買占海，盧亞賓，李建龍，徐文慧，李 海，況 玲*

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；2.昭蘇縣畜牧獸醫(yī)站，新疆昭蘇 835600)

隨著現(xiàn)代馬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，人們?cè)絹碓絻A向于選擇養(yǎng)殖高性能的馬匹。新疆作為馬產(chǎn)業(yè)大省也在積極努力的培育屬于自己的高性能的伊犁馬，但由于新疆冬季寒冷而漫長的特點(diǎn)，飼養(yǎng)環(huán)境和飼養(yǎng)方式造成馬的流產(chǎn)率高。在基層，馬匹保胎由于受到診療設(shè)備的缺乏，以及馬獸醫(yī)和繁育員等職業(yè)技術(shù)人員的缺乏而不能得到有效的實(shí)施。同時(shí)，具有保胎功效的西藥多為激素類藥物，副作用多，治療效果不理想，上述各類因素均制約著養(yǎng)馬業(yè)的發(fā)展。

傳統(tǒng)的中醫(yī)學(xué)對(duì)流產(chǎn)的認(rèn)識(shí)有其獨(dú)特的見解。中醫(yī)將流產(chǎn)的病因分為腎虛、熱血、氣血虛、跌倒傷胎?，F(xiàn)代中醫(yī)學(xué)將流產(chǎn)分為脾腎兩虛，肝郁氣滯，氣血虛血淤，血熱，痰熱，腎虛損等證型[1]。大多數(shù)中醫(yī)認(rèn)為脾腎虧虛是導(dǎo)致流產(chǎn)的關(guān)鍵，在防治上首要就是健脾補(bǔ)腎。脾腎和洽，氣血均補(bǔ)，固胎元主要在先天，養(yǎng)胎體主要在后天，可以補(bǔ)充胞宮的生理功能[2-4]。本實(shí)驗(yàn)室研制的補(bǔ)氣血、保肝腎中草藥方劑具有補(bǔ)氣血、和精血、調(diào)理胃經(jīng)、溫肝補(bǔ)脾等功效，本試驗(yàn)擬研究補(bǔ)氣血、保肝腎中草藥方劑對(duì)孕馬血液指標(biāo)的影響，觀察是否具有保胎的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 13匹懷孕的英國純血母馬，來自新疆伊犁昭蘇縣某馬場(chǎng)。

1.1.2 藥材 白術(shù)、黃芪、黨參、當(dāng)歸、熟地、白芍、續(xù)斷、黃芩、砂仁、炙甘草等中草藥，購自昭蘇縣安泰大藥房。

1.1.3 主要儀器 血常規(guī)檢測(cè)儀(PE-6800VET)和高速離心機(jī)(D-78532 Tuttligen)，深圳市普康電子有限公司產(chǎn)品；血液生化儀(VET Test 8008 ANALYZER)，愛德士VT8008公司產(chǎn)品；干烤箱(北京GD65-1型)，北京廣營公司產(chǎn)品；采血管、離心管、抗凝管，新疆鼎楓生物科技有限公司產(chǎn)品。

2 方法

2.1 中草藥煎制

將中草藥方劑(白術(shù)、黃芪、黨參、當(dāng)歸、熟地、白芍、續(xù)斷、黃芩、砂仁、炙甘草等)用粉碎機(jī)粉碎，把粉劑的中藥置于容器內(nèi)倒入相當(dāng)中藥體積3倍的水，浸泡1 h，先武火煮沸，再用文火煮30 min并不斷的攪拌，將藥煮至糊狀，冷卻待用。

2.2 前中期給藥及血液指標(biāo)測(cè)定

懷孕4～6個(gè)月的英純血孕馬進(jìn)行2個(gè)療程給藥，分別在母馬懷孕至4月齡120 d(第1療程)和6月齡180 d(第2療程)給藥，每個(gè)療程給藥5 d。每日晚上入圈后進(jìn)行喂藥。第1個(gè)療程第1次喂藥前0.5 h和每個(gè)療程喂藥結(jié)束后次日早晨采集血樣，抗凝血檢測(cè)血常規(guī)，全血分離血清，測(cè)定生化指標(biāo)及IGF-Ⅰ、IFN-γ和雌激素、孕酮。將檢測(cè)結(jié)果運(yùn)用SPSS16.0分析軟件進(jìn)行單因素方差顯著性分析。

2.3 中后期給藥及血液指標(biāo)測(cè)定

懷孕8～10個(gè)月的英純血孕馬同樣進(jìn)行兩個(gè)療程的給藥，分別在母馬懷孕至8月齡240 d(第3療程)和10月齡300 d(第4療程)給藥，給藥方法和測(cè)定指標(biāo)與前中期的給藥相同。

3 結(jié)果

3.1 血液生化分析結(jié)果

通過前中期給藥結(jié)果顯示，第1、第2療程后血清白蛋白(ALB)極顯著高于療程前(P<0.01)；直接膽紅素含量第1療程后極顯著高于療程前和第2療程(P<0.01)；膽固醇(CHOL)第2療程后顯著低于第1療程(P<0.05)，第1療程顯著高于療程前(P<0.05)；其余指標(biāo)差異不顯著(P>0.05)(表1)。

中后期給藥后的總蛋白(TP)含量第4療程后極顯著高于第3療程和療程前(P<0.01)；膽固醇(CHOL)含量第4療程后極顯著高于療程前和第3療程(P<0.01)；其余生化指標(biāo)在療程前與第3、4療程間差異不顯著(P>0.05)(表2)。

3.2 血液生理分析結(jié)果

前中期給藥的血液各項(xiàng)生理指標(biāo)檢測(cè)無顯著變化(P>0.05)，均在正常參考范圍內(nèi)(表3)。

中后期給藥的血液各項(xiàng)生理指標(biāo)除淋巴細(xì)胞數(shù)第4療程后顯著高于第3療程(P<0.05)，其余指標(biāo)無顯著變化(P>0.05)，變化均在正常參考范圍內(nèi)(表4)。

3.3 細(xì)胞因子及激素分析結(jié)果

前中期給藥第2療程后孕馬雌激素顯著高于療程前(P<0.05)，其余指標(biāo)孕酮、IGF-Ⅰ及IFN-γ均無顯著變化(P>0.05)(表5)。

中后期給藥第4療程后孕馬雌激素顯著低于療程前(P<0.05)，其余指標(biāo)孕酮、IGF-Ⅰ及IFN-γ均無顯著變化(P>0.05)(表6)。

4 討論

安全有效是中藥保胎的原則，實(shí)驗(yàn)復(fù)方保胎中藥具有養(yǎng)肝腎、補(bǔ)血等功能，通過血清的生化檢測(cè)，對(duì)肝功能及腎臟功能進(jìn)行檢查。妊娠期孕馬給藥后，進(jìn)行肝功和腎功的生化檢查，評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)復(fù)方中藥對(duì)孕馬的肝功和腎功的損害作用[5]。

實(shí)驗(yàn)復(fù)方中藥在妊娠前中期用藥后，母體血清中白蛋白的含量呈現(xiàn)直線升高的趨勢(shì)，但總蛋白的含量沒有明顯的升高。在母體沒有造成失水過多的疾病的前提下，血液中白蛋白含量升高，說明肝臟蛋白合成代謝增強(qiáng)，有利于母體內(nèi)難溶于體液的分子量較小的有機(jī)物和無機(jī)鹽離子的運(yùn)輸。直接膽紅素含量在第1療程急劇升高，但第2療程又降至療程前，這可能是機(jī)體自我調(diào)節(jié)的生理過程。由總蛋白、直接膽紅素、總膽紅素等反應(yīng)肝功能指標(biāo)的結(jié)果分析可知用藥前后比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明該方劑對(duì)孕馬的肝臟功能無損害；肌酐和尿素氮是檢查腎臟功能的重要指標(biāo)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)指標(biāo)在療程前后比較差異不顯著，說明實(shí)驗(yàn)方劑對(duì)妊娠前期的孕馬的腎臟功能沒有損害。通過白蛋白含量及其作用機(jī)制，可知中藥方劑可以起到保護(hù)腎臟的功能。膽固醇含量變化發(fā)現(xiàn)第1療程含量急劇升高并超過正常范圍，第2療程含量又下降并未低于正常范圍，這可能因?yàn)橹兴帉?duì)機(jī)體的調(diào)節(jié)作用造成的。妊娠中后期檢查肝功和腎功均正常，總蛋白及膽固醇含量的升高均有利于緩解妊娠中后期胎兒營養(yǎng)需要的壓力。

血液生理結(jié)果顯示，妊娠前中期療程前與療程結(jié)束后比較均不顯著。妊娠中后期給藥結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞在療程結(jié)束后整體呈現(xiàn)顯著升高，第1療程明顯降低可能與機(jī)體的自我調(diào)節(jié)有關(guān)；粒細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)升高較明顯，造成機(jī)體妊娠期的免疫水平不同，中藥調(diào)節(jié)作用不同。試驗(yàn)方劑通過提高淋巴細(xì)胞數(shù)量及粒細(xì)胞數(shù)量使得白細(xì)胞數(shù)目增多，增強(qiáng)孕馬免疫力，可以提高由于環(huán)境的變化和營養(yǎng)不良引起的免疫力降低對(duì)機(jī)體帶來的危害[6]。

研究表明，孕酮水平在4個(gè)療程中保持相對(duì)穩(wěn)定，孕酮的主要作用是保持胎兒的正常發(fā)育以及子宮的穩(wěn)定，如果孕酮的濃度在妊娠后期下降過快會(huì)引起子宮收縮而引發(fā)流產(chǎn)。適當(dāng)?shù)拇贫?E2)水平對(duì)早期妊娠的維持起著重要作用[7]。當(dāng)E2濃度過低時(shí)很難維持妊娠，當(dāng)E2水平的快速升高到正常范圍表現(xiàn)胎兒正常且胎盤功能良好[8-9]。雌激素能促進(jìn)受體介導(dǎo)的LDL膽固醇的攝取，這對(duì)胎盤甾體激素的產(chǎn)生極為重要。雌激素通過改變血管選擇性通過，使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)輸送加快。由分析結(jié)果可知中藥方劑對(duì)E2和孕酮(P4)的作用較顯著。妊娠前中期所有治療結(jié)束后E2顯著增多，P4顯著降低；E2/P4的比值升高可以提高胚胎著床率[10]；妊娠中后期所有療程結(jié)束后E2和P4都降低，但E2/P4的比值變化不大，有利于維持后期妊娠。該方劑可以升高妊娠前中期孕馬的E2/P4的比值升高，這與前期胚胎著床的激素要求相一致；E2能使子宮收縮運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)，使子宮內(nèi)膜增生、宮頸口松弛、分泌粘液，有促進(jìn)分娩的作用，尤其在妊娠后期。妊娠后期的激素的比值變化不大，但E2的含量在用藥后顯著減少。該方劑降低E2的含量，減弱子宮的收縮活性，起到保胎作用，提高妊娠率。該中藥方劑對(duì)IGF-Ⅰ和IFN-γ的作用效果不顯著。IFN-γ在妊娠前后期治療結(jié)束后均呈現(xiàn)減少；IGF-Ⅰ在妊娠前中后期療程結(jié)束后均呈現(xiàn)一定幅度的升高，方劑中藥對(duì)孕馬的細(xì)胞因子可能有一定作用，試驗(yàn)的療程較短，未能達(dá)到顯著作用。

本研究表明該中草藥方劑能夠有效調(diào)節(jié)孕馬血液生理及激素水平的變化，對(duì)孕馬肝、腎功能無損傷，可以適應(yīng)性調(diào)節(jié)激素水平，可以應(yīng)用于防治孕馬流產(chǎn)，提高馬匹健康繁殖。