周 峰，顏揚(yáng)禮，黃 凱，趙康宏，謝紅旗,*

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410128；2.中獸藥湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南長(zhǎng)沙 410128；3.湖南省邵陽(yáng)市隆回縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局,湖南邵陽(yáng) 422000）

《中國(guó)藥典》（2005 版）將灰氈毛忍冬（Lonicera macranthoidesHand.-Mazz.）、紅腺忍冬（L.hypoglaucaMiq.）、華南忍冬（Lonicera confusaDC.）或黃褐毛忍冬（Lonicera fulvotomentosaHsu et S.C.Cheng）的干燥花蕾或帶初開的花歸屬于山銀花，山銀花在中醫(yī)臨床中常被用于治療如癰、潰瘍、關(guān)節(jié)痛等病征[1]。目前，山銀花在我國(guó)廣泛應(yīng)用于食品、茶飲、藥品、保健品、化妝品等各方面[2]，其具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗病毒、降血脂、保肝利膽等作用[3-5]。

山銀花是一味擁有悠久歷史的傳統(tǒng)大宗藥材，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效[6]，自2015 年被列入藥食同源中藥材目錄[7]，其可作為功能食品的屬性逐漸受到重視，人們對(duì)山銀花藥理藥性以及活性成分的進(jìn)一步研究具有重要意義。近年研究發(fā)現(xiàn)，山銀花中含有大量綠原酸和皂苷類成分[8]，且綠原酸具有抗炎、抗氧化等藥理活性[9-10]。肖作為等[11]對(duì)不同產(chǎn)地的山銀花進(jìn)行抗氧化研究，發(fā)現(xiàn)山銀花醇提物具有良好的抗氧化活性，其中灰氈毛忍冬的抗氧化活性最強(qiáng)。其多糖提取物對(duì)DPPH、-OH 和O2-自由基也有較強(qiáng)清除率[12]。李泮霖等[13]通過山銀花對(duì)細(xì)胞內(nèi)促炎因子的調(diào)控作用研究，表明山銀花對(duì)各炎癥因子的調(diào)控作用均具有顯著差異。目前對(duì)山銀花藥理活性的研究表明，山銀花具有顯著的抗炎和抗氧化活性，但未建立完善的細(xì)胞模型對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行研究，且未對(duì)其具有抗炎、抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行研究?；谏姐y花具有抗炎與抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)并不明確的基礎(chǔ)上，隨山銀花應(yīng)用越來越廣泛，對(duì)花活性物質(zhì)基礎(chǔ)的研究是必不可少的。

因此，本文通過脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥模型和H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激模型對(duì)山銀花各萃取部位進(jìn)行抗炎和抗氧化性評(píng)價(jià)，并基于UPLC-QTOF-MS 對(duì)具有顯著活性的部位進(jìn)行化學(xué)成分分析，旨在為闡明山銀花具抗氧化、抗炎活性的物質(zhì)基礎(chǔ)提供理論依據(jù)，并為山銀花的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

山銀花鮮品 由湖南省鴻利藥業(yè)有限公司提供，并經(jīng)湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院曾建國(guó)教授鑒定為灰氈毛忍冬（Lonicera macranthoidesHand.-Mazz.）；乙腈（色譜純）、甲醇、石油醚、三氯甲烷、正丁醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜（DMSO,分析純) 國(guó)藥集團(tuán)（上海）化學(xué)試劑有限公司；DMEM 培養(yǎng)基、1640 培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS）、2,7-二氫二氯熒光黃（DCFHDA）賽默飛世爾科技公司；超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽酶（GSH）和生化檢驗(yàn)試劑盒 南京建成生物工程有限公司；白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）美國(guó)Proteintech 公司；脂多糖（LPS）美國(guó)Sigma 公司；RAW264.7 和RIN 細(xì)胞 由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)國(guó)家中醫(yī)藥管理局亞健康干預(yù)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室提供。

1290 超高壓液相色譜串聯(lián)6545 四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜 安捷倫科技有限公司；XS205 分析天平METTLER TOLEDO 國(guó)際貿(mào)易有限公司；MB-530 多功能酶標(biāo)分析儀 深圳市匯松科技發(fā)展有限公司；SCIENTZ-18N 冷凍干燥機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司；DHP-500 電熱恒溫培養(yǎng)箱 北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司；HUP-UV 超純水機(jī)上海禾工科學(xué)儀器有限公司。

1.2 山銀花各萃取物的制備

山銀花干燥打粉后，過 40 目篩，根據(jù)文獻(xiàn) [14]方法稍加改動(dòng)，稱取 100 g 干粉，加入 2 L 甲醇，并于40 ℃下超聲提取 30 min，重復(fù)兩次，合并濾液，將所得提取液減壓濃縮至浸膏狀，保留部分樣品制成凍干粉備用，取剩余浸膏加入超純水 250 mL，使其充分溶解，依次采用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、水飽和正丁醇逐級(jí)萃取 3～5 次，直至有機(jī)層無色，合并有機(jī)層，加入少量超純水，將每萃取部位減壓濃縮至無刺激性氣味，制成凍干粉備用。各層所得凍干粉分別標(biāo)注為：甲醇總提取液-T1，水飽和正丁醇萃取部分-T2，乙酸乙酯萃取部分-T3，三氯甲烷萃取部分-T4，石油醚萃取部分-T5。

1.3 各萃取部位對(duì)炎癥因子的影響

1.3.1 供試品溶液的配制 將1.2 中所得樣品用DMSO 分別配制成 100 mg/mL 的儲(chǔ)存液，加藥時(shí)用DMEM 培養(yǎng)基稀釋成終濃度為50 μg/mL。

1.3.2 細(xì)胞培養(yǎng) RAW264.7 細(xì)胞用含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)，置37 ℃、5% CO2并飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)行傳代，2～3 d 傳代 1 次，取第3 代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.3.3 各萃取部位對(duì) RAW264.7 細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 細(xì)胞消化后，使細(xì)胞密度為1×105/mL，按每孔100 μL接種至96 孔培養(yǎng)板，至培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞良好貼壁生長(zhǎng)，隨機(jī)分為對(duì)照組、加入凍干粉（50 μg/mL）的試驗(yàn)組、LPS 模型組，分別換入新的培養(yǎng)基及含藥物培養(yǎng)基，每組設(shè)3 個(gè)復(fù)孔，處理24 h，按每孔10 μL加入CCK-8 試劑溶液后繼續(xù)置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h，取出孔板，避光，于搖床上輕輕搖晃 3～5 min 后，于450 nm 處進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.4 各炎癥因子的檢測(cè) 供試品溶液的配制同1.3.1。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的 RAW264.7 細(xì)胞進(jìn)行消化，調(diào)整細(xì)胞懸液的密度為1×105/mL，按每孔100 μL接種至96 孔培養(yǎng)板，于含 5% CO2、37 ℃、飽和濕度條件的培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 h，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后，隨機(jī)分為對(duì)照組、LPS（1 μg/mL）組、LPS（1 μg/mL）+凍干粉（50 μg/mL）組，每組設(shè)3 個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng) 24 h，取上清液用于腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等炎癥因子的檢測(cè)，并使用胰酶消化細(xì)胞，收集細(xì)胞沉淀用于NO 的檢測(cè)。

1.4 各萃取部位對(duì)細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響

1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng) RIN-m5F 細(xì)胞培養(yǎng)于含10% FBS的1640 培養(yǎng)基中，2～3 d 換一次培養(yǎng)液，細(xì)胞匯合率達(dá)90%左右，待細(xì)胞匯合至90%，去除舊的培養(yǎng)基，使用PBS 清洗一遍后，加入1 mL 胰酶，消化30 s至細(xì)胞輕微脫落，移除胰酶，換入2 mL 新的培養(yǎng)基，將細(xì)胞打散混勻，并轉(zhuǎn)移1 mL 至新的培養(yǎng)瓶，完成細(xì)胞傳代。

1.4.2 H2O2誘導(dǎo)的RIN 細(xì)胞氧化損傷的抗氧化作用 以H2O2處理的細(xì)胞組為對(duì)照組，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的RIN-m5F 細(xì)胞，胰酶消化后用完全培養(yǎng)基輕輕吹打成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞懸液密度為1×105/mL，按每孔100 μL 接種至96 孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24 h，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞進(jìn)行分組處理，見表1：

使用DCFH-DA 熒光探針測(cè)定山銀花各萃取部位的細(xì)胞內(nèi)ROS 水平。細(xì)胞培養(yǎng)、分組及處理如上，按照1:1000 用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，在37 ℃孵育20 min。然后用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌收集細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。用無血清細(xì)胞培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞并收集，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)收集的細(xì)胞。購(gòu)買測(cè)定試劑盒，取上清液根據(jù)試劑盒使用說明，使用酶標(biāo)儀對(duì)超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽酶（GSH）等因子的檢測(cè)。

1.5 UPLC-Q-TOF-MS 法鑒定化學(xué)成分

1.5.1 樣品前處理 取1.2 中水飽和正丁醇和乙酸乙酯萃取部位凍干粉各10 mg，加入甲醇配制成溶液濃度為1.0 mg/mL。

1.5.2 色譜條件 色譜柱為：Agilent-ZORBAX SBC18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5.0 μm），DAD 檢測(cè)器，流動(dòng)相為0.1%甲酸水（A）～乙腈（B），梯度洗脫，洗脫程序：0～15 min，5%～30% B；15～20 min，30%～45% B；20～30 min，45%～90% B。柱溫35 ℃，進(jìn)樣量5.0 μL，流速0.3 mL/min。

1.5.3 質(zhì)譜條件 通過優(yōu)化質(zhì)譜條件，采用負(fù)離子模式電噴霧電離離子源（ESI-），TOF 質(zhì)量掃描范圍m/z 100～3000；載氣溫度300 ℃，流速8 L/min；霧化壓力35 psi；鞘氣溫度350 ℃，流速11 L/min；毛細(xì)管電壓3500 V；碰撞誘導(dǎo)解離電壓175 V，設(shè)置能量梯度為15、20、25、30 eV。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用Origin 2018 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及繪圖；本文所用數(shù)據(jù)平行及3 組重復(fù)次數(shù)、所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)方差分析（ANOVA）、差異性分析（Paired-Sample T Test）均采用SPSS 23.0 軟件，結(jié)果均表示為：平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗炎活性評(píng)價(jià)

2.1.1 不同萃取部位對(duì)細(xì)胞活性的影響 用山銀花各萃取部位處理RAW264.7 細(xì)胞24 h，結(jié)果如圖1所示，與空白組相比，山銀花各萃取部位在處理濃度為50 μg/mL 時(shí)，對(duì)RAW264.7 細(xì)胞株的生長(zhǎng)無明顯影響，說明該濃度可用于后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

圖1 各萃取部位處理對(duì)細(xì)胞存活率的影響Fig.1 Effect of each extraction part treatment on cell survival rate

2.1.2 抗炎活性檢測(cè)結(jié)果 炎癥反應(yīng)是由多種化學(xué)因子共同參與調(diào)節(jié)的，與其具有最密切聯(lián)系的炎癥介質(zhì)與炎癥因子是NO、TNF-α 和IL-6。NO 可由多種細(xì)胞產(chǎn)生，是炎癥和細(xì)胞毒性反應(yīng)中一個(gè)重要的介質(zhì)，參與多種炎癥信號(hào)傳導(dǎo)，能與多種炎癥因子相互作用，其過量分泌能增強(qiáng)其他炎癥因子的生物活性，加重炎癥反應(yīng)[15]。TNF-α 是炎癥初期最早出現(xiàn)的炎癥因子，主要由巨噬細(xì)胞分泌，能促進(jìn)炎癥的發(fā)生與發(fā)展[16]。IL-6 由淋巴細(xì)胞和某些非淋巴細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等）產(chǎn)生，是一種參與機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)的重要細(xì)胞因子，它又被稱為B 細(xì)胞刺激因子，具有增強(qiáng)免疫、促進(jìn)造血、誘導(dǎo)B 細(xì)胞和T 細(xì)胞增殖分化等作用[15]。

因此，本試驗(yàn)評(píng)價(jià)山銀花甲醇溶液提取物及其各萃取部位（50 μg/mL）對(duì)LPS 刺激的RAW264.7細(xì)胞中各抗炎因子（NO、TNF-α 和IL-6）的影響，在LPS 刺激RAW264.7 細(xì)胞的炎癥反應(yīng)中，山銀花甲醇提取液中各萃取部位對(duì)LPS 刺激RAW264.7 細(xì)胞釋放NO、TNF-α 和IL-6 均具有不同程度的抑制作用，顯示了較好的體外抗炎活性，其中乙酸乙酯和水飽和正丁醇萃取部位對(duì)各炎癥因子的影響較顯著。水飽和正丁醇萃取部位對(duì)LPS 刺激RAW264.7細(xì)胞釋放NO、TNF-α 和IL-6 的抑制作用分別是66.40%、13.14%、79.66%，乙酸乙酯萃取部位對(duì)LPS 刺激RAW264.7 細(xì)胞釋放NO、TNF-α 和IL-6的抑制作用分別是50.97%、16.39%、74.19%。因此，水飽和正丁醇萃取部位處理濃度為50 μg/mL 時(shí)對(duì)RAW264.7 細(xì)胞炎癥因子的抑制能力相對(duì)更強(qiáng)，具體結(jié)果見表2。

表2 不同萃取部位對(duì)LPS 誘導(dǎo)的細(xì)胞NO、TNF、IL6 含量的影響Table 2 Effects of each extract site on production of NO,TNFα,and IL-6 in LPS-stimulated RAW264.7 cells (x ± s,n =3)

2.2 抗氧化活性評(píng)價(jià)

2.2.1 RIN-m5F 細(xì)胞ROS 檢測(cè)結(jié)果 ROS 是指化學(xué)性質(zhì)活潑的具有含氧基團(tuán)的化合物。ROS 過度增加或持續(xù)存在可對(duì)細(xì)胞形成氧化應(yīng)激，造成多種損傷。H2O2是研究ROS 的重要工具，H2O2可以迅速穿過細(xì)胞膜，通過反應(yīng)產(chǎn)生更多的ROS，常用于模擬ROS 對(duì) RAW264.7 巨噬細(xì)胞的氧化損傷[17]。經(jīng)山銀花各萃取部位（50 μg/mL）處理后（如圖2 所示），均能顯著性降低細(xì)胞內(nèi)H2O2誘導(dǎo)的ROS 的含量，山銀花甲醇溶液提取物及水飽和正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、石油醚等四個(gè)萃取部位處理可分別降低RIN 細(xì)胞內(nèi)62.17%、69.34%、86.19%、78.67%、77.72% ROS 的含量，其中乙酸乙酯萃取部位作用效果最強(qiáng)。

圖2 ROS 熒光統(tǒng)計(jì)圖Fig.2 Fluorescence statistical chart of ROS

2.2.2 RIN-m5F 細(xì)胞中抗氧化因子的檢測(cè)結(jié)果 細(xì)胞內(nèi)存在完善的抗氧化防御體系，如超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽過氧化物酶GSH-PX、過氧化氫酶CAT 等，能夠直接清除自由基，使自由基處于動(dòng)態(tài)平衡。經(jīng)山銀花各萃取部位（50 μg/mL）處理后（如圖3、4、5 所示），對(duì)各抗氧化因子均有一定的提升作用，甲醇溶液總提取物及水飽和正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、石油醚等四個(gè)萃取部位可使H2O2誘導(dǎo)的RIN 細(xì)胞中SOD 濃度分別提高1.58、1.08、2.51、2.20、1.01 倍；使GSH 濃度提高2.43、1.59、4.40、3.69、2.46 倍；使CAT 濃度提高4.93、2.79、8.89、6.43、4.26 倍，其中乙酸乙酯提取部位對(duì)抗氧化因子的提升作用最強(qiáng)。

圖3 各萃取部位處理對(duì)細(xì)胞SOD 值的影響Fig.3 Effect of each extract site treatment on SOD of cells

圖4 各萃取部位處理對(duì)細(xì)胞GSH 值的影響Fig.4 Effect of each extract site treatment on GSH of cells

圖5 各萃取部位處理對(duì)細(xì)胞CAT 值的影響Fig.5 Effect of each extract site treatment on CAT of cells

本試驗(yàn)通過脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥模型和H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激模型，結(jié)果表明山銀花甲醇提取物及各萃取部位均有不同程度的抗炎、抗氧化活性，因此，山銀花是一種具有抗炎、抗氧化活性的藥食同源中藥材。通過山銀花甲醇提取部位以及各萃取部位對(duì)各炎癥因子的影響表明，水飽和正丁醇的抗炎活性最強(qiáng)；對(duì)各抗氧化因子的影響表明山銀花甲醇提取液中乙酸乙酯萃取部位的抗氧化活性最強(qiáng)。由此推測(cè)山銀花活性成分極性較大，采用水飽和正丁醇和乙酸乙酯能有效富集，可為提高后續(xù)山銀花分離純化效率提供參考依據(jù)。但未知具有抗炎、抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此，本試驗(yàn)又通過UPLC-QTOF-MS 分析具有顯著活性的萃取部位的化學(xué)成分，以期探究其活性物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.3 LC-MS 結(jié)果與分析

本文通過UPLC-Q-TOF-MS 對(duì)水飽和正丁醇和乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行化學(xué)成分分析，通過對(duì)比兩萃取部位總離子流圖（TIC）（圖6），結(jié)果表明，兩萃取部位中化學(xué)成分存在一定差異，這可能是導(dǎo)致水飽和正丁醇與乙酸乙酯萃取部位抗炎、抗氧化活性存在差異的主要原因。

圖6 具顯著活性的萃取部位的總離子流圖（TIC）Fig.6 The total ions chromatogram (TIC) of extract parts with significant activity

通過二級(jí)質(zhì)譜掃描并結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道及檢索Chemspider 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)水飽和正丁醇和乙酸乙酯萃取部位所含化合物進(jìn)行分析，結(jié)果表明（如表3 所示），水飽和正丁醇部位主要包含17 種化合物，主要是有機(jī)酸類和皂苷類成分；乙酸乙酯部位鑒定了主要的12 種化合物，主要是有機(jī)酸類成分。兩萃取部位化合物存在含量、數(shù)量以及種類上的差異，其中綠原酸、斷氧化馬錢子苷、3,5-O-二咖啡?？鼘幩?、1,5-O-二咖啡?？鼘幩?、4,5-O-二咖啡酰奎寧酸、1,4-O-二咖啡?？鼘幩崃鶄€(gè)有機(jī)酸類化合物為共有組分，其余不同組分可能是導(dǎo)致它們出現(xiàn)活性差異的主要原因?？寡谆钚暂^強(qiáng)的水飽和正丁醇部位中主要含有的有機(jī)酸類和皂苷類化合物，其中綠原酸被證實(shí)是具有抗炎活性的化合物[9]，皂苷類成分是除綠原酸外具有抗炎活性的另一大化合物[29]，這可能是水飽和正丁醇部位抗炎活性較強(qiáng)的原因之一；而抗氧化活性較強(qiáng)的乙酸乙酯萃取部位主要是有機(jī)酸類化合物，這類化合物具有極強(qiáng)的抗氧化活性[30]，這可能是山銀花具有抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，也可能導(dǎo)致乙酸乙酯萃取部位抗氧化活性較強(qiáng)的原因之一。因此，有機(jī)酸和皂苷類化合物可能是山銀花具有抗炎、抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。此外，由于水飽和正丁醇和乙酸乙酯萃取部位對(duì)山銀花的有機(jī)酸和皂苷類化合物可以有效富集，因此本試驗(yàn)也可為提高分離制備的效率提供參考依據(jù)。

表3 水飽和正丁醇和三氯甲烷萃取部位所含化合物的LC-MS 分析（負(fù)離子模式）Table 3 The LC-MS analysis of the compounds from the extraction parts of water saturated n-butanol and chloroform(negative ion mode)

3 討論與結(jié)論

目前研究表明山銀花水提取物和甲醇提取物均具有良好的體外DPPH 清除活性、超氧陰離子清除活性[31]。Zhou 等[32]灰氈毛忍冬各萃取部位抗氧化研究發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯部位的體外DPPH 自由基清除活性和還原能力最佳，本文研究結(jié)果與之相符，本研究構(gòu)建體外抗氧化評(píng)價(jià)細(xì)胞模型，為研究者提供科學(xué)的體外抗氧化方法，相對(duì)真實(shí)地反應(yīng)活性物質(zhì)的抗氧化能力[33]。

李泮霖等[13]研究發(fā)現(xiàn)山銀花提取物對(duì)香煙煙霧提取物刺激KB 細(xì)胞誘導(dǎo)的急性口腔炎癥模型具有治療作用。曾安琪等[34]通過金銀花和山銀花提取物對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹試驗(yàn)及對(duì)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞炎癥模型的抗炎作用，發(fā)現(xiàn)兩者均有較好的抗炎作用。本文采用[30]脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥模型評(píng)價(jià)了山銀花甲醇與不同萃取部位的抗炎活性，表明山銀花甲醇提取物具有顯著的抗炎活性，不同萃取部位抗炎作用有一定差別，與前人的研究具有相似的結(jié)論。

本文通過脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥模型和H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激模型對(duì)山銀花不同萃取部位進(jìn)行體外抗炎和抗氧化活性評(píng)價(jià)，并基于UPLCQ-TOF-MS 對(duì)具顯著活性的萃取部位進(jìn)行化學(xué)成分分析。結(jié)果表明，山銀花甲醇提取物及其各萃取部位（50 μg/mL）均有不同程度的抗炎、抗氧化活性。其中水飽和正丁醇萃取部位的抗炎活性最強(qiáng)，對(duì)RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)NO、TNF-α、IL-6 等炎癥因子的抑制率分別達(dá)66.40%、13.14%、79.66%，初步鑒定該部位中的17 個(gè)有機(jī)酸類和皂苷類成分；乙酸乙酯萃取部位的抗氧化能力最強(qiáng)，可對(duì)RIN 細(xì)胞中抗氧化酶SOD、GSH、CAT 三種抗氧化因子的活性分別提高2.51 倍、4.40 倍、8.89 倍，初步鑒定該部位中的12 個(gè)有機(jī)酸類成分。結(jié)果同時(shí)表明，山銀花中活性成分的極性偏大，在低極性部位含量較少，采用水飽和正丁醇和乙酸乙酯可以對(duì)其有效富集。本文可為進(jìn)一步揭示山銀花具有抗炎、抗氧化等藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)提供理論依據(jù)，并為山銀花的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論參考。

本文研究結(jié)果不能闡明化合物與活性之間具體的量效關(guān)系，關(guān)于化合物與活性之間的具體量效關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。