周杰，冼煒瑩

(深圳大學(xué)總醫(yī)院，廣東 深圳 518055)

0 引言

尿滲透壓是評價腎臟濃縮稀釋功能的常見指標(biāo)，在腎臟疾病的診斷和鑒別診斷中具有重要作用。溶液的滲透壓與溶液的冰點下降值成比例關(guān)系，BS-100冰點滲透壓測定儀是通過測量溶液的冰點來計算溶液的滲透壓，用來測定各種溶液滲透壓的儀器。既往研究中多是討論滲透壓與腎臟疾病關(guān)系[1]，但是滲透壓測定儀性能驗證的討論還罕見報道，本研究旨在對BS-100冰點滲透壓儀的性能問題進行探討，驗證其精密度、正確度、參考范圍是否能滿足臨床在尿滲透壓方面的需求。

1 材料與方法

1.1 儀器

BS-100冰點滲透壓測定儀。

1.2 試劑

1.2.1 校準(zhǔn)品

BS-100冰點滲透壓測定儀低值定標(biāo)品300mOsm/L(批號202050801)、高值定標(biāo)品900mOsm/L(批號2020050802)。

1.2.2 質(zhì)控品

BS-100冰點滲透壓測定儀提供的兩水平質(zhì)控品，批號分別為46377、46388。

1.3 驗證實驗方法

1.3.1 精密度驗證

依據(jù)國家衛(wèi)生和計劃生育委員會發(fā)布的衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T492-2016文件《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》[2]進行精密度驗證。選擇兩個不同濃度的質(zhì)控品，連續(xù)測定五天，每天一個分析批，每批兩個濃度水平，每一個濃度水平同一樣品重復(fù)測定三次。如果因為質(zhì)量控制程序或操作問題判斷一批為失控，應(yīng)剔除數(shù)據(jù)，并增加執(zhí)行一個分析批。根據(jù)上述檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析，分別計算總均值、批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差、批間方差、批間標(biāo)準(zhǔn)差、批間變異系數(shù)(CV)，并與廠家聲明的允許誤差進行比較。

1.3.2 正確度驗證

依據(jù)WS/T 492-2016文件《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》[2]進行正確度驗證。選擇兩個濃度水平的定標(biāo)品，連續(xù)測定五天，每天一個分析批，每批兩個濃度水平，每一個濃度水平同一樣品重復(fù)測定兩次。計算均值、標(biāo)準(zhǔn)差以及置信區(qū)間，驗證靶值是否在置信區(qū)間。

1.3.3 參考區(qū)間驗證

依據(jù)WS/T402-2012文件《臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》[3]進行參考區(qū)間小樣本驗證，篩選參考個體20人，采樣并測定，測定值剔除離群值后若不滿20例需補足。將這20個測定值與需驗證的參考區(qū)間比較，若落在參考限外的測定值不超過兩個，則該參考區(qū)間可直接使用。若超過2個以上測定值超出，則需重新篩選20人，重復(fù)上述操作，若還是不能通過，則實驗室應(yīng)重新檢查所用的分析程序，考慮是否有人群差異，考慮是否需要自己建立參考區(qū)間。根據(jù)《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第4版[4]，正常人禁飲12小時后尿滲透壓的參考區(qū)間大于800mOsm/(kg·H2O)[4]，本次參考個體留樣要求也是嚴(yán)格遵循禁飲12小時后留取尿液樣本后檢測。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗證結(jié)果

根據(jù)表1，低濃度水平、高濃度水平質(zhì)控品的批內(nèi)CV分別為0.34%和0.12%，批間CV分別為0.16%和0.09%。CLIA'88允許誤差為20%，批內(nèi)CV均小于CLIA'88的1/4允許誤差；批間CV均小于CLIA'88的1/3允許誤差。同時與廠家聲明的濃度≤300mOsm/(kg·H2O)時，基本允許誤差是±4 mOsm/(kg·H2O)；濃度＞300mOsm/(kg·H2O)時，基本允許誤差是該濃度的±1%，重復(fù)誤差CV≤1.5%相符合。

表1 精密度驗證的原始數(shù)據(jù)計算結(jié)果

2.2 正確度驗證結(jié)果

根據(jù)表2，低濃度校準(zhǔn)品共檢測5批次，均值為301.16mOsm/(kg·H2O)，標(biāo)準(zhǔn)差為1.49，上置信限為302.69mOsm/(kg·H2O)，下置信限為299.63mOsm/(kg·H2O)。該校準(zhǔn)品靶值為300mOsm/(kg·H2O)，95%置信區(qū)間包括靶值。

表2 低濃度校準(zhǔn)品正確度驗證原始數(shù)據(jù)

根據(jù)表3，高濃度該校準(zhǔn)品共檢測5批次，均值為900.09mOsm/(kg·H2O)，標(biāo)準(zhǔn)差為2.43，上置信限為902.59mOsm/(kg·H2O)，下置信限為897.59mOsm/(kg·H2O)。該校準(zhǔn)品靶值為900mOsm/(kg·H2O)，95%置信區(qū)間包括靶值。

表3 高濃度校準(zhǔn)品正確度驗證原始數(shù)據(jù)

2.3 參考區(qū)間驗證結(jié)果

根據(jù)20份參考個體的結(jié)果，驗證參考范圍為9012.51-1287.9mOsm/(kg·H2O)?，F(xiàn)行禁飲12小時后尿的參考范圍為＞800mOsm/(kg·H2O)，20例參考個體的結(jié)果均在現(xiàn)行參考區(qū)間內(nèi)，因此可判定現(xiàn)行參考范圍有效。

3 討論

滲透壓指的是溶質(zhì)分子通過半透膜的一種吸水力量，其大小而與溶質(zhì)的分子量、半徑等特性無關(guān)，由溶質(zhì)顆粒數(shù)目的多少來決定。近年來尿滲透壓的臨床應(yīng)用越來越廣泛，對多種疾病的診斷治療和預(yù)后具有重要的意義。尿滲透壓又稱尿滲透量、尿滲量，是指腎臟排泄尿內(nèi)全部溶質(zhì)的微?？倲?shù)量，如電解質(zhì)、尿素、糖類、蛋白質(zhì)等。尿滲透壓濃度反映腎臟對溶質(zhì)和水相對排泄速度，不受溶質(zhì)顆粒大小和性質(zhì)的影響，只與溶質(zhì)微粒的數(shù)量有關(guān)。正常人尿液滲透 壓 約 為600～1000mOsm/(kg·H2O)，最 大 范 圍 為40～1400 mOsm/(kg·H2O)，正常人禁飲12小時后尿滲透壓的參考范圍大于800mOsm/(kg·H2O)[4]。腎臟是通過對尿液濃縮或稀釋作用來達到調(diào)節(jié)體液滲透量的平衡，測定禁飲12小時后尿滲透壓能更確切地反映腎臟的濃縮和稀釋功能。目前常用的尿滲透壓測定的方法為冰點下降法，溶液的冰點下降值與溶質(zhì)滲透壓的摩爾濃度成比例關(guān)系，儀器可通過測定溶液的冰點下降值來計算溶液的滲透壓。

為提高醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力，中國合格評定國家認(rèn)可委員會在CNAS-CL2012《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[5]中要求申請認(rèn)可的實驗室，要對檢驗的設(shè)備檢驗方法等的主要分析性能進行驗證，以保證其達到臨床的要求。在臨床工作中一臺良好性能的冰點滲透壓測定儀是正確檢測溶液滲透壓的重要保障，也是確保滲透壓的分析質(zhì)量的重要前提。本次性能驗證中只做了最基本的精密度、正確度和參考范圍三大內(nèi)容。

關(guān)于精密度方面，本次驗證過程體現(xiàn)出該儀器優(yōu)良的精密度，兩個濃度質(zhì)控品的批內(nèi)CV能做到0.34%和0.12%，結(jié)果的重復(fù)性和再現(xiàn)性非常好。關(guān)于正確度方面，常用的方法有兩種，一是分析具有定值的參考物質(zhì)，二是使用患者樣品來驗證，但是方式二要求有試驗方法和比較方法，受限于參考方法的可獲得性，所以本次方案采取了方式一用廠家提供的定標(biāo)品來做驗證，試驗結(jié)果也非常理想，經(jīng)過計算95%的置信區(qū)間均包括兩個水平校準(zhǔn)品的靶值濃度。

關(guān)于參考范圍方面，其涉及到臨床的診療方案顯得格外重要。由于廠家沒有提供相關(guān)參考范圍的數(shù)據(jù)，且滲透壓會受到飲食飲水的影響，我們實驗室經(jīng)過多次與臨床科室的溝通，確立以《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第4版[4]中提供的資料為標(biāo)準(zhǔn)，確立我們實驗室的檢測方案為只測定尿標(biāo)本，以禁飲12小時后留尿檢測的滲透壓＞800mOsm/(kg·H2O)作為參考范圍。在本次參考范圍驗證中，20例參考個體的結(jié)果均在現(xiàn)行參考范圍內(nèi)，可判定現(xiàn)行參考范圍有效。

綜上所述，本研究經(jīng)過對BS-100冰點滲透壓測定儀的驗證發(fā)現(xiàn)，該儀器的精密度好，正確度高，參考范圍有效，可以判定BS-100冰點滲透壓儀該儀器能基本滿足臨床檢驗的要求。但本研究也存在一些不足的地方，性能驗證的指標(biāo)還不夠全面，只是做了最基本的精確度、正確度和參考范圍的驗證，需要后續(xù)進一步的補充研究。