袁爾東，劉靚赟，黃敏，任嬌艷

（華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州 510640）

二氧化硅是一種優(yōu)良的流動(dòng)促進(jìn)劑，作為抗結(jié)劑在顆粒劑制造中可作內(nèi)干燥劑，可以較好地改善顆粒流動(dòng)性以維持產(chǎn)品的穩(wěn)定性[1]，防止顆?；蚍蹱钍称肪奂Y(jié)塊、保持其松散或自由流動(dòng)，在固體飲料中有著良好的應(yīng)用[2]。隨著納米技術(shù)和生產(chǎn)工藝的發(fā)展，食品添加劑二氧化硅已經(jīng)達(dá)到了納米尺寸。由于納米顆粒特殊的理化特性，納米級(jí)食品添加劑對(duì)食品的色澤、味道、質(zhì)構(gòu)、貨架期等可能產(chǎn)生明顯影響，例如納米級(jí)食品添加劑可以通過增強(qiáng)食品中鐵和鋅的溶解性改善食品的感官品質(zhì)[3]。當(dāng)將納米級(jí)食品添加劑用于功能性食品中時(shí)對(duì)其功效活性發(fā)揮也可能產(chǎn)生影響。

研究表明，納米級(jí)食品添加劑可以通過對(duì)食品成分的控制和釋放來促進(jìn)生物活性物質(zhì)在食品中傳遞，改善功能成分的活性[4]。Canham研制了可用于功能性食品的納米級(jí)硅，其可以提高加工和儲(chǔ)存過程中特定營(yíng)養(yǎng)素的穩(wěn)定性，并且可以通過促進(jìn)腸道中生物降解性物質(zhì)原硅酸的釋放來提高機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用[5]。納米添加劑還可能影響營(yíng)養(yǎng)成分在體內(nèi)的吸收或代謝過程。Lee等人研究發(fā)現(xiàn)，納米二氧化硅可能通過與食品成分的結(jié)合，提高大鼠對(duì)糖類和蛋白的口服吸收量[6]。

但目前針對(duì)納米二氧化硅作為食品添加劑應(yīng)用到功能性食品中的研究較少，為使其能夠進(jìn)行有效的推廣應(yīng)用，有必要對(duì)其有關(guān)生物性能進(jìn)行深入研究。因此，本文以二氧化硅（SiO2）和納米二氧化硅（nSiO2）為抗結(jié)劑，應(yīng)用于以黃芪、茯苓、葛根、猴頭菇多糖為原料制備的護(hù)胃功能固體飲料，分析對(duì)比這兩種抗結(jié)劑對(duì)其穩(wěn)定性及護(hù)胃功效的影響，探討納米級(jí)食品添加劑在功能性食品中應(yīng)用的可行性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞

人胃黏膜上皮細(xì)胞（GES-1），由南方醫(yī)科大學(xué)友情提供。

1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)材料

磷酸鹽緩沖溶液（PBS，pH 7.4）、DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS）、0.25% EDTA-胰酶、青霉素和鏈霉素雙抗溶液均購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽（MTT）購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司；SiO2和nSiO2，均購(gòu)自廣州新如榮生物科技有限公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

茯苓、黃芪、葛根和猴頭菇菌絲體多糖購(gòu)自安國(guó)市一達(dá)藥業(yè)有限公司。

1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器

恒溫恒濕箱購(gòu)自上海精密儀器儀表有限公司；全功能微孔板檢測(cè)酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)伯騰儀器有限公司；二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱購(gòu)自Thermo Scientific；超凈工作臺(tái)購(gòu)自蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 護(hù)胃固體飲料的制備

將黃芪、茯苓和葛根按照1:1:1的比例復(fù)配，熱水提取2次。第一次提取，料液比1:10（W/W），100 ℃，2 h。過濾后的濾渣進(jìn)行第二次提取，料液比1:8（W/W），100 ℃，1.50 h。合并兩次提取液，濃縮、冷凍干燥后，與猴頭菇菌絲體多糖按比例復(fù)配混勻，為具有護(hù)胃功效的復(fù)合提取物配料（CE）[7]。最后，加入適量甜菊糖苷和果膠以及抗結(jié)劑，混勻，得到護(hù)胃固體飲料。

1.2.2 護(hù)胃固體飲料理化性質(zhì)測(cè)定

1.2.2.1 總多糖含量測(cè)定

采用苯酚-硫酸法進(jìn)行樣品多糖含量的測(cè)定[8]。具體步驟是：稱取105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品20 mg，用蒸餾水溶解并定容于100 mL的容量瓶中，配制成葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，其濃度為0.20 mg/mL。分別取0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液于10 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，配成－系列濃度為0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液。移取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液各2 mL于試管中，加5%的苯酚2 mL搖勻，緩慢加入5 mL濃硫酸搖勻，沸水浴顯色15 min，冷卻至室溫后，在波長(zhǎng)為490 nm處測(cè)定吸光度值，每個(gè)濃度平行測(cè)定三次，以空白管調(diào)零，橫坐標(biāo)為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，縱坐標(biāo)為吸光值，從而繪制成葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。其線性方程為 y=7.7464x+0.0292，相關(guān)系數(shù)R2=0.9966，表明該標(biāo)準(zhǔn)曲線線性較好。

樣品測(cè)定方式同上，將待測(cè)樣品稀釋成合適的倍數(shù)后，重復(fù)上述操作，將樣品的吸光值代入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得到樣品的多糖濃度。

1.2.2.2 總多酚含量測(cè)定

采用福林酚法進(jìn)行樣品多酚含量的測(cè)定[9]。具體步驟為：采用沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，準(zhǔn)確稱量0.10 g沒食子酸，蒸餾水定容于100 mL容量瓶中，配置成1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別吸取0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液定容于100 mL的容量瓶中，配制成濃度為0、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液。分別吸取0.50 mL上述各濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液，加入2.50 mL福林酚溶液，室溫下反應(yīng)3~5 min后，加入2 mL 7.50% Na2CO3溶液，室溫下反應(yīng)1 h后，在波長(zhǎng)為760 nm處測(cè)定吸光度值，每個(gè)濃度平行測(cè)定三次，以空白管調(diào)零，并以沒食子酸溶液的濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性方程為y=13.735x+0.0187，且相關(guān)系數(shù)R2=0.9981，表明此標(biāo)準(zhǔn)曲線線性較好。

圖2 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Standard curve of gallic acid

樣品測(cè)定方式同上，將待測(cè)樣品稀釋成合適的倍數(shù)后，重復(fù)上述操作，將樣品的吸光值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得到樣品的多酚濃度。

1.2.3 抗結(jié)劑對(duì)護(hù)胃固體飲料穩(wěn)定性的影響

根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2760-2014的規(guī)定，二氧化硅在固體飲料中的最大使用量為15.00 g/kg，因此將護(hù)胃固體飲料中SiO2或nSiO2的添加量設(shè)置為0.30%、0.90%和1.50%等低中高3個(gè)劑量。

按比例向護(hù)胃固體飲料中加入不同比例的SiO2或nSiO2，滅菌、分裝，放入溫度37 ℃、濕度75%的恒溫恒濕箱中加速保藏一個(gè)月[10]。定期取樣，檢測(cè)休止角和堆積密度，分析對(duì)比SiO2和nSiO2的抗結(jié)作用。

1.2.3.1 休止角的測(cè)定

通過休止角的大小來評(píng)估粉體的流動(dòng)性，以評(píng)價(jià)抗結(jié)劑的抗結(jié)效果[11]。當(dāng)顆粒在重力作用下自由下落時(shí)，在平面上形成的堆積層斜面上的顆粒所受重力和顆粒之間摩擦力達(dá)到靜止?fàn)顟B(tài)下測(cè)得的最大角度。保持的漏斗嘴（直徑1 cm）與桌面垂直，下端離桌面高度為5 cm。在桌面上鋪一張潔凈的白紙，把1 g產(chǎn)品從漏斗口加入，測(cè)定產(chǎn)品粉末在白紙上形成錐形的斜面與桌面的角度[12]，即為休止角。

1.2.3.2 堆積密度的測(cè)定

堆積密度是指產(chǎn)品粉末容易散開的程度，堆積密度越小，越容易散開，顆粒抱團(tuán)情況越小，更易于溶解在水中。稱量一定質(zhì)量的產(chǎn)品粉末并記錄下質(zhì)量M（mg）。從漏斗中散落到5 mL量筒中，測(cè)定產(chǎn)品在量筒中的高度H（mL）[13]。計(jì)算堆積密度：

1.2.4 抗結(jié)劑對(duì)護(hù)胃固體飲料護(hù)胃功效的影響

1.2.4.1 對(duì)正常GES-1細(xì)胞的影響

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的GES-1細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔1×104個(gè)。將GES-1細(xì)胞隨機(jī)分為空白對(duì)照組及三個(gè)實(shí)驗(yàn)組（CE、CE+SiO2、CE+nSiO2），其中，SiO2和nSiO2的添加量均為1.50%。每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。待細(xì)胞完全貼壁后，更換培養(yǎng)基，空白對(duì)照組加入DMEM培養(yǎng)基100 μL/孔，實(shí)驗(yàn)組則分別加入不同濃度（31.25、62.50、125 μg/mL）的樣品溶液100 μL/孔，37 ℃、5% CO2孵育24 h后進(jìn)行MTT試驗(yàn)。

1.2.4.2 乙醇誘導(dǎo)GES-1細(xì)胞損傷模型構(gòu)建

用乙醇進(jìn)行GES-1細(xì)胞損傷模型的構(gòu)建[14]。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的GES-1細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔細(xì)胞數(shù)為1×104個(gè)，后放置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h至細(xì)胞基本貼壁，培養(yǎng)條件為：37 ℃、5% CO2。用DMEM培養(yǎng)基將無水乙醇稀釋成2.00、1.60、1.40、1.20、1.00、0.80、0.60、0.40、0.20、0.10 mol/L，分別加入各孔中，每孔100 μL。每一稀釋濃度設(shè)置5個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照組。37 ℃、5% CO2分別孵育2、4、6 h后進(jìn)行MTT試驗(yàn)。

1.2.4.3 對(duì)乙醇損傷GES-1細(xì)胞模型的影響

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的GES-1細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔1×104個(gè)。將GES-1細(xì)胞隨機(jī)分為5組，空白對(duì)照組、模型組以及三個(gè)實(shí)驗(yàn)組（CE、CE+SiO2、CE+nSiO2），其中，SiO2和nSiO2的添加量均為1.50%。每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。待細(xì)胞完全貼壁后，更換培養(yǎng)基，空白對(duì)照組和模型組加入DMEM培養(yǎng)基100 μL/孔，實(shí)驗(yàn)組則分別加入不同濃度（31.25、62.5、125 μg/mL）樣品溶液100 μL/孔，繼續(xù)孵育24 h。除空白對(duì)照組外，其余各組加入1.0 mol/L乙醇溶液100 μL/孔進(jìn)行造模，37 ℃、5% CO2孵育2 h后進(jìn)行MTT試驗(yàn)。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理

所有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)均進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn)得出，數(shù)據(jù)結(jié)果均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SEM）的形式展示。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單向方差分析（ANOVA），使用Tukey的分析比較所有組之間的顯著差異，p<0.05視為統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上具有顯著性差異。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)圖表采用Prism 6.0和Origin 8.5進(jìn)行繪制。

2 結(jié)果與討論

2.1 護(hù)胃固體飲料理化性質(zhì)

多糖和多酚被認(rèn)為是胃黏膜保護(hù)的主要生物活性物質(zhì)。已有研究表明多糖和多酚可以通過減少氧化應(yīng)激、炎癥和細(xì)胞損傷對(duì)胃粘膜損傷提供重要的保護(hù)作用[15,16]。護(hù)胃固體飲料的三種中草藥原料的主要活性成分為多糖或類黃酮。其中，黃芪和茯苓的主要活性成分是多糖，葛根的主要活性成分是多酚。所以此護(hù)胃固體飲料的理化性質(zhì)主要是對(duì)總多糖和總多酚含量的測(cè)定。

如表1所示，此護(hù)胃固體飲料的主要成分是多糖，含量約為60%，同時(shí)含有約4%的多酚。且兩種樣品的總多糖和總多酚含量均無顯著性差異。

表1 護(hù)胃固體飲料理化性質(zhì)測(cè)定結(jié)果Table 1 Measurement results of physical and chemical properties of solid beverages

許多研究表明，類黃酮可以與多糖反應(yīng)形成不同的復(fù)雜微結(jié)構(gòu)，并可能影響多糖和類黃酮的理化性質(zhì)和生物學(xué)活性。黃酮類化合物可能與多糖具有協(xié)同增效的作用[17]等。Pirvu等人[18,19]研究發(fā)現(xiàn)，由多糖和多酚組成的矢車菊提取物，對(duì)氧化應(yīng)激引起的中度和淺層胃黏膜損傷都具有較好的功效，甚至比雷尼替丁這種藥物具有更好的護(hù)胃效果。

2.2 抗結(jié)劑對(duì)護(hù)胃固體飲料穩(wěn)定性的影響

如圖3所示，隨著儲(chǔ)藏時(shí)間的增加，各組樣品的休止角逐漸增加。其中，SiO2組和nSiO2組休止角，均比空白對(duì)照組小。且SiO2和nSiO2添加量越大，休止角越小。當(dāng)SiO2和nSiO2添加量達(dá)到1.50%時(shí)，在第28 d時(shí)，SiO2組和nSiO2組的休止角分別為152 °和153 °，明顯低于空白對(duì)照組（162 °）（p<0.005）。在同等添加量的條件下，SiO2組休止角略低于nSiO2組，但無顯著差異。Silverberg等指出在貯存過程中物料晶體的交互生長(zhǎng)引起的顆粒間粘連是物料結(jié)塊的主要機(jī)理[20]，而SiO2則可以通過抑制顆粒間的粘連來改善物料的流動(dòng)性。Tonglairoum等人[11]將SiO2添加到粉末混合物中，通過測(cè)定休止角來評(píng)估其抗結(jié)性能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SiO2可以改善混合物的流動(dòng)性，具有較好的抗結(jié)作用。

圖3 不同樣品連續(xù)4周的休止角Fig.3 Angle of repose of different samples for 4 weeks

如圖4所示，隨著儲(chǔ)藏時(shí)間的增加，各組樣品的堆積密度也逐漸增加。與空白對(duì)照組相比，SiO2和nSiO2組的樣品堆積密度增長(zhǎng)較小。在第28 d時(shí)，1.50% SiO2和1.50% nSiO2組的堆積密度分別為2.17 mg/mL和2.33 mg/mL，均明顯小于空白對(duì)照組（3.33 mg/mL）（p<0.005）。在同等添加量情況下，SiO2組堆積密度略低于nSiO2組，但差異并不明顯。這與Nortuy等人[21]的研究結(jié)果一致，他們發(fā)現(xiàn)通過增加SiO2的含量或增大粒徑可以減少固體顆粒的聚集。

圖4 不同樣品連續(xù)4周的堆積密度Fig.4 Bulk density of different samples for 4 consecutive weeks.

因此，綜合休止角和堆積密度兩個(gè)指標(biāo)來看，SiO2和nSiO2均有一定的抗結(jié)作用，其中SiO2的抗結(jié)效果略高于nSiO2，但二者并無明顯差異。

2.3 抗結(jié)劑對(duì)固體飲料護(hù)胃功效的影響

2.3.1 促進(jìn)GES-1細(xì)胞增殖

如圖5所示，CE、CE+SiO2和CE+nSiO2均能促進(jìn)GES-1細(xì)胞的增殖，并呈現(xiàn)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。在31.25 μg/mL濃度條件下，CE+nSiO2組的細(xì)胞存活率為166%，明顯高于CE（116%）和CE+SiO2（132%）組（p<0.005）。而在62.5 μg/mL和125 μg/mL的濃度條件下，與CE組相比，其余兩個(gè)樣品組并無顯著差異?？梢?，SiO2和nSiO2的添加，對(duì)CE促進(jìn)GES-1細(xì)胞增殖的功效并無不利影響，其中較低濃度的nSiO2還有助于增強(qiáng)CE的功效。有研究也得到了類似的結(jié)果。Anja Wittig[22]等人研究了不同粒徑SiO2對(duì)人胃癌細(xì)胞的毒性影響，表明SiO2能較好刺激細(xì)胞增殖，在較低濃度時(shí)會(huì)增加的總細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞活力，但是隨著濃度的增加，則會(huì)有細(xì)胞毒性，并且不同的粒徑的SiO2對(duì)細(xì)胞毒性有不同的影響。Oberd?rster等人研究發(fā)現(xiàn)，nSiO2不會(huì)造成胃黏膜細(xì)胞GES-1細(xì)胞膜損傷、形態(tài)改變、細(xì)胞的凋亡與壞死[23]。Yixin Yang等人[24]研究10~50 nm范圍內(nèi)四種不同粒徑的nSiO2對(duì)GES-1細(xì)胞形態(tài)、生存力和膜完整性的影響，發(fā)現(xiàn)在低于100 μg/mL的濃度下細(xì)胞存活率幾乎沒有變化，甚至可以促進(jìn)細(xì)胞增殖；但若繼續(xù)增加nSiO2濃度和延長(zhǎng)時(shí)間，細(xì)胞活力則會(huì)顯著降低。

圖5 護(hù)胃固體飲料對(duì)正常GES-1細(xì)胞的影響Fig.5 Effect of solid drinks on GES-1 cell

2.3.2 GES-1細(xì)胞損傷模型

乙醇型胃黏膜損傷模型是一種急性胃黏膜損傷模型。乙醇能直接作用于胃黏膜，導(dǎo)致胃黏膜出現(xiàn)糜爛、出血、穿孔等損傷[25]。乙醇在引起胃黏膜氧化應(yīng)激的同時(shí)，伴隨著胃黏膜細(xì)胞的壞死和調(diào)亡[26]。因此選擇用乙醇對(duì)GES-1細(xì)胞進(jìn)行造模，在體外模擬乙醇造成的胃黏膜損傷。

圖6 為不同濃度的乙醇作用4 h后GES-1細(xì)胞的形態(tài)變化。GES-1細(xì)胞是由人胎兒胃黏膜上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染SV-40病毒后獲得的永生化的細(xì)胞系，可以在體外穩(wěn)定傳代，但保留了正常的細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)[27]。正常GES-1細(xì)胞為梭形，細(xì)胞之間排列稀疏，貼壁正常，漂浮的死亡細(xì)胞較少。與空白對(duì)照組相比，乙醇高濃度模型組（1.20、1.60、2.00 mol/L）出現(xiàn)明顯的細(xì)胞皺縮變小，成圓形，貼壁細(xì)胞數(shù)量減少，漂浮的死亡細(xì)胞增多，細(xì)胞間隙增大，即發(fā)生細(xì)胞損傷。有研究觀察到了同樣的現(xiàn)象，發(fā)現(xiàn)乙醇會(huì)引起GES-1細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)皺縮并形成調(diào)亡小體[28]。乙醇可在短時(shí)間內(nèi)誘導(dǎo)GES-1細(xì)胞調(diào)亡，且多為早期調(diào)亡，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)、乙醇濃度的增加，細(xì)胞調(diào)亡現(xiàn)象越為明顯[14]。

圖6 GES-1細(xì)胞經(jīng)不同濃度乙醇作用4 h的顯微鏡采集圖像Fig.6 Images of GES-1 cells treated with ethanol at different concentrations for 4 h using microscope

不同濃度的乙醇誘導(dǎo)的GES-1細(xì)胞損傷的存活率具有顯著性差異（p<0.05）。隨著乙醇濃度的升高，細(xì)胞的存活率逐漸降低，呈現(xiàn)一定的劑量濃度效應(yīng)。如圖7a~7c所示，當(dāng)乙醇作用時(shí)間分別為2、4、6 h、乙醇濃度為1.00 mol/L時(shí)，GES-1細(xì)胞的存活率均為50%~60%，隨著濃度繼續(xù)增大，細(xì)胞存活率繼續(xù)降低，當(dāng)乙醇濃度超過1.20 mol/L時(shí)，細(xì)胞存活率均小于40%，因此，乙醇造模濃度為1.00 mol/L。如圖7d所示，當(dāng)乙醇濃度為1.00 mol/L時(shí)，隨著作用時(shí)間的增加，細(xì)胞存活率逐漸降低，為保證實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可靠性，應(yīng)選擇細(xì)胞存活率為60%，相應(yīng)的乙醇作用時(shí)間為2 h。因此，選擇以1.00 mol/L乙醇誘導(dǎo)2 h，構(gòu)建GES-1細(xì)胞損傷模型。劉翠玲[29]的研究結(jié)果表明，細(xì)胞的存活率與乙醇濃度和造模時(shí)間密切相關(guān)，并且以0.80 mol/L乙醇作用4 h得到的細(xì)胞模型比較穩(wěn)定。

圖7 不同乙醇濃度及不同作用時(shí)間對(duì)細(xì)胞存活率的影響Fig.7 Effect of different ethanol concentrations and different action times on cell survival

2.3.3 預(yù)防乙醇損傷

以樣品作用GES-1細(xì)胞一段時(shí)間后以乙醇造模，分析對(duì)比細(xì)胞存活率的情況，可研究其對(duì)乙醇損傷胃黏膜細(xì)胞的預(yù)防作用，以此評(píng)價(jià)護(hù)胃功效[28]。如圖8所示，與空白對(duì)照組相比，模型組的細(xì)胞存活率明顯下降至55%，說明1.00 mol/L乙醇作用2 h對(duì)GES-1細(xì)胞具有明顯的損傷作用，表明GES-1細(xì)胞損傷模型造模成功。以CE、CE+SiO2或CE+nSiO2作用GES-1細(xì)胞24 h，可明顯提高受損GES-1細(xì)胞的存活率（p<0.005），并且呈現(xiàn)一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系，說明三種樣品都具有明顯的預(yù)防乙醇損傷GES-1細(xì)胞的作用。在31.25 μg/mL濃度下，CE+nSiO2組的細(xì)胞存活率為110%，明顯比CE（90%）和CE+SiO2（88%）組更高（p<0.005）。而在62.5 μg/mL和125 μg/mL濃度條件下，三個(gè)樣品組并無明顯差異。由此可見，SiO2和nSiO2對(duì)CE預(yù)防乙醇損傷胃黏膜細(xì)胞的功效并無不利影響，而較低濃度的nSiO2甚至還可增強(qiáng)CE對(duì)乙醇損傷胃黏膜細(xì)胞的預(yù)防作用。這與Zhao Zh等人[30]的研究結(jié)論一致，表明可以通過樣品對(duì)乙醇誘導(dǎo)的GES-1細(xì)胞顯示出保護(hù)活性來評(píng)價(jià)樣品的護(hù)胃功效。Zhang Y等人研究發(fā)現(xiàn)，nSiO2可以有效提高藥物的跨膜率[31]，這可能是CE對(duì)乙醇誘導(dǎo)胃黏膜細(xì)胞保護(hù)作用增強(qiáng)的機(jī)制之一。

圖8 護(hù)胃固體飲料對(duì)受損GES-1細(xì)胞存活率的影響Fig.8 Effect of solid drinks on the cell viability of injured GES-1 cells

3 結(jié)論

綜上所述，SiO2和nSiO2均有一定的抗結(jié)作用，其中SiO2的抗結(jié)效果略高于nSiO2，但二者并無明顯差異。SiO2和nSiO2的添加，對(duì)固體飲料促進(jìn)GES-1細(xì)胞增殖的功效并無不利影響，同時(shí)也不會(huì)影響其預(yù)防乙醇損傷胃黏膜細(xì)胞的功效，并且在濃度為31.25 μg/mL時(shí)，nSiO2還可有助于增強(qiáng)固體飲料的護(hù)胃功效。該研究可以為nSiO2的進(jìn)一步研究及其在功能性食品中的應(yīng)用提供參考。