李國烈柯玲菊

(1.南充農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗中心，四川 南充 637000；2.黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院，黑龍江 哈爾濱 150040)

抗蚜威(Pirimicarb)化學名稱為2-二甲氨基-5，6-二甲基嘧啶-4-二甲基氨基甲酸酯，是一種氨基甲酸酯類農(nóng)藥，具有觸殺、熏蒸和葉面滲透作用，殺蟲迅速，殘效期短，能有效防治對有機磷殺蟲劑產(chǎn)生抗藥性的除棉蚜蟲外的所有蚜蟲，被廣泛應(yīng)用于果樹、蔬菜和糧食作物的蚜蟲防治上[1-3]。按我國農(nóng)藥毒性分級標準，抗蚜威屬于中等毒性殺蟲劑，《GB 2763-2019食品安全國家標準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》規(guī)定了抗蚜威在水果、蔬菜、谷物和其它食品類別中的最大殘留限量。

桑葚為木本桑樹的果穗，是國家衛(wèi)生部批準的藥食同源農(nóng)產(chǎn)品，自古享有中華“果皇”、“民間圣果”之美譽。桑葚作為藥食同源類中藥，性寒，味甘，入心、肝、腎經(jīng)，具有滋陰、補肝、補腎、補血、明目、生津止渴、烏發(fā)養(yǎng)顏、治療失眠和神經(jīng)衰弱、抗疲勞、防治便秘、風熱水腫等功效，在藥用和食用價值方面市場發(fā)展前景廣闊[4-7]。果桑病蟲害的防治通常以化學防治為主[8]，但在實際生產(chǎn)中，用藥不當會造成桑葚中化學農(nóng)藥殘留污染，危害健康和產(chǎn)業(yè)發(fā)展。李國烈等[9-13]報道了通過超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法測定桑葚中醚菌酯、噻蟲嗪、吡蟲啉、啶蟲脒、克百威和烯酰嗎啉的殘留量；覃明麗和趙鑫等[14,15]報道了桑葚中樂果、甲基硫菌靈和腐霉利的殘留分析。到目前為止，尚未見關(guān)于抗蚜威在桑葚中的殘留檢測報道。本試驗采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法測定桑葚中抗蚜威殘留量，以期為桑葚中抗蚜威的殘留檢測提供參考。

1 材料與方法

1.1 標準品和試劑

抗蚜威標準品購于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所(編號：GSB05-2304-2016)；甲醇(質(zhì)譜級)、乙腈(質(zhì)譜級)、甲酸(質(zhì)譜級)、甲苯(色譜級)購于美國Fisher公司；氯化鈉(分析純)購自天津科密歐化學試劑有限公司；蒸餾水購于廣州屈臣氏食品飲料有限公司。

1.2 儀器和設(shè)備

超高效液相色譜-質(zhì)譜儀(Waters，Acquity UPLC/Xevo TQ-S)、搖床(IKA，HS501)、離心機(Sigma，3-18KS)、分析天平(Mettler Toledo，ML802)、旋渦混合器(IKA，Vortex Genius 3)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮，RE-2000A)；固相萃取裝置(Agilent)、色譜柱(Waters，Xbridge C18，3.5μm 3.0mm×100mm)、固相萃取小柱(Agilent，Mega BE CARB/NH2500mg·6mL-1)、50mL離心管(Eppendorf)以及微孔濾膜(津騰，PTFE 0.22μm)等。

1.3 樣品處理

準確稱取勻漿后的桑葚樣品10.00g(精確至0.01g)于50mL離心管中，加入乙腈20.00mL，置于搖床上振蕩提取30min(300r·min-1)，加入氯化鈉5g，再振蕩5min(300r·min-1)，6000r·min-1離心5min，取上清液10.00mL待凈化；固相萃取小柱先用5mL乙腈加甲苯(體積比為3∶1)活化，將上述待凈化液過柱，收集濾液，再用25mL乙腈加甲苯(體積比為3∶1)洗脫，合并洗脫液，于40℃水浴旋蒸近干，用50%甲醇5.00mL復溶，渦旋混勻，過濾膜裝瓶待檢測。

1.4 儀器條件

采用0.10%甲酸甲醇溶液(A)、0.10%甲酸溶液(B)和0.10%甲酸乙腈溶液(C)作為流動相，梯度洗脫程序見表1。色譜柱溫度30℃，樣品室溫度20℃，進樣量為2μL。質(zhì)譜采用多反應(yīng)監(jiān)測方式進行采集。脫溶劑氣(1000L·h-1)和錐孔氣(150L·h-1)均為高純氮氣，碰撞氣(0.10mL·min-1)為高純氬氣，脫溶劑溫度為500℃。定量離子對、定性離子對、毛細管電壓、錐孔電壓和碰撞電壓等相關(guān)參數(shù)見表2。

表1 流動相及梯度洗脫程序

表2 質(zhì)譜參數(shù)

1.5 標準曲線和檢出限

用空白桑葚樣品基質(zhì)配制成質(zhì)量濃度為1.00μg·L-1、2.00μg·L-1、5.00μg·L-1、10.00μg·L-1、20.00μg·L-1、50.00μg·L-1的基質(zhì)標準溶液，采用1.4儀器條件進行分析。以質(zhì)量濃度為橫坐標，定量離子對的峰面積為縱坐標，用質(zhì)譜數(shù)據(jù)處理軟件擬合標準曲線。通過在最低質(zhì)量濃度附近添加一系列已知質(zhì)量濃度的樣品進行測定，以S/N≥3時的樣品質(zhì)量濃度為方法檢出限。

1.6 回收率和精密度

回收率試驗采用加標回收試驗法。按照1.00μg·kg-1、10.00μg·kg-1、50.00μg·kg-13個濃度水平向空白桑葚樣品中加入相應(yīng)的抗蚜威標品，每個濃度水平做6個平行。按1.3進行樣品處理，1.4儀器條件進行樣品分析，計算樣品實測濃度。

回收率(%)=實測濃度/理論濃度×100%

精密度試驗采用加入法，參照回收率試驗方法，日間精密度連續(xù)測定3d。

1.7 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)指的是樣品中被分析物以外的組分，基質(zhì)經(jīng)常對分析物的分析過程有顯著的干擾，并影響結(jié)果的準確性。基質(zhì)效應(yīng)采用比較不同條件下峰面積平均值的方法來評價[16]，用桑葚空白基質(zhì)作溶劑配制的標液稱為基質(zhì)標液(B)，用50%甲醇溶液作溶劑配制標液稱為試劑標液(A)，基質(zhì)效應(yīng)為B信號峰面積/A信號峰面積。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法選擇性

該試驗條件下，抗蚜威采用反相液相色譜分離，流動相中加入0.1%體積分數(shù)的甲酸來提高ESI+的離子化效率。結(jié)果表明，抗蚜威保留時間為3.66min，峰形及分離度良好，且可獲得較強的分子離子峰強度，桑葚基質(zhì)對桑葚樣品中抗蚜威的測定干擾小?？寡镣噭藰尤芤簣D譜，桑葚空白樣品圖譜，抗蚜威桑葚基質(zhì)標準溶液圖譜以及抗蚜威加標樣品圖譜分別見圖1至圖4。各圖中上圖為定量離子對(239.2/72.0)色譜圖，下圖為定性離子對(239.2/182.1)色譜圖。

2.2 標準曲線和檢出限

該試驗條件下，抗蚜威在質(zhì)量濃度1.00～50.00μg·L-1時線性關(guān)系良好，標準曲線回歸方程：

y=1.0119×105x+5283.68(R2=0.998)

權(quán)重為1/x。根據(jù)《GB/T 27417-2017合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》要求，以3倍基線噪音的藥物濃度為最低檢出限，抗蚜威在桑葚中的方法檢出限為0.10μg·kg-1，為增加檢測結(jié)果的可信性，以10倍的方法檢出限為方法定量限，則方法定量限為1.0μg·kg-1。

2.3 方法回收率和精密度

在1.00μg·kg-1添加濃度水平下，抗蚜威的平均回收率為97.4%，相對標準偏差(RSD)為5.00%；在10.00μg·kg-1添加濃度水平下的平均回收率為95.9%，相對標準偏差(RSD)為2.86%；在50.00μg·kg-1添加濃度水平下的平均回收率為89.3%，相對標準偏差(RSD)為0.99%。結(jié)果表明，該方法具有較好的回收率和準確度。方法的精密度結(jié)果見表4，日內(nèi)精密度(n=6)RSD分別為4.90%、2.50%、3.78%，日間精密度(n=3)RSD分別為5.77%、3.67%、4.94%。結(jié)果表明，該試驗方法具有很好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。

表3 方法回收率(n=6)

表4 方法精密度

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

該方法的基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果見表5，在1.00μg·L-1、10.00μg·L-1和50.00μg·L-13個質(zhì)量濃度水平下，抗蚜威在桑葚樣品中的基質(zhì)效應(yīng)分別為90.62%、91.14%和95.09%，RSD分別為1.80%、0.56%和0.40%。由結(jié)果可知，在質(zhì)量濃度為1.00～50.00μg·L-1范圍內(nèi)，抗蚜威在桑葚樣品中的基質(zhì)效應(yīng)表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)，并且值都大于90%。因此，在使用該方法測定桑葚中抗蚜威殘留量時，基質(zhì)效應(yīng)對結(jié)果的影響比較小，可采用基質(zhì)匹配標準溶液或純?nèi)軇藴嗜芤哼M行校正。

表5 方法基質(zhì)效應(yīng)(n=5)

3 結(jié)論

該試驗采用乙腈提取桑葚樣品，石墨化碳黑氨基復合柱凈化，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定其中抗蚜威殘留量。該方法前處理操作簡便，方法選擇性、檢出限、回收率、精密度和標準曲線線性范圍及其相關(guān)系數(shù)均滿足樣品分析要求，適用于桑葚中抗蚜威殘留量的測定。