dá)者明顯高于Snail陽性表達(dá)者，說明了通過Snail表達(dá)的高低狀態(tài)能夠評(píng)估和預(yù)測(cè)前列腺癌不良預(yù)后情況。在本次研究中，前列腺癌患者癌組織中與E-cadherin和Snail的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，結(jié)果說明了當(dāng)E-cadherin的表達(dá)受到Snail的抑制后，造成上皮細(xì)胞連接結(jié)構(gòu)的破壞，導(dǎo)致癌細(xì)胞之間黏附作用較弱，腫瘤細(xì)胞發(fā)生松散，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。

綜上所述，前列腺癌患者癌組織中E-cadherin呈低表達(dá)狀態(tài)，而Snail呈高表達(dá)狀態(tài)，極大程度影響前列腺癌細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展，與前列腺癌根治術(shù)后生化復(fù)發(fā)密切相關(guān)，通過對(duì)E-cadherin和Snail表達(dá)情況的進(jìn)一步研究，能夠更深入的了解前列腺癌的發(fā)展機(jī)制，準(zhǔn)確診斷前列腺癌，有利于治療方案的制定和預(yù)后改善。