百香果組培快繁是大量生產(chǎn)植物種苗的主要手段。本研究以百香果為對象，探究百香果初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)到煉苗移栽等適宜的培養(yǎng)基配方，完善并優(yōu)化其組培快繁技術(shù)，以期為百香果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供技術(shù)支撐。

1材料與方法

1.1外植體滅菌、接種及初代培養(yǎng)

以自選育的產(chǎn)量和質(zhì)量性狀均較好的的黃金百香果嫩莖作為外植體，使用70%的乙醇對外植體浸泡1 min，之后使用0.1%HgCl2對外植體進(jìn)行進(jìn)一步的滅菌處理，浸泡完成之后使用無菌水對外植體進(jìn)行3～5次的清洗。滅菌處理完成之后將外植體進(jìn)行裁剪，每段需要保留1～2個(gè)腋芽莖段。將每個(gè)裁剪好的莖段接種到MS+ 6-BA 0.5～1.0 mg/L+IAA 0.05～0.1 mg/L培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)管理，每30瓶進(jìn)行一次處理，且每一個(gè)瓶子均需要進(jìn)行一個(gè)外植體的接種，按照此要求進(jìn)行3次重復(fù)處理，后期每間隔一周進(jìn)行一次生長觀察及記錄，并需要及時(shí)將污染材料進(jìn)行清除。本試驗(yàn)在實(shí)際操作過程中的最低溫度不可低于25℃，最高溫度不可高于31℃，每天光照時(shí)間不可少于10 h，不多于12 h，光照強(qiáng)度需要保持在40μmol/m2·s。

1.2百香果增殖培養(yǎng)

將經(jīng)過初代培養(yǎng)的黃金果培養(yǎng)材料，接種于含有不同濃度配比的6-BA和IAA的MS培養(yǎng)基中，試驗(yàn)采取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，需要進(jìn)行3次相同的實(shí)驗(yàn)操作，接種完成之后的30 d之內(nèi)需要每間隔10 d進(jìn)行一次材料生長情況記錄，并對不同時(shí)期的增長系數(shù)及長勢進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。生根培養(yǎng)時(shí)選擇的主要材料為增殖培養(yǎng)所得的芽苗或叢生苗，將其放入不同濃度NAA的1/2MS培養(yǎng)基中實(shí)現(xiàn)生根培養(yǎng)處理，實(shí)際處理時(shí)主要為3個(gè)方式，每種培養(yǎng)方式包含10瓶，每瓶中有無根的百香果苗2株，重復(fù)進(jìn)行3次實(shí)驗(yàn)后方可對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，所有苗株接種完成之后均需要進(jìn)行20 d的培養(yǎng)，并對幼苗的生長情況進(jìn)行觀察和記錄。打開百香果組培瓶瓶蓋，將百香果組培苗放在大棚中進(jìn)行5～7 d煉苗，煉苗完成后需要將根苗取出并將根部的培養(yǎng)基完全去掉并清洗干凈，將處理之后的苗株移栽到消過毒的移栽基質(zhì)（腐殖土：泥炭土=1：2）的營養(yǎng)杯（12 cm×12 cm）中，在此環(huán)境下連續(xù)培養(yǎng)30 d，培養(yǎng)結(jié)束之后統(tǒng)計(jì)成活率。

2結(jié)果與分析

2.1外植體滅菌、接種與初代培養(yǎng)

百香果外植體經(jīng)消毒滅菌后，接種于MS+ 6BA 0.5～1.0 mg/L+IAA 0.05～0.1 mg/L培養(yǎng)基中，光照培養(yǎng)20 d后對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著升汞滅菌時(shí)間的延長，其成活率先上升后下降，升汞處理8 min時(shí)成活率最高，為48.89%。外植體部位的選擇對滅菌結(jié)果影響很大，老化的莖段莖稈中空，滅菌后污染率和死亡率都比較高；較嫩的頂芽及其下端1～2芽部位，升汞滅菌后容易褐化死亡；試驗(yàn)結(jié)果顯示，最適外植體部位為頂芽之下第3～第6腋芽所在莖節(jié)，這一部位的莖節(jié)多數(shù)呈半纖維化狀態(tài)，不如頂芽過于嫩弱，也尚未長老出現(xiàn)中空，在適宜的升汞滅菌時(shí)間下，滅菌存活率較高。

2. 2百香果的增殖培養(yǎng)

以6-BA（0.5～1.5mg/L）與IAA（0.1～0.3mg/L）不同濃度配比進(jìn)行黃金百香果組培苗的增殖培養(yǎng)，在培養(yǎng)30 d后，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)當(dāng)6-BA濃度為0.5 mg/L時(shí)，增殖效果差，增殖系數(shù)在2.0以下，植株健壯，葉片寬大，IAA濃度提高也不能使其增殖效果顯著提高。處理5（6-BA濃度1.0 mg/ L、IAA濃度0.2 mg/L）的增殖系數(shù)最高，達(dá)到5.6，且與其他處理達(dá)到極顯著水平（表1）；相對于其他處理其植株葉片鮮綠，叢生芽較多，且植株長勢旺盛。綜上，處理5即培養(yǎng)基MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L比較適合作為黃金百香果增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)30 d，增殖系數(shù)為5.60。

2.3百香果生根培養(yǎng)

將高度5 cm左右的百香果叢生芽苗從基部剪下，轉(zhuǎn)入含有不同濃度NAA（0.2、0.3、0.4 mg/L）的1/2MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，20 d后對結(jié)果進(jìn)行觀測并統(tǒng)計(jì)生根率。根據(jù)表2的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示百香果生根培養(yǎng)，處理2在生根數(shù)方面與其他2個(gè)處理差異極顯著，平均生根數(shù)量為5條。3個(gè)處理在根長和生根率方面沒有顯著差異。經(jīng)過20 d，根長達(dá)到4 cm，生根率達(dá)到95%以上。因此，百香果的生根培養(yǎng)為1/2MS+NAA0.3 mg/L+糖20.0 g/L+卡拉膠3.8 /L。

2.4百香果煉苗移栽

在大棚中進(jìn)行5～7 d煉苗，煉苗完成后需將根苗取出，在此環(huán)境下連續(xù)培養(yǎng)14d，成活率90%。

基金項(xiàng)目：桂林市科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（20170108-2，20190215-2）；廣西喀斯特植物保育與恢復(fù)生態(tài)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目（19-050-6）

（1廣西壯族自治區(qū)桂林市臨桂區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所何秋嬋；2廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院廣西植物研究所蘇江，黃寧珍；3廣西壯族自治區(qū)南邊山鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心莫庚生）