馬培志 陳金秀

(河南省人民醫(yī)院藥學(xué)部，河南 鄭州 450003)

高脂血癥是目前我國最常見的慢性病之一，不僅增加了動脈粥樣硬化的風(fēng)險，還與冠心病、腦卒中、高血壓、2型糖尿病等密切相關(guān)〔1〕。老年人體力活動和機(jī)體代謝功能下降，高脂血癥的發(fā)生率更高〔2〕；藥物治療是目前控制血脂最有效的方法，但長期服用他汀類降脂藥物會增加患者的肝臟負(fù)擔(dān)，提升橫紋肌溶解的發(fā)生率，在老年人群中更為顯著。探索調(diào)節(jié)血脂的中藥成分，對開發(fā)具有良好降脂功效的中成藥，提升老年高脂血癥患者的病情控制效果具有重要意義。相關(guān)研究顯示，多數(shù)黃酮類化合物具有明顯的抗氧化活性〔3〕；本研究旨在探討葛根總黃酮對高脂血癥大鼠脂代謝指標(biāo)、氧化應(yīng)激指標(biāo)及肝組織病理形態(tài)的影響。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物 清潔級雄性SD大鼠72只，7周齡，體重170～190 g，購于鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，實(shí)驗(yàn)動物許可證號：SCXK(豫)2005-0001。燈光模擬晝夜交替，溫度23～25℃，濕度50%～60%，自由飲水和進(jìn)食。

1.2主要試劑和儀器 葛根總黃酮購于天津市軒宏醫(yī)藥技術(shù)有限公司，其中葛根總黃酮總收率為原葛根質(zhì)量的1.30%，含量以總黃酮計65.95%，以0.1 mmol/L氫氧化鈉助溶后加入雙蒸餾水配成5 mg/ml溶液。辛伐他汀片購于福安藥業(yè)集團(tuán)煙臺只楚藥業(yè)有限公司，以90%乙醇助溶后加入雙蒸餾水配成5 mg/ml溶液。血脂生化檢測試劑盒購于北京信諾金達(dá)生物有限公司；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醇、谷胱甘肽過氧化物酶檢測試劑盒均購于上海佳和生物有限公司。Allegra 25R高速冷凍離心機(jī)購于美國貝克曼公司；手持式組織勻漿機(jī)購于上海弗魯克科技有限公司；倒置顯微鏡購于日本奧林巴斯公司。

1.3高脂血癥模型制備及分組干預(yù) 72只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，隨機(jī)數(shù)字法分為正常對照組、模型組、辛伐他汀組、葛根總黃酮低劑量組、葛根總黃酮中劑量組、葛根總黃酮高劑量組，每組12只。正常對照組僅給予普通飼料；另外5組給予高脂飼料：2%膽固醇、20%豬油、5%蛋白粉、5%蔗糖、68%基礎(chǔ)飼料，共喂養(yǎng)9 w。辛伐他汀組同時給予辛伐他汀10 mg/(kg·d)干預(yù)；葛根總黃酮低、中、高劑量組分別給予100、150、200 mg/(kg·d)葛根總黃酮進(jìn)行干預(yù)；模型組給予等量的生理鹽水。均制成10 ml/kg藥液灌胃，連續(xù)給藥9 w。

1.4標(biāo)本采集與指標(biāo)檢測 分別于實(shí)驗(yàn)開始及藥物干預(yù)3、6、9 w時記錄各組大鼠體重。實(shí)驗(yàn)開始和藥物干預(yù)9 w后，禁食不禁水12 h，眼眶靜脈取血，2 000 r/min離心15 min，收集血清，檢測各血脂指標(biāo)水平。藥物干預(yù)后9 w摘取大鼠肝臟，稱量肝濕重，肝指數(shù)=肝濕重/體重×100%。生理鹽水沖洗肝組織，取其中一部分研磨后進(jìn)行組織勻漿，4℃ 12 000 r/min離心20 min，收集上清液，測定各血脂指標(biāo)和SOD、丙二醇、谷胱甘肽過氧化物酶水平。

1.5肝組織病理形態(tài)觀察 取另一部分肝組織，多聚甲醛固定24 h，固定、包埋后4 μm切片，進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色，倒置顯微鏡下觀察6組大鼠肝組織病理形態(tài)改變。

1.6統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS21.0軟件進(jìn)行方差分析和t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1各組肝指數(shù)和體重比較 模型組大鼠3～9 w體重明顯高于正常對照組，9 w后肝指數(shù)明顯高于正常對照組(P<0.05)，辛伐他汀組、葛根總黃酮各劑量組明顯低于模型組(P<0.05);9 w后肝指數(shù)明顯低于模型組(P<0.05)；葛根總黃酮高劑量組6～9 w體重明顯低于辛伐他汀組(P<0.05)。見表1。

表1 各組肝指數(shù)和體重水平比較

2.2各組血脂水平比較 第9周后，模型組血清三酰甘油、總膽固醇、低密度脂蛋白水平明顯高于正常對照組，高密度脂蛋白水平明顯低于對照組(P<0.05)；辛伐他汀組、葛根總黃酮各劑量組血清三酰甘油、總膽固醇、低密度脂蛋白水平明顯低于模型組，高密度脂蛋白水平明顯高于模型組(P<0.05)；葛根總黃酮高劑量組血清三酰甘油、總膽固醇、低密度脂蛋白水平明顯低于辛伐他汀組，高密度脂蛋白水平明顯高于辛伐他汀組(P<0.05)。見表2。

表2 各組血脂水平比較

2.3各組肝組織脂肪水平比較 第9周后，模型組肝組織中三酰甘油、總膽固醇水平明顯高于正常對照組(P<0.05)；辛伐他汀組、葛根總黃酮各劑量組明顯低于模型組(P<0.05)；葛根總黃酮高劑量組明顯低于辛伐他汀組(P<0.05)。見表3。

2.4各組肝組織氧化應(yīng)激水平比較 第9周后，模型組肝組織中SOD、谷胱甘肽過氧化物酶水平明顯低于正常對照組，丙二醇水平明顯高于正常對照組(P<0.05)；辛伐他汀組、葛根總黃酮各劑量組肝組織中SOD、谷胱甘肽過氧化物酶水平明顯高于模型組，丙二醇水平明顯低于模型組(P<0.05)；葛根總黃酮高劑量組肝組織中SOD、谷胱甘肽過氧化物酶水平明顯高于辛伐他汀組，丙二醇水平明顯低于辛伐他汀組(P<0.05)。見表3。

表3 各組肝組織脂肪、氧化應(yīng)激水平比較

2.5各組肝組織病理形態(tài)比較 正常對照組肝索整齊排列，肝小葉形態(tài)正常，細(xì)胞大小和結(jié)構(gòu)均正常；模型組肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞明顯腫脹，可見脂肪細(xì)胞浸潤；辛伐他汀組和葛根總黃酮不同劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)出現(xiàn)不同程度紊亂，存在肝細(xì)胞脂肪變性，其中葛根總黃酮高劑量組肝組織病理學(xué)改善程度最為明顯。見圖1。

圖1 各組肝組織病理形態(tài)特征(HE，×200)

3 討 論

近年來研究發(fā)現(xiàn)，高脂血癥能夠誘發(fā)血管內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的正常生理功能，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖，同時還能夠促進(jìn)血管內(nèi)血栓形成，與動脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)〔4〕。評價機(jī)體氧化應(yīng)激水平的多項(xiàng)指標(biāo)中以SOD、丙二醇、谷胱甘肽過氧化物酶的準(zhǔn)確度和特異性較高。SOD是廣泛分布于動物、微生物體內(nèi)的抗氧化金屬酶，在維持機(jī)體抗氧化與氧化平衡中起到關(guān)鍵作用，其活性的強(qiáng)弱能夠反映出機(jī)體抗氧化能力的高低〔5〕。細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化過程中能夠分解產(chǎn)生丙二醛，其水平高低能夠評價機(jī)體中脂質(zhì)過氧化程度〔6〕。谷胱甘肽過氧化物酶主要分布于細(xì)胞質(zhì)中，能夠保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)免受過氧化物的損害，其水平變化可用于評價機(jī)體的抗氧化能力〔7〕。本研究結(jié)果提示高脂血癥大鼠體內(nèi)存在異常的氧化應(yīng)激反應(yīng)，降低氧化應(yīng)激水平有助于改善脂代謝紊亂。

葛根是我國的傳統(tǒng)中藥材，是野葛干燥的根，具有生津止渴、解肌退熱之功效。葛根總黃酮由葛根素、大豆甙等黃酮類化合物組成，是葛根發(fā)揮藥效學(xué)作用的主要活性成分〔8〕。相關(guān)研究顯示，多數(shù)黃酮類化合物具有明顯的抗氧化活性，葛根總黃酮也不例外〔9〕。最新研究顯示，葛根總黃酮能夠明顯緩解重金屬中毒大鼠神經(jīng)細(xì)胞的氧化損傷程度〔10〕，提升過氧化損傷心肌細(xì)胞的存活率〔11〕，減輕認(rèn)知功能障礙大鼠海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損傷及提升血清氧化應(yīng)激指標(biāo)水平〔12〕。因此，可推測葛根總黃酮可能對高脂血癥大鼠的脂代謝和氧化應(yīng)激指標(biāo)具有一定的改善作用，進(jìn)而減輕肝組織病理學(xué)改變。

本研究結(jié)果提示高劑量葛根總黃酮對于高脂血癥大鼠在調(diào)血脂、抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)度方面優(yōu)勢明顯。進(jìn)一步觀察大鼠肝組織病理形態(tài)改變情況顯示，不同劑量的葛根總黃酮均能夠改善高脂血癥大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂和肝細(xì)胞腫脹，緩解高脂血癥對肝臟的損傷，具體作用的分子機(jī)制仍需深入研究。