◎ 王 堯，劉倩倩，劉修辰，王鵬功

（1.中國(guó)檢驗(yàn)認(rèn)證集團(tuán)山東檢測(cè)有限公司，山東 青島 266000；2.中國(guó)檢驗(yàn)認(rèn)證集團(tuán)山東有限公司，山東 青島 266000）

農(nóng)藥除草劑的大規(guī)模使用在提高了農(nóng)作物產(chǎn)量的同時(shí)，也對(duì)其他生物產(chǎn)生了一定量的危害。農(nóng)田中噴灑的農(nóng)藥，僅有10%～30%作用在作物上，其余進(jìn)入空氣中，或者隨水循環(huán)進(jìn)入江河湖海，很多國(guó)內(nèi)外研究表明海水中存在除草劑[1-2]。貝類為過濾性生物，而除草劑具有親脂性，所以貝類對(duì)除草劑有富集作用，除草劑在貝類體內(nèi)的積累對(duì)貝類的食用安全性產(chǎn)生一定的風(fēng)險(xiǎn)。因此，貝類中不同種類除草劑分析方法的研究具有現(xiàn)實(shí)意義。

本研究將貝類樣品用乙酸乙酯-二氯甲烷提取后，經(jīng)弗羅里硅土固相萃取柱凈化，C18色譜柱分離，采用電噴霧正離子源（ESI+）電離，經(jīng)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）進(jìn)行定性和定量分析。對(duì)6中除草劑的分析方法、檢出限、線性、回收率進(jìn)行研究，以期為貝類中除草劑的檢測(cè)和食用風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Utra 3000型高效色譜儀，TSQ Quantiva型三重四極桿質(zhì)譜儀，賽默飛世爾科技公司生產(chǎn)；弗羅里硅土固相萃取柱（1 g/6 mL），德國(guó)Simon公司生產(chǎn)；高速離心機(jī)，賽默飛世爾科技公司生產(chǎn)；旋蒸蒸發(fā)儀，德國(guó)Heidolph公司生產(chǎn)；氮吹儀，南京海能儀器有限公司生產(chǎn)；超純水制備儀，賽默飛世爾科技公司生產(chǎn)。

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：氟噠嗪草酯（99.6%）、嘧菌腙（1 000 mg·L-1）、磺草唑胺（1 000 mg·L-1）、丙嗪嘧磺?。?00 mg·L-1）、雙唑草腈（1 000 mg·L-1）及吡唑特（98.8%）用乙腈配制成濃度為10 mg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，4 ℃避光保存，使用時(shí)用乙腈稀釋至所需要的質(zhì)量濃度。

乙酸乙酯、二氯甲烷、正己烷、乙腈均為色譜純，美國(guó)Merck公司生產(chǎn)；實(shí)驗(yàn)用水為超純水

1.2 儀器工作條件

1.2.1 色譜條件

C18反相色譜柱：（10 mm×2 mm，3 μm），柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：2 μL；流速：0.2 mL·min-1。流動(dòng)相：A（水+0.1%的甲酸+2 mmol·L-1的乙酸銨），B（99%的乙腈水溶液+0.1%的甲酸+2 mmol·L-1的乙酸銨），從A∶B（9∶1）的混合液到A∶B（1∶9）的混合液，進(jìn)行10 min濃度均配之后，保持10 min。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧正離子源（ESI+）；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）掃描；噴霧電壓3 500 V；毛細(xì)管溫度350 ℃，鞘氣240 kPa，碰撞氣0.2 Pa，6種除草劑質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 質(zhì)譜參數(shù)表

1.3 樣品處理

1.3.1 樣品制備

取可食用部分，充分?jǐn)囁?，混勻?18 ℃保存。

1.3.2 提取

稱取混勻的樣品5.00 g，置于50 mL離心管中，加入25 mL乙酸乙酯-二氯甲烷（1∶1）溶液。渦旋1 min。超聲提取20 min。以4 000 r·min-1的速度離心10 min。取上清液，減壓濃縮至盡干。加入2 mL乙酸乙酯-正己烷（1∶1），待凈化。

1.3.3 凈化

將1.3.2待凈化液轉(zhuǎn)入用5 mL乙酸乙酯-正己烷（1∶1）溶液活化過的弗羅里硅土固相萃取柱，用15 mL乙酸乙酯-正己烷（1∶1）溶液分3次洗脫，洗脫液收集到濃縮瓶中，于40 ℃水浴下旋蒸濃縮至干，用1 mL乙腈復(fù)溶，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析?？瞻兹芤簠⒄丈鲜鎏幚聿襟E得到空白基質(zhì)溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜圖

50 μg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流圖和提取離子流圖見圖1。

2.2 工作曲線及檢出限

配置1 μg·L-1、10 μg·L-1、20 μg·L-1、50 μg·L-1、100 μg·L-1、200 μg·L-1和500 μg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制6種除草劑的工作曲線。在1～500 μg·L-1的線性范圍內(nèi)，線性方程及相關(guān)性系數(shù)R2結(jié)果詳見表2。各除草劑的檢出限見表2。

2.3 回收率測(cè)定

取某市場(chǎng)采購(gòu)的牡蠣樣品，按照1.3方法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)牡蠣樣品進(jìn)行10 μg·L-1、20 μg·L-1、50 μg·L-1的3個(gè)水平添加。各水平添加回收率詳見表3。六種除草劑的添加回收率為75.4%～115.0%，本方法具有一定可靠性。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖

表2 線性參數(shù)及檢測(cè)限表

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果表

3 結(jié)論

本研究建立的固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定貝類樣品中氟噠嗪草酯、嘧菌腙、磺草唑胺、丙嗪嘧磺隆、雙唑草腈及吡唑特6種除草劑的方法，預(yù)處理所需要的有機(jī)溶劑用量少，質(zhì)譜分析基質(zhì)干擾少，方法檢出限低，線性關(guān)系良好，對(duì)貝類中除草劑含量的測(cè)定有重要的意義。