馬帥，王超之，劉枕，高新貞

淄博市食品藥品檢驗研究院，山東 淄博 255086

氧氟沙星為喹諾酮類抗菌藥［1］，通過抑制細菌的 DNA 旋轉(zhuǎn)酶從而抑制 DNA 復(fù)制而發(fā)揮作用。具有抗菌譜廣、抗菌活性強的特點，對革蘭陽性菌、陰性菌群均有較強的抗菌作用。氧氟沙星凝膠用于敏感細菌所致的皮膚軟組織細菌感染性疾病，如毛囊炎、癤腫、膿皰瘡，外傷感染及濕疹感染等［2］。由于凝膠劑具有涂展性好、易于清洗、透皮吸收性能好等突出的優(yōu)勢，其應(yīng)用范圍越來越廣泛［3］。《中國藥典》2020 年版四部［4］規(guī)定了多劑量凝膠制劑一般應(yīng)添加適當(dāng)抑菌劑，但筆者尚未發(fā)現(xiàn)氧氟沙星凝膠中抑菌劑進行測定的報道。氧氟沙星凝膠共有10 個批準文號，本次研究涉及4 個批準文號，即四個廠家生產(chǎn)的氧氟沙星凝膠，在說明書或包裝盒均未標識抑菌劑種類和含量。為了更好的控制氧氟沙星凝膠的質(zhì)量，本研究在參考文獻基礎(chǔ)上，建立了HPLC 法測定氧氟沙星凝膠中三種抑菌劑含量的方法［5-10］。

1 儀器與試藥

LC-20AT 高效液相色譜儀，SPD-20A UV/VIS檢測器（日本島津公司）；METTLER AE240 電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；KS-300E 超聲波清洗機（寧波科生儀器廠）。

對照品：羥苯甲酯（中國食品藥品檢定研究院，批號：100278-201705，含量為100.0%）、羥苯乙酯（中國食品藥品檢定研究院，批號：100847-201604，含量為99.9%）、羥苯丙酯（中國食品藥品檢定研究院，批號：100444-201403，含量為99.6%）；樣品涉及4 個廠家的4 個批號（編號為廠家01～04；批號：1912031、191102、200911、200639；批準文號：H20065834、H32024996、H20083392、H20 103273；規(guī)格：20 g/支、15 g/支、20 g/支、15 g/支）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm；5 μm）；流動相為甲醇-1%冰醋酸溶液（60∶40），流速為1.0 mL/min，柱溫：35 ℃，檢測波長254 nm。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取羥苯甲酯（10.10 mg）、羥苯乙酯（10.12 mg）、羥苯丙酯（10.25 mg），分別置于50 mL 容量瓶中，加流動相稀釋定容，得對照品儲備液。分別取羥苯甲酯儲備液300 μL、羥苯乙酯儲備液400 μL、羥苯丙酯儲備液600 μL置于50 mL 容量瓶，加流動相稀釋定容，得混合對照品溶液（羥苯甲酯1.212 μg/mL、羥苯乙酯1.618 μg/ mL、羥苯丙酯2.450 μg/ mL）。取混合對照品溶液10.0 mL 至50 mL 容量瓶，流動相稀釋定容，作為對照品溶液（羥苯甲酯0.242 μg/ mL、羥苯乙酯0.324 μg/ mL、羥苯丙酯0.490 μg/ mL）。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品適量，取約25 mg，精密稱定，置于25 mL 容量瓶中，加少量流動相稀釋，超聲處理20 min，放冷，加流動相定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

分別精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗：A.對照品；B.樣品（廠家01）

2.4 線性關(guān)系考察

分別取混合對照品溶液0.4、2.0、10.0、25.0至50 mL 容量瓶，流動相稀釋定容。與混合對照品溶液組成5 個不同濃度的標準曲線工作溶液。以對照品進樣濃度（μg/mL）為橫坐標，以對照品峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程。取儀器信噪比10∶1 時進樣量為各成分的定量限，信噪比為3∶1 時進樣量為各成分的檢出限。回歸方程、線性范圍、定量限及檢出限見表1。

表1 線性關(guān)系、檢測限、定量限結(jié)果

2.5 精密度試驗

取“2.2.1”項下的對照品溶液連續(xù)進樣6 次，結(jié)果羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯的RSD 分別為0.41%、0.57%、0.24%，表明結(jié)果良好。

2.6 重復(fù)性試驗

取同一批樣品（廠家01），按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法，平行制備6 份；按2.1 項下色譜條件測定。結(jié)果羥苯甲酯、羥苯丙酯未檢出，羥苯乙酯RSD 為1.66%，試驗結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取“2.2.1”項下的對照品溶液及供試品溶液（廠家01）置室溫下放置，分別在0、2、4、8、16、24 h 各進樣10 μL，測定對照品溶液中的羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯RSD 分別為0.39%、0.27%、0.28%，供試品溶液中的羥苯乙酯RSD 為0.29%，表明溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗

精密稱取供試品（廠家01）約65 mg，至100 mL 容量瓶，加少量流動相稀釋，超聲處理20 min，放冷，加流動相定容至刻度，搖勻，濾過，流動相定容至刻度，精密量取續(xù)濾液5 mL 至10 mL 容量瓶，分別精密加混合對照品溶液1.8、2.0、2.4 mL，流動相定容至刻度，每個濃度平行3 份。結(jié)果見表2。

表2 回收率的試驗結(jié)果

2.9 樣品測定

取四批樣品，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

羥苯甲酯、乙酯、丙酯是廣譜型抗菌防腐劑，在藥物制劑中得到了廣泛的應(yīng)用［11-12］。抑菌劑使用量不足，會增加微生物污染的風(fēng)險，如使用量過多，會產(chǎn)生毒性。因此，抑菌劑的合理使用和質(zhì)量控制已經(jīng)成為保證藥物安全性、有效性的關(guān)鍵問題之一［13］。不同生產(chǎn)企業(yè)的氧氟沙星凝膠均只標明主成分，未注明輔料、防腐劑或抑菌劑的種類和含量。不同抑菌劑抑菌作用不同，抑菌能力會有很大變化，抑菌劑存在過度或缺失添加的風(fēng)險。建議生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品說明書中標注使用的抑菌劑種類及含量，便于臨床用藥的選擇。

本試驗分別以PhenomenexOOG-4435EO C18（4.6 mm×250 mm；5 μm）和Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm；5 μm）兩種色譜柱進行試驗，發(fā)現(xiàn)均可對樣品進行有效分離，且峰型良好。最終選擇Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm；5 μm）為本試驗的色譜柱。

參考2020 年版《中國藥典》四部藥用輔料標準［4］，羥苯甲酯、羥苯乙酯及羥苯甲酯在流動相為甲醇-1%冰醋酸溶液（60∶40），檢測波長254 nm的色譜條件下各組分峰與相鄰色譜峰的分離效果良好，且保留時間適中，可作為抑菌劑的含量測定方法。

氧氟沙星凝膠為半固體制劑，嘗試了水、甲醇等做提取溶劑，以流動相作為提取溶劑效果最好。

該研究建立了高效液相色譜法對三種菌劑同時進行測定，能有效檢測氧氟沙星凝膠中抑菌劑的加入量，提高檢驗效率，為減少不良反應(yīng)的發(fā)生提供可靠保證。