潘克琴，李丹丹，王華磊，陳松樹(shù)，羅春麗，李金玲

（貴州大學(xué)農(nóng)學(xué)院貴州省藥用植物繁育與種植重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025）

多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua）是中藥材黃精（Polygonati Rhizoma）的基源植物之一。其性平，味甘，入脾、腎、肺經(jīng)，具有補(bǔ)腎益精、滋陰潤(rùn)燥等功效[1]。多花黃精中含有多糖、低聚糖、甾體皂苷、蒽醌類及木脂素等成分，其中多糖是黃精中最重要的且含量最多的活性成分[2]。有研究表明，多花黃精多糖具有抗衰老、降血糖和降血脂等功效[3-6]。多花黃精的根莖一般每年向前伸長(zhǎng)1節(jié)，當(dāng)年新生的1節(jié)為1節(jié)齡，把齡節(jié)為1的節(jié)稱1年節(jié)齡，到第2年又新長(zhǎng)了一節(jié)與其相連接的上一節(jié)的節(jié)齡為2，把節(jié)齡為2的節(jié)稱2年齡節(jié)，依此類推[7]。在多花黃精的生長(zhǎng)過(guò)程中由于物質(zhì)之間的運(yùn)輸和重新分布，多花黃精的每一齡節(jié)物質(zhì)的分布不均衡[8]。

多花黃精的鮮品對(duì)咽喉有一定的刺激作用，需炮制去除麻味后方可入藥。目前本草大多記載九蒸九曬的炮制法[9-12]。黃精在蒸曬的過(guò)程中不僅外觀和口感發(fā)生很大的變化，其物質(zhì)基礎(chǔ)和藥效也有明顯改變[13,14]。目前研究主要集中于黃精九蒸九制的炮制機(jī)理方面，不同蒸制次數(shù)對(duì)不同齡節(jié)多花黃精的品質(zhì)影響尚未見(jiàn)研究報(bào)道。本研究探討了蒸制次數(shù)對(duì)不同齡節(jié)多花黃精主要品質(zhì)指標(biāo)變化，為今后多花黃精炮制工藝規(guī)范化、多花黃精的采收及初加工的研究提供理論參考和指導(dǎo)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

電子分析天平（AR224CN），純水機(jī)（30Liter PE Tank），101-4型電熱鼓風(fēng)干燥箱（Heratherm OMS 180），數(shù)顯恒溫水浴鍋（HH-6），紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（1510），高能萬(wàn)能粉碎機(jī)（2909）。

1.2 試劑

葡萄糖對(duì)照品（大連美侖生物技術(shù)有限公司，D0806AS）、人參皂苷Rb1對(duì)照品（索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)：20220904），蘆丁（索萊寶生物科技有限公司，批號(hào):MUST-17111601），水為蒸餾水，試劑均為分析純。

1.3 藥材

多花黃精購(gòu)自貴州省六盤(pán)水市六枝特區(qū)，經(jīng)貴州大學(xué)農(nóng)學(xué)院王華磊教授鑒定為多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua.）。

1.4 樣品制備

取生長(zhǎng)1年1齡節(jié)、生長(zhǎng)2年2齡節(jié)及生長(zhǎng)3年3齡節(jié)和1年、2年及3年混合齡節(jié)新鮮多花黃精根莖，進(jìn)行九蒸九制（每次蒸制時(shí)間在上一次的基礎(chǔ)上增加0.5 h，烘的時(shí)間定為每次2 h）：如第1次蒸1 h，烘2 h（一蒸一制）；第2次蒸1.5 h，烘2 h（二蒸二制）；第3次蒸2 h，烘2 h（三蒸三制）；第4次蒸2.5 h，烘2 h（四蒸四制）；第五次蒸3 h，烘2 h（五蒸五制）；第6次蒸3.5 h，烘2 h（六蒸六制）；第7次蒸4 h，烘2 h（七蒸七制）；第8次蒸4.5 h，烘2 h（八蒸八制）；第9次蒸5 h，烘2 h（九蒸九制）。總共取樣9次，于60℃制干并打粉備用。

2 方法

2.1 多花黃精多糖的測(cè)定

多花黃精多糖的測(cè)定[1]參照2020版《中華人民共和國(guó)藥典》一部。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度在0.033～0.362 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。測(cè)定多花黃精多糖含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=1.0135x+0.1841，R2=0.9992。

2.2 浸出物測(cè)定

浸出物的測(cè)定參照2020版《中華人民共和國(guó)藥典》通則和一部[1]。

2.3 黃酮測(cè)定

黃酮的測(cè)定參照[15]的方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度在0.1～0.5 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。測(cè)定黃精黃酮含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=1.4552x-0.0611，R2=0.9815。

2.4 總皂苷的測(cè)定

總皂苷的測(cè)定參照[16]的方法。標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：稱取人參皂苷Rbl標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)液。吸取該標(biāo)準(zhǔn)液60、120、180、240、300、360、420L置于具塞刻度試管中，揮干溶劑，顯色，經(jīng)UV-1102紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在200～800 nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示在550 nm處吸收峰最大，并于550 nm處測(cè)定吸光度值（Y），以皂苷含量對(duì)X值作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以吸光值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，含量C為橫坐標(biāo)，得回歸方程y=0.8187x+0.0077（R2=0.9958），線性范圍0.06～0.42 mg/g。

供試液制備：稱取干燥至恒重的黃精粉末1.00 g，加入15倍量80%的乙醇，60℃超聲提取30 min，提取2次，合并濾液至50 mL容量瓶中，加80%的無(wú)水乙醇溶解并稀釋到刻度，搖勻。

3 結(jié)果分析

3.1 九蒸九制對(duì)不同齡節(jié)多花黃精多糖的影響

從表1中可以看出多花黃精多糖含量隨著蒸制次數(shù)的增加呈現(xiàn)不斷下降的趨勢(shì)。1齡節(jié)多花黃精的多糖含量由一蒸一制后的21.98%降為九蒸九制后的9.59%；2齡節(jié)多花黃精的多糖含量由一蒸一制后的23.71%降為九蒸九制后的8.01%；3齡節(jié)多花黃精的多糖含量由一蒸一制后的20.87%降為九蒸九制后的5.49%，且第九蒸九制后多花黃精的多糖含量不符合藥典規(guī)定[1]；混合齡節(jié)多花黃精的多糖含量由一蒸一制后的19.87%降為九蒸九制后的11.60%。從變異系數(shù)混合齡節(jié)＜1齡節(jié)＜2齡節(jié)＜3齡節(jié)可以看出，九蒸九制對(duì)混合齡節(jié)多花黃精的多糖影響最小，1齡節(jié)次之。從表1中還可以得出1齡節(jié)多花黃精炮制方式最好的方法為一蒸一制，多花黃精多糖含量最高為21.98%；2齡節(jié)多花黃精炮制最好的方法也為一蒸一制，多花黃精的多糖含量最高為23.71%；3齡節(jié)和混合齡節(jié)最好的蒸制次數(shù)為三蒸三制，多花黃精多糖的含量分別為22.07%和22.84%。

表1 不同齡節(jié)多花黃精不同蒸制次數(shù)黃精多糖的比較Table 1 The comparison of Polygonatum sibiricum polysaccharides different ages （%）

3.2 九蒸九制對(duì)不同齡節(jié)黃精總皂苷的影響

從表2可以看出，不同齡節(jié)多花黃精總皂苷含量隨著蒸制次數(shù)的增加呈不斷上升的趨勢(shì)。

表2 不同齡節(jié)多花黃精不同蒸制次數(shù)黃精總皂苷的比較Table 2 The comparison of Polygonatum sibiricum totalsaponins in different ages （%）

在一蒸一制后2齡節(jié)多花黃精的總皂苷含量最高，為0.62%；混合齡節(jié)的最低，為0.54%；1齡節(jié)、2齡節(jié)和混合齡節(jié)多花黃精經(jīng)過(guò)第八蒸八制后總皂苷的含量趨于穩(wěn)定。從變異系數(shù)1齡節(jié)＜2齡節(jié)＜混合齡節(jié)＜3齡節(jié)可以看出，九蒸九制的次數(shù)對(duì)1齡節(jié)黃精的總皂苷含量影響最小，2齡節(jié)次之。

3.3 九蒸九制對(duì)不同齡節(jié)多花黃精浸出物的影響

從表3中可以看出，不同齡節(jié)多花黃精浸出物含量隨著蒸制次數(shù)增加呈現(xiàn)不斷下降的趨勢(shì)。在不同齡節(jié)的多花黃精中，1齡節(jié)多花黃精浸出物含量變異系數(shù)為3.81%，說(shuō)明蒸制次數(shù)對(duì)于1齡節(jié)多花黃精浸出物的含量影響最小；3齡節(jié)多花黃精的變異系數(shù)最大為6.42%，說(shuō)明蒸制次數(shù)對(duì)3年齡節(jié)多花黃精浸出物的含量影響最大，一蒸一制后浸出物含量由81.75%下降到九蒸九制后的68.65%。

表3 不同齡節(jié)多花黃精不同蒸制次數(shù)浸出物的比較Table 3 The comparison of Polygonatum sibiricum Extracts in Different Ages （%）

3.4 九蒸九制對(duì)不同齡節(jié)多花黃精總黃酮的影響

從表4中可以看出，不同齡節(jié)多花黃精總黃酮含量隨著蒸制次數(shù)增加而不斷上升。1齡節(jié)多花黃精總黃酮含量從一蒸一制的0.08%上升到九蒸九制的0.47%；蒸制次數(shù)對(duì)2齡節(jié)和3齡節(jié)多花黃精總黃酮含量的影響差異不大；還可以得出蒸制次數(shù)對(duì)混合齡節(jié)多花黃精的總黃酮的影響最小。不同齡節(jié)多花黃精的總黃酮含量均在第九蒸九制后含量達(dá)到了最高。

表4 不同齡節(jié)多花黃精不同蒸制次數(shù)總黃酮的比較Table 4 The comparison of Polygonatum sibiricum tota lflavonoids of sibiricum in different ages （%）

4 討論

多花黃精多糖含量隨著蒸制次數(shù)的增加，其整體上含量有明顯的下降，這是因?yàn)樵谂谥七^(guò)程中大量黃精多糖在高濕度和高溫環(huán)境下水解成低聚糖、單糖[17,18]。從黃精多糖的含量得出1齡節(jié)和2齡節(jié)多花黃精炮制的最好方法為一蒸一制，黃精多糖含量最高，分別為21.98%和23.71%；3年齡節(jié)和混合齡節(jié)多花黃精最好的蒸制次數(shù)為三蒸三制，黃精多糖的含量分別為22.07%和22.84%。皂苷含量隨著多花黃精炮制次數(shù)的增多皂苷含量逐步增加，其所有齡節(jié)在八蒸八制后皂苷含量基本穩(wěn)定，這與楊正賢等[19]對(duì)于黃精九蒸九制過(guò)程中皂苷含量在四蒸四制趨于穩(wěn)定的結(jié)果不一樣，可能是由于規(guī)定蒸制的時(shí)間不同導(dǎo)致的。浸出物含量隨蒸制次數(shù)的增加而下降，這與張洪坤等[20]得出的結(jié)論是一致的。黃酮含量在一蒸一制后，2齡節(jié)最高，為0.16%，這與陳怡等[7]研究多花黃精不同齡節(jié)得出2年齡節(jié)的黃酮最高結(jié)論吻合。本研究中多花黃精黃酮含量隨著炮制時(shí)間和炮制次數(shù)的增加也在增加，均在九蒸九制的時(shí)候達(dá)到最高。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中，不同齡節(jié)多花黃精及不同指標(biāo)應(yīng)選擇不同的蒸制方式，這樣才能更好地發(fā)揮藥材本身的作用。