王曉丹 郭星漢 崔瑛

摘要 目的：觀察細辛水煎液和揮發(fā)油混合物對利血平誘導抑郁模型大鼠的抗抑郁作用并探討其作用機制。方法：除正常對照組外，其余各組大鼠每天給予利血平腹腔注射，造模第4天各組大鼠開始灌胃給藥，連續(xù)給藥12 d。記錄大鼠的體質(zhì)量、肛溫及敞箱實驗大鼠運動距離、站立次數(shù)變化。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法（ELISA）測定單胺類遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的含量。結(jié)果：與正常對照組比較，模型組大鼠體質(zhì)量、肛溫、敞箱運動距離與站立次數(shù)均顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），腦組織中5-羥色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、去甲腎上腺素（NE）含量顯著減少，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與模型組比較，細辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中、低劑量組均能夠不同程度的糾正利血平所致大鼠體質(zhì)量、肛溫、敞箱運動距離與站立次數(shù)降低的趨勢，增加大鼠腦組織中5-HT、DA、NE的含量，降低大鼠腦組織中5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）、3，4-二羥基苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）的含量。結(jié)論：細辛水煎液和揮發(fā)油混合物在利血平誘導抑郁大鼠模型上表現(xiàn)出較好的抗抑郁作用，其抗抑郁作用的發(fā)揮可能與增強單胺類遞質(zhì)的合成，同時抑制單胺類遞質(zhì)的代謝密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞 細辛;抑郁;機制;單胺類遞質(zhì)

Effects of Mixture of Xixin Decoction and Volatile Oil on Reserpine-induced Depression in Rats

WANG Xiaodan，GUO Xinghan，CUI Ying

（Henan University of Chinese medicine，Henan，Zhengzhou 450046，China）

Abstract Objective：To observe the antidepressant effect of Xixin Decoction and volatile oil mixture on reserpine-induced depression in rats and explore its mechanism.Methods：Except the normal control group，intraperitoneal injections of reserpine was given 0.3 mg/kg abdominal cavity injection every day.The rats in each group were given orally for 12 consecutive days after the 4th day of intraperitoneal injection.The changes of body weight and rectal temperature of rats，the distance of movement and the number of times of standing were observed.The contents of monoamine transmitters and their metabolites were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.Results：Compared with the control group，body weight，the rectal temperature，the distance of behavioral movement and standing times in the model group were significantly reduced （P<0.01），the contents of serotonin （5-HT），dopamine （DA） and adenaline （NE） in the brain tissue of the model group were significantly decreased （P<0.01）.com

pared with the model group，the high，medium and low doses of Xixin decoction and volatile oil mixture can correct the decreasing trend of of body weight，rectal temperature，behavioral distance and standing times induced by reserpine to different degrees，and increase the content of 5-HT，DA and NE in the rat brain tissue，and decrease the content of 5-hyroxyindole acetic （5-HIAA），4-dihydroxyphenylacetic （DOPAC），homovanillic （HVA） in the rat brain tissue.Conclusion：Xixin Decoction and volatile oil mixture showed a good antidepressant effect on reserpine-induced depression in rats，and the antidepressant effect may be related to its ability to enhance the synthesis of monoamine transmitters and inhibit the metabolism of monoamine transmitters.Quality metabolism is closely related.

Keywords Herba Asari; Depression; Mechanism; Monoamine transmitters

中圖分類號：R242;R285.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.01.013

抑郁癥是一種復雜的心理障礙性疾病，其病情嚴重，發(fā)病率逐年增加、發(fā)病人群廣[1-3]。當前治療抑郁癥多采用的是西藥，主要有鹽酸氟西汀、鹽酸文拉法辛、丙咪嗪等代表性藥物[4]。上述藥物對抑郁癥有一定的治療作用，但在使用過程中也出現(xiàn)了非常多的不良反應(yīng)。中醫(yī)藥雖沒有抑郁癥病名，但通過辨證施治有較好的的療效和較大的安全優(yōu)勢。因此，有必要從中藥中發(fā)掘有效藥物，為防治抑郁癥服務(wù)。

細辛是馬兜鈴科細辛屬植物北細辛Asarum heterotropoides Fr.Schmldt var.mandshuricum（Maxim）Kitag.、漢城細辛Asarum sieboldii Miq.Asarumsieboldii Miq.var.seoulense Nakai與華細辛Asarum sieboldii Miq.的干燥根和根莖，味辛、性溫，具有祛風散寒、通竅止痛、溫肺化飲的功效，用于風寒感冒、頭痛、牙痛、鼻塞鼻淵、風濕痹痛、痰飲咳喘等[5-7]。細辛揮發(fā)油中含黃樟腦、3-蒈烯、3，5-二甲氧基甲苯、丁香酚甲醚苯等[8]?，F(xiàn)代藥理學研究表明細辛具有強心、解熱鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、局部麻醉、抗炎等多種藥理作用[9]。

我們前期開展了細辛抗抑郁作用研究，研究表明細辛水煎液及揮發(fā)油都具有抗抑郁作用，其作用機制可能與提高腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺（5-HT）、谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量有關(guān)[10]。本實驗在前期實驗的基礎(chǔ)上，利用利血平誘導抑郁大鼠模型來考察細辛水煎液和揮發(fā)油混合物的抗抑郁功效，并初步探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

雄性SD大鼠SPF級，體質(zhì)量（180±10）g。購自鄭州大學實驗動物中心，批號：41003100005615，許可證號碼：SCXK（豫）2017-0001。飼養(yǎng)于大鼠IVC獨立送風隔離籠具內(nèi)，溫度（25±2）℃，并由專人負責。

1.1.2 藥物

細辛購于鄭州張仲景大藥房，藥材原產(chǎn)地：遼寧，批號：170801。鹽酸氯米帕明片（湖南洞庭藥業(yè)有限公司，國藥準字H10900027）。利血平注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：1705091）。

1.1.3 試劑與儀器 大鼠5-HT、NE、DA、5-HIAA、HVA、DOPAC試劑盒（上海艾萊薩生物科技有限公司，生產(chǎn)批號：201803）;揮發(fā)油提取裝置（鄭州凱鵬實驗儀器有限公司，型號：ZNHW-III0000ML）;大小鼠自主活動實驗系統(tǒng)（成都泰盟軟件有限公司，型號：OFT-100）;大鼠獨立送風隔離籠具（蘇州馮氏實驗動物設(shè)備有限公司，型號：IVC-II）;快速電子體溫計（鄭州邁斯通醫(yī)療科技有限公司，型號：TS0-A）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，稱重后隨機分成6組，每組10只，包括正常對照組、模型組、鹽酸氯米帕明（0.05 g/kg）組，細辛水煎液和揮發(fā)油混合物高（20 g/kg）、中（10 g/kg）、低（5 g/kg）劑量組。除正常對照組之外，其余各組大鼠每天給予利血平0.3 mg/kg腹腔注射制備模型。

1.2.2 給藥方法

造模第4天各組大鼠開始灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥12 d。鹽酸氯米帕明組劑量0.05 g/kg，細辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中、低組劑量分別為20、10、5 g/kg，模型組和正常對照組給予同等體積的蒸餾水。

細辛水煎液和揮發(fā)油混合物的制備：取適量細辛粗粉，加入10倍量的蒸餾水浸泡1 h，采用水蒸氣蒸餾法提取細辛揮發(fā)油，提取4 h，將提取出來的揮發(fā)油密封避光并冷藏保存，同時將水煎液過濾濃縮至含生藥濃度為2 g/mL，將細辛揮發(fā)油全部加入到濃縮后的水煎液中，并加入0.5%羧甲基纖維素鈉助溶，即得細辛水煎液和揮發(fā)油混合物[11-12]。

1.2.3 檢測指標與方法

實驗期間稱量并記錄大鼠體質(zhì)量（g），末次給藥1 h后，采用電子體溫計測量大鼠的肛溫（℃），然后使用OFT-100大小鼠自主活動實驗系統(tǒng)對大鼠進行敞箱實驗，記錄5 min內(nèi)大鼠在敞箱中的運動距離以及站立次數(shù)。敞箱實驗完成之后，立即將大鼠處死，在冰臺上剝離全腦，按照試劑盒說明書采用ELISA法檢測腦組織中5-羥色胺（5-HT）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）、多巴胺（DA）、3，4-二羥基苯乙酸（DOPAC）、去甲腎上腺素（NE）和高香草酸（HVA）的含量。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，用F檢驗，以P<0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 細辛水煎液和揮發(fā)油混合物對利血平誘導抑郁模型大鼠體質(zhì)量的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠的體質(zhì)量顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與模型組比較，鹽酸氯米帕明組及細辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、低劑量組大鼠體質(zhì)量顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），細辛水煎液和揮發(fā)油混合物中劑量組大鼠體質(zhì)量有增加的趨勢。見表1。

2.2 細辛水煎液和揮發(fā)油混合物對利血平誘導抑郁模型大鼠肛溫的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠的肛溫顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與模型組比較，鹽酸氯米帕明組及細辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中、低劑量組大鼠肛溫均顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 細辛水煎液和揮發(fā)油混合物對利血平誘導抑郁模型大鼠行為學的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠的敞箱實驗運動距離、站立次數(shù)均顯著減少，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與模型組比較，鹽酸氯米帕明組及細辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中、低劑量組均可以顯著增加敞箱實驗大鼠運動距離與站立次數(shù)，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表3。

2.4 細辛水煎液和揮發(fā)油混合物對利血平誘導抑郁模型大鼠腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠腦組織中5-HT的含量顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;5-HIAA的含量無顯著變化。與模型組比較，鹽酸氯米帕明組及細辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中、低劑量組大鼠腦組織中5-HT的含量顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;鹽酸氯米帕明組及細辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中劑量組大鼠腦組織中5-HIAA的含量顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;細辛水煎液和揮發(fā)油混合物低劑量組大鼠腦組織中5-HIAA的含量無顯著變化。與正常對照組比較，模型組大鼠腦組織中的DA含量顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;DOPAC、HVA含量無顯著變化。與模型組比較，細辛水煎液和揮發(fā)油混合物中、低劑量組大鼠腦組織中DA的含量顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;鹽酸氯米帕明組及細辛水煎液和揮發(fā)油混合物高劑量組大鼠腦組織中DA含量有增加的趨勢;鹽酸氯米帕明組及細辛水煎液和揮發(fā)油混合物中、低劑量組大鼠腦組織中DOPAC含量顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;細辛水煎液和揮發(fā)油混合物高劑量組大鼠腦組織中DOPAC含量無顯著變化;鹽酸氯米帕明組及細辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中劑量組大鼠腦組織中HVA含量顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;細辛水煎液和揮發(fā)油混合物低劑量大鼠腦組織中HVA含量無顯著變化。與正常對照組比較，模型組大鼠腦組織中NE的含量顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與模型組比較，鹽酸氯米帕明組及細辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、低劑量組大鼠腦組織中NE的含量顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;細辛水煎液和揮發(fā)油混合物中劑量組大鼠腦組織中NE的含量有增加的趨勢。見表4～6。

3 討論

現(xiàn)代藥理研究表明，細辛具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗驚厥的作用[13]。本實驗室前期進行了細辛抗抑郁作用研究，實驗結(jié)果表明，細辛水煎液及揮發(fā)油均表現(xiàn)出抗抑郁作用[10]，本實驗將細辛水煎液與揮發(fā)油混合，此方法避免了對細辛有效成分利用不完全的缺點，以期得到更好的抗抑郁作用。

利血平是一種降壓藥，具有倦怠、注意力不集中、性欲減退等精神抑郁不良反應(yīng)。利血平抑郁模型可以在一定程度上模擬抑郁癥患者的臨床表現(xiàn)，其造模方法簡便易行，因此在基礎(chǔ)實驗中被廣泛應(yīng)用[14]。利血平通過耗竭腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)從而誘發(fā)動物食欲不振、體溫下降、自發(fā)活動減少、體質(zhì)量降低等現(xiàn)象[15-16]。這類似中醫(yī)寒癥表現(xiàn)，細辛性溫，有祛寒作用，選擇利血平模型也符合中醫(yī)對癥用藥思維。實驗結(jié)果顯示，模型組大鼠出現(xiàn)自主活動能力減退的現(xiàn)象，表明利血平誘導的抑郁模型造模成功;同時，模型組大鼠出現(xiàn)體質(zhì)量增加緩慢、肛溫下降的現(xiàn)象，給予細辛水煎液和揮發(fā)油混合物后，各劑量組大鼠體質(zhì)量顯著增加，肛溫顯著上升。在敞箱實驗中，給藥組大鼠的行為學運動距離、站立次數(shù)，較之模型組大鼠均有不同程度的提升，表明細辛水煎液和揮發(fā)油混合物具有抗抑郁作用，其中以高劑量組和中劑量組作用效果最明顯。

抑郁癥的發(fā)病機制假說眾多，其中最主流的的假說為單胺類神經(jīng)遞質(zhì)假說。該假說認為單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量或功能的改變很大程度上是由于其合成或儲存發(fā)生障礙，降低或增加受體功能改變造成的。影響單胺類遞質(zhì)含量的主要因素是其合成及代謝，如果增加其合成功能，降低其代謝功能，則單胺類遞質(zhì)含量會增加，而其代謝產(chǎn)物水平會下降。5-HIAA是5-HT的代謝終產(chǎn)物，DOPAC和HVA是DA的代謝產(chǎn)物，其代謝產(chǎn)物的變化可間接反映5-HT和DA的情況。本實驗采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法對大鼠腦組織內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物進行含量測定，結(jié)果顯示，與正常對照組比較，模型組大鼠腦內(nèi)5-HT、DA、NE含量下降明顯。與模型組比較，細辛水煎液和揮發(fā)油混合物能夠?qū)估揭钟裟Ｐ痛笫竽X組織中5-HT、DA、NE水平減少，并且能夠降低5-HIAA、DOPAC、HVA的水平。

因此，細辛水煎液和揮發(fā)油混合物在利血平誘導抑郁大鼠模型上表現(xiàn)出較好的抗抑郁作用，并且抗抑郁作用的發(fā)揮可能與其能夠增強單胺類遞質(zhì)的合成，同時抑制單胺類遞質(zhì)的代謝有很大關(guān)系。

參考文獻

[1]王艾紅，謝瑩瑩，尹安春，等.抑郁癥共病患者干預策略研究進展[J].護理學報，2019，26（2）：34-38.

[2]世界中醫(yī)藥學會聯(lián)合會，中華中醫(yī)藥學會.國際中醫(yī)臨床實踐指南首發(fā)抑郁癥（2019-10-11）[J].世界中醫(yī)藥，2020，15（20）：3157-3159.

[3]丁鳳敏，陳家旭，鄒小娟，等.抑郁癥中醫(yī)證候動物模型研究進展[J].中華中醫(yī)藥雜志，2019，34（1）：245-247.

[4]American Psychiatric Association.Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders（DSM-IV-TR）[M].Washington，DC：APA.2000：372.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（四部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：230-231.

[6]梁學清，李丹丹.細辛藥理作用研究進展[J].河南科技大學學報：醫(yī)學版，2011，29（4）：318-320.

[7]費可，胡瑕瑜，鄒璐，等.細辛臨床應(yīng)用與藥理作用研究進展[J].上海中醫(yī)藥大學學報，2010，24（6）：87-90.

[8]陳燕鑾，劉秋瓊，王建壯，等.三種不同方法提取北細辛揮發(fā)油的成分分析[J].中藥材，2013，36（9）：1447-1451.

[9]丁香，趙萬秋，蔡林.中藥細辛的現(xiàn)代臨床應(yīng)用研究[J].臨床合理用藥雜志，2015，8（30）：177-179.

[10]溫瀑，李玲玲，牛源菲，等.細辛干預小鼠抑郁的初步研究[J].世界中醫(yī)藥，2018，13（4）：794-798.

[11]穆啟運，阮新民.川芎和細辛揮發(fā)油提取工藝的研究[J].中國中醫(yī)藥科技，2010，17（2）：143-145.

[12]朱學慧，田慧敏.細辛入藥劑量、煎煮時間及品種對湯劑療效影響[J].天津藥學，1999，11（3）：35-36.

[13]曲淑巖，毋英杰，王一華.細辛對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制作用[J].中醫(yī)雜志，1982，23（6）：72-74.

[14]高雪松，王永志，李麗，等.利血平致抑郁樣嚙齒類動物模型的研究進展[J].實驗動物科學，2017，34（2）：57-61.

[15]栗俞程，李寒冰，張賓.黃芩總黃酮對小鼠的抗抑郁作用[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（23）：168-170.

[16]王永志，趙靜潔，杜儀，等.柴胡疏肝散對抑郁癥大鼠行為學的影響[J].北京中醫(yī)藥，2012，31（10）：783-785.

（2020-02-05收稿 責任編輯：楊覺雄）

基金項目：河南省科技攻關(guān)項目（182102310317）

作者簡介：王曉丹（1992.02—），女，碩士研究生，研究方向：中藥藥性及抗焦慮作用研究，E-mail：15136231165@163.com

通信作者：崔瑛（1961.05—），男，博士，教授，研究方向：中藥藥性及抗焦慮作用研究，E-mail：cyexin@126.com