李玉鳳，丁世磊，趙立春,2※

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530200；2.廣西壯瑤藥工程技術(shù)研究中心，廣西 南寧 530200)

炎癥是在宿主系統(tǒng)受到病理刺激時(shí)機(jī)體所呈現(xiàn)出的各種保護(hù)性免疫應(yīng)答，是人類疾病中最為常見的病理過(guò)程，參與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展；目前臨床上常用的抗炎藥物有非甾體類抗炎藥和甾體類抗炎藥，而該類藥物具有一定的副作用，長(zhǎng)期服用可能會(huì)損害機(jī)體[1]。因此，新型抗炎藥物的研發(fā)已成為目前國(guó)內(nèi)外研究的一個(gè)熱點(diǎn)。

荔枝核（Litchi Semen seed）為無(wú)患子科植物荔枝（Litchi chinensis Sonn）的干燥成熟種子，其性溫，味甘、微苦，歸肝、腎經(jīng)，具有行氣散結(jié)、祛寒止痛的功效[2]，主要分布于亞熱帶和熱帶地區(qū)[3,4]。荔枝核作為一味傳統(tǒng)的中藥材，在歷代中國(guó)藥典上均有記載。研究發(fā)現(xiàn)荔枝核含有復(fù)雜的化學(xué)成分，主要為黃酮類、皂苷類、甾體類、氨基酸、糖類及微量元素等，具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗病毒、抗肝纖維化和降血糖等藥理活性，常用于治療睪丸炎、腫瘤、肝臟疾患、糖尿病和老年癡呆等[5-10]。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合整體性與系統(tǒng)性的特點(diǎn)，作為一門新興的藥理學(xué)分支學(xué)科，主要通過(guò)現(xiàn)代信息手段（如生物學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)和計(jì)算機(jī)科學(xué)等）分析單味中藥或者中藥復(fù)方“多成分”、“多靶點(diǎn)”的作用特點(diǎn)，通過(guò)構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)一步闡明荔枝核藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及分子作用機(jī)制[11,12]。基于此，本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法從分子、細(xì)胞及組織等不同水平探討荔枝核發(fā)揮抗炎作用的活性成分、關(guān)鍵靶點(diǎn)及其通路之間的作用關(guān)系，從而為荔枝核的新藥研究與開發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)庫(kù)與軟件

中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP）（http://tcmspw.com/tcmsp.php）；毒性與基因比較數(shù)據(jù)庫(kù)（Comparative Toxicogenomics Database,CTD）（http://ctdbase.org/）；全球蛋白質(zhì)資源數(shù)據(jù)庫(kù)（Universal Protein，Uniprot）（https://www.uniprot.org/）；生物信息在線工具韋恩Venny2.1（https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）；蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)庫(kù)String（https://string-db.org/）；基因富集分析的在線工具（WEB-based GEne SeT AnaLysis Toolkit,WebGestalt）（http://www.webgestalt.org/）；Cytoscape 3.8.0軟件。

1.2 荔枝核活性成分的篩選

以口服生物利用度（oral bioavilability,OB）≥30%、類藥性（drug likeness,DL）≥0.18為篩選原則，篩選出符合條件的荔枝核活性成分，進(jìn)一步通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)獲取與活性成分相對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)蛋白，去除重復(fù)的靶點(diǎn)蛋白[13,14]。通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)上述的靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，獲取相對(duì)應(yīng)的基因名。

1.3 疾病相關(guān)靶點(diǎn)篩選

以“inflammation”為關(guān)鍵詞，在CTD數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索炎癥相關(guān)基因[15]，去重后，得到炎癥相關(guān)基因。將1.2項(xiàng)下檢索到的荔枝核活性成分基因與炎癥基因?qū)隫enny2.1中，取其交集，在線制作韋恩圖，得到共同靶基因，即為荔枝核潛在的抗炎靶點(diǎn)基因。

1.4 構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)分析

將1.3項(xiàng)下獲取的共同靶基因所對(duì)應(yīng)的靶蛋白上傳到String數(shù)據(jù)庫(kù)中[16]進(jìn)行蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction,PPI）網(wǎng)絡(luò)分析，將結(jié)果以T SV格式輸出，導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件中構(gòu)建蛋PPI網(wǎng)絡(luò)圖，并進(jìn)行拓?fù)浞治?，獲取荔枝核抗炎的關(guān)鍵靶蛋白。

1.5 構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)并分析

將1.4項(xiàng)下的關(guān)鍵靶蛋白與荔枝核相對(duì)應(yīng)的活性成分上傳至Cytoscape 3.8.0軟件，構(gòu)建荔枝核活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖并進(jìn)行拓?fù)浞治觥?/p>

1.6 GO分析和KEGG通路富集分析

將1.4項(xiàng)下的關(guān)鍵蛋白導(dǎo)入WebGestalt在線數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因本體（Gene Ontology,GO）分析以及京都基因和基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）通路富集分析[17]，以顯著性P＜0.05、FDR＜0.05為閾值，進(jìn)行荔枝核抗炎相關(guān)的靶點(diǎn)蛋白在生物功能和信號(hào)通路中的富集分析，得到GO柱狀圖和KEGG信號(hào)通路柱狀圖。采用Cytoscape軟件構(gòu)建“關(guān)鍵活性成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖。

2 結(jié)果

2.1 荔枝核活性成分的篩選

經(jīng)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)檢索獲得72種荔枝核化學(xué)成分，通過(guò)OB≥30%、DL≥0.18進(jìn)行篩選，獲得荔枝核的活性成分8個(gè)，去除無(wú)靶點(diǎn)化合物，最終得到7個(gè)活性成分，具體信息見表1。通過(guò)TCMSP檢索活性成分所對(duì)應(yīng)的蛋白靶點(diǎn)，結(jié)合Uniprot數(shù)據(jù)以“Homo sapiens”為篩選條件，獲取靶點(diǎn)蛋白的基因名，去除重復(fù)項(xiàng)，共得到荔枝核活性成分作用靶點(diǎn)基因178個(gè)。

表1 荔枝核中主要活性成分Table 1 Main active components in seeds

表1 荔枝核中主要活性成分Table 1 Main active components in seeds

類藥性Drug likeness MOL001494 Mandenol 42.00 0.19 MOL002883 Ethyl oleate(NF) 32.4 0.19 MOL000358 beta-sitosterol 36.91 0.75 MOL000359 sitosterol 36.91 0.75 MOL000449 Stigmasterol 43.83 0.76 MOL000073 ent-Epicatechin 48.96 0.24 MOL000098 quercetin 46.43 0.28標(biāo)識(shí)TCMSP ID化合物Compounds口服生物利用度（%）Oral bioavailabilities

2.2 疾病相關(guān)靶點(diǎn)篩選

經(jīng)CTD數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，去除重復(fù)項(xiàng)，得到43 491個(gè)炎癥相關(guān)靶點(diǎn)基因，將上述獲得的荔枝核活性成分靶點(diǎn)基因與炎癥靶點(diǎn)基因通過(guò)Venny2.1進(jìn)行映射，繪制韋恩圖，獲取共同靶點(diǎn)基因162個(gè)，見圖1，提示該162個(gè)靶點(diǎn)為荔枝核潛在的抗炎靶點(diǎn)。

圖1 荔枝核的成分靶點(diǎn)與炎癥相關(guān)靶點(diǎn)的韋恩圖Fig.1 Venn plot of compositional targets and inflammation-related targets in seeds

2.3 構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)

將上述的共同靶點(diǎn)基因所對(duì)應(yīng)的靶蛋白上傳到String數(shù)據(jù)庫(kù)中，預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系。以中等置信度＞0.4為篩選條件[18]，將結(jié)果以TSV格式輸出保存，經(jīng)Cytoscape3.8.0軟件進(jìn)行分析，得到靶蛋白PPI網(wǎng)絡(luò)圖，該網(wǎng)絡(luò)圖包含節(jié)點(diǎn)131個(gè)，邊868條。根據(jù)String數(shù)據(jù)庫(kù)中度值（Degree）的大小，采用Cytoscape軟件對(duì)節(jié)點(diǎn)及邊的大小與顏色進(jìn)行設(shè)置，度值越大，節(jié)點(diǎn)越大，顏色越深，表示該點(diǎn)在PPI網(wǎng)絡(luò)中起著關(guān)鍵作用；邊越粗，表示蛋白質(zhì)之間的相互作用越大，見圖2。選取大于度值平均值（13.0）的靶點(diǎn)作為荔枝核的關(guān)鍵靶點(diǎn)，共54個(gè)。由圖2可見，腫瘤抑制蛋白（Cellular tumor antigen p53,TP53）、轉(zhuǎn)錄因子AP-1（Transcription factor AP-1,JUN）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（Vascular endothelial growth factor A,VEGFA）、表皮生長(zhǎng)因子（Pro-epidermal growth factor,EGF）、c-Fos人原癌基因（Proto-oncogene c-Fos,FOS）和白細(xì)胞介素-8（Interleukin-8,CXCL8）等靶點(diǎn)在該P(yáng)PI網(wǎng)絡(luò)中位于核心位置，提示在抗炎作用中起關(guān)鍵調(diào)控作用。

圖2 荔枝核靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)Fig.2 The protein interaction network of seed target

2.4 構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)并分析

2.4.1 構(gòu)建“活性成分-潛在靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò) 將荔枝核的活性成分Mandenol（1）、Ethyl oleate(NF)（2）、beta-sitosterol（3）、sitosterol（4）、Stigmasterol（5）、ent-Epicatechin（6）及quercetin（7）與相對(duì)應(yīng)的炎癥靶點(diǎn)蛋白（即共7個(gè)活性成分、162個(gè)潛在的靶點(diǎn)蛋白）導(dǎo)入Cytoscape3.8.0軟件，構(gòu)建活性成分-潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，如圖3所示，紅色代表荔枝核篩選的活性成分，綠色代表活性成分所作用的靶點(diǎn)，該網(wǎng)絡(luò)圖含有節(jié)點(diǎn)186個(gè)，邊228條，體現(xiàn)了荔枝核多成分、多靶點(diǎn)的作用。

圖3 活性成分-潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)Fig.3 The network of active components-potential targets

2.4.2 構(gòu)建“活性成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò) 將2.3項(xiàng)下PPI網(wǎng)絡(luò)獲取的54個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)與所對(duì)應(yīng)的6個(gè)活性成分（因化合物ent-Epicatechin與關(guān)鍵靶點(diǎn)無(wú)相互作用關(guān)系，故不在圖中顯示）構(gòu)建“荔枝核-活性成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖，如圖4，紫色正方形代表荔枝核、黃色菱形代表活性成分、藍(lán)色圓形代表活性成分所作用的靶點(diǎn)、紅色菱形代表疾病。由圖4可見，該網(wǎng)絡(luò)中含有節(jié)點(diǎn)62個(gè)、邊132條，其中作用靶點(diǎn)較多的活性成分是quercetin（47個(gè)）、beta-sitosterol（7個(gè)）和Stigmasterol（6個(gè)），提示以上3個(gè)成分是荔枝核發(fā)揮抗炎作用的關(guān)鍵活性成分。

圖4 活性成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)Fig.4 The network of active components-key targets-diseases

2.5 GO分析和KEGG通路富集分析

2.5.1 GO分析 將2.2項(xiàng)下獲取的162個(gè)潛在的抗炎靶點(diǎn)通過(guò)WebGestalt進(jìn)行生物過(guò)程（biological process,BP）、細(xì)胞組分（cellular component,CC）和分子功能（molecular function,MF）分析，以P＜0.05，F(xiàn)DR＜0.05為條件，篩選靠前的GO富集分析，如圖5所示。圖中縱坐標(biāo)表示標(biāo)準(zhǔn)化富集分?jǐn)?shù)，橫坐標(biāo)表示富集條目，其中GO-BP主要為應(yīng)激反應(yīng)（response to stimulus）、生物調(diào)節(jié)（biological regulation）和代謝過(guò)程（metabolic process）等；GO-CC主要為細(xì)胞膜（membrane）、細(xì)胞核（nucleus）和含蛋白質(zhì)復(fù)合物（proteincontaining complex）等；GO-MF主要為蛋白質(zhì)結(jié)合（protein binding）、離子結(jié)合（ion binding）和分子傳感器活性（molecular transducer activity）等。

圖5 GO富集分析Fig.5 The GO enrichment analysis

2.5.2 KEGG通路富集分析 對(duì)荔枝核潛在的162個(gè)靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行KEGG通路富集分析，篩選出顯著的前10條信號(hào)通路（P＜0.05，F(xiàn)DR＜0.05），見表2。主要涉及的信號(hào)通路為膀胱癌信號(hào)通路（Bladder cancer signaling pathway）、胰腺癌信號(hào)通路（Pancreatic cancer signaling pathway）、糖尿病并發(fā)癥AGE-RAGE信號(hào)通路（AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications）、非小細(xì)胞肺癌信號(hào)通路（non-small cell lung cancer signaling pathway）、前列腺癌信號(hào)通路（prostate cancer signaling pathway）、乙型肝炎病毒信號(hào)通路（HepatitisB signaling pathway）、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化（Fluid shear stress and atherosclerosis signaling pathway）、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒（Kaposi sarcoma-associated herpesvirus,KSHV signaling pathway）、人巨細(xì)胞病毒感染信號(hào)通路（Human cytomegalovirus infection signaling pathway）和癌癥信號(hào)通路（Pathways in cancer）。此外，通過(guò)KEGG通路富集分析條形圖直觀地展現(xiàn)了每條信號(hào)通路中荔枝核抗炎靶點(diǎn)的富集比，如圖6所示，縱坐標(biāo)表示富集通路的名稱，橫坐標(biāo)表示富集比。

圖6 KEGG通路富集分析Fig.6 The KEGG pathway enrichment analysis

表2 荔枝核抗炎關(guān)鍵靶點(diǎn)KEGG通路Table 2 The KEGG pathway of key anti-inflammatory targets of seeds

表2 荔枝核抗炎關(guān)鍵靶點(diǎn)KEGG通路Table 2 The KEGG pathway of key anti-inflammatory targets of seeds

通路編號(hào)Pathway ID信號(hào)通路Signaling pathway基因數(shù)量Number of genes FDR值hsa05200 Pathways in cancer 56 0 hsa05163 Human cytomegalovirus infection 30 0 hsa05167 Kaposi sarcoma-associated herpesvirus infection 28 0 hsa05161 Hepatitis B 30 0 hsa05418 Fluid shear stress and atherosclerosis 27 0 hsa04933 AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications 27 0 hsa05215 Prostate cancer 25 0 hsa05212 Pancreatic cancer 21 0 hsa05219 Bladder cancer 19 0 hsa05223 Non-small cell lung cancer 18 7.24E-15

2.6 構(gòu)建“關(guān)鍵活性成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)

將荔枝核162個(gè)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG富集分析，對(duì)前10條信號(hào)通路所對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)結(jié)合54個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)這10條信號(hào)通路中關(guān)鍵靶點(diǎn)占了31個(gè)，將這31個(gè)活性成分定義為核心靶點(diǎn)。此外，這些靶點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的活性成分與2.4項(xiàng)下預(yù)測(cè)的3個(gè)關(guān)鍵活性成分（beta-sitosterol、Stigmasterol、quercetin）一致。因此，進(jìn)一步認(rèn)為beta-sitosterol、Stigmasterol和quercetin這3個(gè)活性成分為荔枝核發(fā)揮抗炎作用的關(guān)鍵活性成分。

對(duì)荔枝核3個(gè)關(guān)鍵活性成分所對(duì)應(yīng)的31個(gè)核心靶點(diǎn)和10條信號(hào)通路構(gòu)建“關(guān)鍵活性成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖，見圖7。該網(wǎng)絡(luò)共有節(jié)點(diǎn)44個(gè)，邊140條。圖中紅色代表活性成分，綠色代表靶點(diǎn)，粉色代表通路。根據(jù)度值的大小對(duì)靶點(diǎn)的顏色、活性成分及信號(hào)通路節(jié)點(diǎn)的大小進(jìn)行設(shè)置，度值越大，靶點(diǎn)顏色越深，表示該點(diǎn)在該網(wǎng)絡(luò)中起著關(guān)鍵作用；節(jié)點(diǎn)越大，表示該成分為主要活性成分，或該通路為主要通路。由網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果顯示，槲皮素（quercetin）作用于29個(gè)核心靶點(diǎn)，提示該成分是荔枝核發(fā)揮抗炎作用的主要活性成分。其中參與癌癥通路（Pathways in cancer）的關(guān)鍵靶點(diǎn)有23個(gè)，分別為JUN、TP53、VEGFA、EGF、FOS、CXCL8、半胱天冬酶9（Caspase-9,CASP9）、核受體輔激活因子（Nuclear receptor coactivator 1,NCOA1）、類視黃醇X受體（Retinoic acid receptor RXR-alpha,RXRA）、基質(zhì)金屬蛋白酶2（72 kDa type IV collagenase,MMP2）、血紅素氧化酶1（Heme oxygenase 1,HMOX1）、表皮生長(zhǎng)因 子 2（Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2,ERBB2）、過(guò)氧化物酶體增生激活受體（Peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARG)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1(Signal transducer and activator of transcription 1-alpha/beta,STAT1)、細(xì)胞周期素依賴性激酶抑制因子1A（Cyclin-dependent kinase inhibitor 1,CDKN1A）、基質(zhì)金屬蛋白酶（Interstitial collagenase,MMP1)、重組人Bcl-2-樣蛋白1（Bcl-2-like protein 1,BCL2L1）、核因子E2相關(guān)因子2（Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,NFE2L2）、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因1（Retinoblastoma-associated protein,RB1）、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶P1（Glutathione S-transferase P,GSTP1）、醌氧化還原1（NAD（P）H dehydrogenase[quinone]1,NQO1）、蛋白激酶C beta II（Protein kinase C beta type,PRKCB）和胰島素樣生長(zhǎng)因子2（Insulin-like growth factor II,IGF2）（圖6），而且大部分靶點(diǎn)在前5個(gè)信號(hào)通路中存在數(shù)量較高，提示荔枝核可能是通過(guò)調(diào)控該信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮抗炎作用。此外，TP53、EGF、RB1、CDKN1A、CASP9、VEGFA和CXCL8這7個(gè)靶點(diǎn)在前10條信號(hào)通路里涉及到5條以上的信號(hào)通路，認(rèn)為這些靶點(diǎn)在荔枝核治療炎癥的方面起著關(guān)鍵的作用。

圖7 關(guān)鍵活性成分-核心靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)Fig.7 The key active component-core target-pathway network

3 討論

炎癥是臨床較為常見的一種病理過(guò)程，其發(fā)展一般分為3期，急性炎癥或炎癥早期主要表現(xiàn)為毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性亢進(jìn)、滲出和水腫，中期表現(xiàn)為血小板吸附及白細(xì)胞游走，晚期為肉芽組織增生[19]。中醫(yī)藥在治療炎癥疾病上具有悠久的歷史，其中荔枝核作為傳統(tǒng)的中藥材，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)其具有明顯的抗炎作用，可以通過(guò)下調(diào)促炎介質(zhì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-1（transforming growth factor-1,TGF-1）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemotactic protein 1,MCP-1）和巨噬細(xì)胞遷移抑制因子（macrophage migration inhibitory factor,MIF）等的表達(dá)，上調(diào)胞漿核因子B抑制蛋白（Inhibitor NF-B,IB）的表達(dá)，揭示荔枝核可能是通過(guò)抑制核轉(zhuǎn)錄因子-B（nuclear factor-B,NF-B）信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮抗炎作用[20]。

本研究通過(guò)TCMSP篩選得到荔枝核8個(gè)活性成分，根據(jù)TCMSP對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)，去除無(wú)靶點(diǎn)化合物，最終得到7個(gè)活性成分；通過(guò)PPI網(wǎng)絡(luò)獲取大于度值平均值的關(guān)鍵靶點(diǎn)54個(gè)；結(jié)合PPI網(wǎng)絡(luò)與KEGG信號(hào)通路分析，獲得3個(gè)關(guān)鍵活性成分，分別為槲皮素（quercetin）、-谷甾醇（beta-sitosterol）和豆甾醇（Stigmasterol）。而在這54個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)中，以上3個(gè)關(guān)鍵活性成分所對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)個(gè)數(shù)分別為47、7和6個(gè)，其中槲皮素是一種黃酮類化合物，具有顯著的抗炎、抗氧化、降血壓、抗心肌缺血及缺血再灌注損傷等作用[21]，認(rèn)為其主要是通過(guò)抑制炎性因子白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、白細(xì)胞介素-l（Interleukin-1,IL-1）及腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor-,TNF-）等的釋放，以及抑制環(huán)氧化酶（Cyclooxygenas,COX）和脂肪氧化酶（lipoxygenase,LOX）的酶活性，降低活性氧（reactive oxygen species,ROS）、一氧化氮（Nitric oxide,NO）及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（Inducible Nitric-Oxide Synthase,iNOS）的表達(dá)，從而緩解炎癥反應(yīng)[22]。-谷甾醇與豆甾醇為植物甾醇類化合物，在抗炎、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等方面表現(xiàn)出明顯的生物學(xué)活性[23]，此外，研究發(fā)現(xiàn)-谷甾醇和豆甾醇均可以抑制促炎介質(zhì)IL-6、IL-1、TNF-和環(huán)氧化酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）等的釋放，這可能是通過(guò)調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)錄因子NF-B和p38絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮抗炎的作用[24-26]。提示荔枝核發(fā)揮抗炎作用可能與以上3個(gè)活性成分密切相關(guān)。

GO和KEGG富集分析結(jié)果顯示，荔枝核主要參與應(yīng)激反應(yīng)、生物調(diào)節(jié)、代謝過(guò)程、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、含蛋白質(zhì)復(fù)合物、蛋白質(zhì)結(jié)合、離子結(jié)合和分子傳感器活性等分子反應(yīng)；主要涉及癌癥信號(hào)通路（Pathways in cancer signaling pathway）、人巨細(xì)胞病毒感染信號(hào)通路、乙型肝炎病毒信號(hào)通路、卡波濟(jì)肉瘤相關(guān)皰疹病毒信號(hào)通路、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化信號(hào)通路和糖尿病并發(fā)癥AGE-RAGE信號(hào)通路等多條信號(hào)通路。參與癌癥信號(hào)通路的關(guān)鍵靶點(diǎn)有23個(gè)，其中的7個(gè)靶點(diǎn)TP53、EGF、RB1、CDKN1A、CASP9、VEGFA和CXCL8在前10條信號(hào)通路里涉及到5條以上的信號(hào)通路，提示荔枝核可能直接或間接作用于這些關(guān)鍵靶點(diǎn)而發(fā)揮抗炎的作用。

TP53作為一種重要的抗癌基因，其在機(jī)體內(nèi)可以通過(guò)調(diào)控細(xì)胞的生理過(guò)程以及保持多種基因的穩(wěn)定來(lái)達(dá)到抗腫瘤作用，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，在癌癥病變中，50%以上的患者出現(xiàn)了該基因的突變[27]。此外，在炎癥發(fā)生的后期，同樣可見TP53基因發(fā)生突變，蛋白半衰期延長(zhǎng)，使得TP53蛋白的表達(dá)水平顯著升高[28]。EGF是發(fā)現(xiàn)于1962年的表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，是由53個(gè)氨基酸殘基組成的活性多肽，EGF家族主要包括轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-（transforming growth factor-,TGF-）、表皮生長(zhǎng)素（epiregulin,EREG）、肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子（hepari n-binding EGF,HB-EGF）、雙調(diào)蛋白（amphiregulin）、細(xì)胞素（ cellulin）和表皮細(xì)胞分裂原（epigen）[29]，而EGFR是表皮生長(zhǎng)因子受體，研究顯示，當(dāng)胃黏膜受到損害因子破壞時(shí)，EGF與EGFR可以進(jìn)行特異性結(jié)合，進(jìn)一步促進(jìn)胃黏膜上皮細(xì)胞的再生和修復(fù)，從而緩解炎癥反應(yīng)，到達(dá)治療胃潰瘍的作用[30]?？梢奣P53和EGF基因與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。本研究顯示，TP53、EGF、RB1、CDKN1A、CASP9、VEGFA和CXCL8等基因在荔枝核PPI網(wǎng)絡(luò)圖中的度值均較高，表明這些基因之間的相互作用關(guān)系較大，因此，我們推測(cè)荔枝核發(fā)揮抗炎作用的活性成分可能是槲皮素、-谷甾醇和豆甾醇；推斷荔枝核抗炎的主要作用靶點(diǎn)是TP53、EGF、RB1、CDKN1A、CASP9、VEGFA和CXCL8基因。

綜上所述，荔枝核為傳統(tǒng)抗炎中藥，具有多成分、多靶點(diǎn)和多通路的特點(diǎn)。本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)初步探討了荔枝核抗炎的主要活性成分與靶點(diǎn)的相互作用關(guān)系，結(jié)果顯示，荔枝核抗炎有效成分可能是槲皮素、-谷甾醇和豆甾醇等，主要作用靶點(diǎn)為TP53、EGF、RB1、CDKN1A、CASP9、VEGFA和CXCL8等，主要調(diào)控細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)、生物調(diào)節(jié)和代謝過(guò)程等生物過(guò)程，作用于癌癥、人巨細(xì)胞病毒感染、乙型肝炎病毒和AGE-RAGE等信號(hào)通路上，最終達(dá)到抗炎的作用。鑒于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的局限性，因此研究結(jié)果有待進(jìn)一步通過(guò)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究加以驗(yàn)證。