田江波，馬杰，何俊，程光勝，彭曉，孟懷旺

（1.重慶優(yōu)寶生物技術(shù)股份有限公司，重慶 北碚 400711；2.重慶正大蛋業(yè)有限公司，重慶 江北 400021）

高致病性禽流感具有發(fā)病率高和致死率高的特點(diǎn)，目前在我國依然存在著點(diǎn)狀暴發(fā)。預(yù)防和控制禽流感最常用和有效的方法是接種禽流感疫苗。然而有研究表明，在免疫過程中家禽受到強(qiáng)應(yīng)激，會降低免疫抗體水平，達(dá)不到最佳免疫效果［1］。高致病性禽流感疫苗由于其本身對蛋雞有較大的免疫應(yīng)激，導(dǎo)致更難達(dá)到很好的免疫效果，因此在生產(chǎn)過程中尤其在進(jìn)行疫苗免疫時(shí)應(yīng)盡量降低對動物的應(yīng)激影響。有研究表明一些營養(yǎng)素能夠起到緩解應(yīng)激、增強(qiáng)動物免疫功能的作用，例如維生素E 和硒有較強(qiáng)的抗氧化性，能夠提高動物體內(nèi)抗氧化酶的活性，減輕機(jī)體的氧化損傷，而一些氨基酸本身是合成免疫因子的原料［2-3］。另外，一些免疫多糖例如黃芪多糖和糖萜素可以促進(jìn)動物免疫器官的發(fā)育，增強(qiáng)免疫功能［4］。

本試驗(yàn)所用復(fù)合營養(yǎng)性添加劑富含多種維生素、氨基酸、電解質(zhì)、有機(jī)微量元素、糖萜素及黃芪多糖等，能夠在動物受到應(yīng)激時(shí)補(bǔ)充抗應(yīng)激營養(yǎng)需要，提高動物抵抗力，從而緩解應(yīng)激對動物的不利影響。本文主要探究復(fù)合營養(yǎng)性添加劑對蛋雞禽流感疫苗免疫效果的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn) 試驗(yàn)于2019 年6～11 月在重慶正大青年雞場進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)材料 本試驗(yàn)所用復(fù)合營養(yǎng)性添加劑包含多種維生素、氨基酸、有機(jī)微量元素、電解質(zhì)、黃芪多糖、糖萜素，來自重慶優(yōu)寶生物股份有限公司，批號：19032505，19060302。

重組禽流感病毒（H5＋H7亞型）三價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-11＋Re-12株，H7N9 H7-Re2株），批號：190 954900；雞新城疫、禽流感（H9亞型）二聯(lián)滅活疫苗（La Sota 株＋F 株），批號：191174900。疫苗均來自青島易邦生物工程有限公司。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 分為兩個試驗(yàn)進(jìn)行。

1.3.1 試驗(yàn)一（表1）選擇540 只56 日齡準(zhǔn)備接種疫苗（禽流感）的健康羅曼蛋雞，隨機(jī)均分為3 個處理。對照組：飼喂基礎(chǔ)日糧；處理1：從免疫前3 d 到免疫后4 d 于基礎(chǔ)日糧中添加1 g/kg復(fù)合營養(yǎng)性添加劑；處理2：從免疫當(dāng)天到免疫后7 d 于基礎(chǔ)日糧中添加1 g/kg 復(fù)合營養(yǎng)性添加劑。

表1 試驗(yàn)一

1.3.2 試驗(yàn)二（表2）選擇2 棟50 日齡健康青年蛋雞作為試驗(yàn)雞群（梯形籠養(yǎng)，相同日齡，每棟48 000 只）。隨機(jī)選擇一棟作為對照組，另外一棟作為試驗(yàn)組。試驗(yàn)組在免疫前3 d至免疫后4 d，于飲水中添加復(fù)合營養(yǎng)性添加劑，稀釋后飲用。試驗(yàn)期間，蛋雞籠養(yǎng)，自由采食和飲水。

表2 試驗(yàn)二

1.4 檢測指標(biāo)

1.4.1 試驗(yàn)一 抗體水平檢測：每個處理隨機(jī)選擇8只雞，分別于接種疫苗前3 d和接種疫苗后2、4 周（68 d 和88 d）翅靜脈采血測定HI 抗體效價(jià)。HI 抗體檢測方法參照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936-2003）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

1.4.2 試驗(yàn)二 抗體水平檢測：在免疫前4 d，免疫后第7 d、14 d、35 d，每組隨機(jī)抽取60 只進(jìn)行翅靜脈采血，分離血清，測定禽流感HI 抗體滴度和均勻度。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 所有數(shù)據(jù)用Excel作初步整理，試驗(yàn)一使用SPSS 23.0作雙因素方差分析，主效應(yīng)分別是時(shí)間點(diǎn)和不同處理；試驗(yàn)二使用SPSS 23.0作單因素方差分析，用Ducan法進(jìn)行多重比較。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 試驗(yàn)一

2.1.1 各處理組蛋雞免疫后的抗體滴度比較 由表3可知，隨著時(shí)間的增加，蛋雞H5（Re-11）、H5（Re-12）、H9 抗體滴度均顯著增加（P＜0.01）。添加復(fù)合營養(yǎng)性添加劑有提高H7（Re-2）抗體滴度的趨勢（P＜0.01），并且在免疫前3 d～免疫后4 d使用復(fù)合營養(yǎng)性添加劑的效果更好。雖然各處理抗體水平差異未達(dá)到顯著（P＞0.05），但是從數(shù)值上看使用添加劑組的抗體水平整體高于對照組。

表3 各處理組蛋雞免疫后的HI平均抗體滴度（log2）

2.1.2 抗體變異系數(shù) 如表4 所示，使用復(fù)合營養(yǎng)性添加劑后抗體變異系數(shù)降低，抗體均勻度有很好的提高。根據(jù)不同的抗體來看，在免疫前3 d～免疫后4 d 使用復(fù)合營養(yǎng)性添加劑，抗體均勻度更好。

表4 各處理組蛋雞免疫后的HI抗體變異系數(shù)

2.2 試驗(yàn)二

2.2.1 復(fù)合營養(yǎng)性添加劑對H5（Re-11）抗體水平的影響 由表5可知，復(fù)合營養(yǎng)性添加劑對H5（Re-11）抗體水平的影響無顯著差異（P＞0.05）。在起始階段，對照組的抗體效價(jià)高于試驗(yàn)組，但是經(jīng)過處理后第2 周，處理組的抗體效價(jià)已經(jīng)高于對照組。關(guān)于變異系數(shù)，處理組在開始前遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對照組，但是經(jīng)過兩周，對照組的變異系數(shù)已經(jīng)高于處理組（4.7%VS0.0%）。

表5 青年雞H5（Re-11）抗體檢測結(jié)果（log2）

2.2.2 復(fù)合營養(yǎng)性添加劑對H5（Re-12）抗體水平的影響 由表6可知，復(fù)合營養(yǎng)性添加劑對H5（Re-12）抗體水平的影響無顯著差異（P＞0.05）。開始階段，對照組的抗體效價(jià)高于處理組，但在第1周，處理組抗體效價(jià)反超對照組，可見復(fù)合營養(yǎng)性添加劑增加了抗體產(chǎn)生的速度。關(guān)于變異系數(shù)，飼喂復(fù)合營養(yǎng)性添加劑后，抗體的變異系數(shù)降低。

表6 青年雞H5（Re-12）抗體檢測結(jié)果（log2）

2.2.3 復(fù)合營養(yǎng)性添加劑對H7（Re-2）抗體水平的影響 由表7 可知，復(fù)合營養(yǎng)性添加劑對H7（Re-2）抗體水平的影響無顯著差異（P＞0.05）。開始階段，對照組的H7（Re-2）抗體變異系數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于處理組（15.2%VS23.0%），但是經(jīng)過2周后對照組的變異系數(shù)已高于處理組（4.8%VS1.7%）。

表7 青年雞H7（Re-2）抗體檢測結(jié)果（log2）

2.2.4 復(fù)合營養(yǎng)性添加劑對H9 抗體水平的影響 由表8可知，復(fù)合營養(yǎng)性添加劑對H9抗體水平的影響無顯著差異（P＞0.05）。剛開始兩個組的變異系數(shù)一樣，但是兩周后，對照組高于處理組（4.1%VS0.0%），同時(shí)處理組的抗體效價(jià)也更高。

表8 青年雞H9抗體檢測結(jié)果（log2）

3 討論

3.1 試驗(yàn)一結(jié)果表明在飼料中添加復(fù)合營養(yǎng)性添加劑對蛋雞注射禽流感疫苗后的抗體滴度沒有顯著影響，但降低了變異系數(shù)，提高了抗體均勻度，有利于縮小蛋雞群體免疫空白期。馬渝等［5］研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加0.05%復(fù)合營養(yǎng)性添加劑，可以顯著提高42 日齡花邊鴨的禽流感H5 和H9 抗體滴度。本試驗(yàn)結(jié)果與其不一致，其原因可能是復(fù)合營養(yǎng)性添加劑的添加方式以及試驗(yàn)動物不同所致。本試驗(yàn)結(jié)果也表明，不同添加方式對免疫效果的影響也存在差異，從免疫前3 d到免疫后4 d使用比從免疫當(dāng)天開始使用的效果更好。鐘佳佑等［6］在豬上的研究結(jié)果表明，復(fù)合營養(yǎng)性添加劑在疫苗注射前后均使用的效果更佳。

3.2 復(fù)合營養(yǎng)性添加劑可以在飼料和飲水中添加，而通過飲水的方式應(yīng)用，不但可以使其更容易被吸收，還能避免產(chǎn)品攝入受到采食量的制約。試驗(yàn)二結(jié)果表明，在飲水中添加復(fù)合營養(yǎng)性添加劑對抗體滴度沒有顯著影響，但能夠提高抗體均勻度，加快抗體產(chǎn)生的速度，使抗體水平更快達(dá)到高峰。李偉等［7］研究發(fā)現(xiàn)，在肉雞免疫前后5 d 通過飲水使用復(fù)合營養(yǎng)性添加劑，能夠延長抗體水平的高峰期，使抗體水平下降較慢。本試驗(yàn)結(jié)果與其一致。在豬上的研究結(jié)果也表明，使用復(fù)合營養(yǎng)性添加劑后，斷奶仔豬的免疫應(yīng)激反應(yīng)很小，且能夠提高采食量［8］。

3.3 復(fù)合營養(yǎng)性添加劑對動物的免疫功能有改善作用是因?yàn)槠渲邪素S富的復(fù)合維生素、復(fù)合氨基酸、有機(jī)微量元素、電解質(zhì)和免疫多糖。維生素對免疫功能的影響主要依靠維生素的抗氧化作用，穩(wěn)定和清除體內(nèi)自由基；維生素也是動物體內(nèi)生化反應(yīng)中許多酶的輔酶或輔基，間接參與免疫細(xì)胞增殖、分化及其DNA 和RNA 的合成［9］。黃芪多糖和糖萜素等免疫多糖能夠促進(jìn)免疫器官的發(fā)育，激活免疫細(xì)胞，提高免疫細(xì)胞的增殖能力，通過激發(fā)抗氧化酶的活性來改善動物的抗氧化能力，從而增強(qiáng)動物免疫力［10-11］。

4 結(jié)論

復(fù)合營養(yǎng)性添加劑由于復(fù)配了豐富的復(fù)合維生素、復(fù)合氨基酸、有機(jī)微量元素、電解質(zhì)和免疫多糖等，對增強(qiáng)蛋雞免疫功能，降低免疫應(yīng)激，提升抗體均勻度具有明顯的效果。