段倩倩，陳萬(wàn)杰，程家園，陸 闊，李 國(guó)，陳鵬飛，李澤偉，李 郁

（安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽 合肥 230036）

豬呼吸道病綜合征（Porcine respiratory disease complex,PRDC）是一種多因素引起的豬呼吸道疾病，常以混合感染或繼發(fā)感染形式存在。該病多發(fā)于春季和冬季，5～12周齡保育豬易感。PRDC病因復(fù)雜，豬舍飼養(yǎng)密度過(guò)大、通風(fēng)不良、豬群免疫水平低下和豬只應(yīng)激等均是誘發(fā)該病的重要原因[1]。引起PRDC的病原多樣，病毒性病原包括豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）、豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）、豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）等，細(xì)菌性病原包括豬鏈球菌（Streptococcus suis,SS）、多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida,Pm）、支氣管敗血波氏桿菌（Bordetella bronchiseptica,Bb）、副豬嗜血桿菌（Haemophilusparasuis,HPS）、豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌（Actinobacilluspleuropneumoniae,APP）等[2]。PRDC可引起豬群生長(zhǎng)緩慢，料重比升高，死淘率上升，是影響?zhàn)B豬業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的重要疾病之一[3]。本文對(duì)安徽某豬場(chǎng)的一例PRDC病例進(jìn)行總結(jié)報(bào)告，以期為PRDC的診斷及防控提供參考。

1 發(fā)病情況和臨床癥狀

安徽省某豬場(chǎng)有存欄母豬2 000頭，保育豬3 000頭。2021年2月下旬，2 000頭40～70日齡保育豬陸續(xù)出現(xiàn)咳嗽、氣喘、呼吸障礙等癥狀，發(fā)病率66.7%（2 000/3 000），死亡率11.0%（220/2 000）。該場(chǎng)母豬曾免疫過(guò)豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病和豬支原體肺炎疫苗，保育豬曾免疫過(guò)豬瘟疫苗。對(duì)發(fā)病保育豬使用替米考星、氟苯尼考和泰樂(lè)菌素治療無(wú)明顯效果，仍有豬只陸續(xù)發(fā)病并死亡。

2 病理變化

挑選臨床癥狀典型的3頭保育豬（分別編為1號(hào)、2號(hào)和3號(hào)；1號(hào)豬為40日齡，2號(hào)豬和3號(hào)豬均為70日齡）進(jìn)行剖檢，可見(jiàn)肺臟和肝臟均有充血，脾臟均充血、腫大，腎臟均無(wú)明顯病變。此外，1號(hào)豬心臟有纖維素性沉著，2號(hào)豬和3號(hào)豬心臟均無(wú)明顯病變。見(jiàn)圖1。

圖1 病豬病理變化

3 實(shí)驗(yàn)室檢查

3.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無(wú)菌操作采集3頭病豬肺、肝、脾、腎、心臟深層組織，劃線(xiàn)接種于含1.5% NAD和5%小牛血清的TSA平板，37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，均未分離到可疑菌。

3.2 細(xì)菌和病毒核酸檢測(cè)

將病豬肺、肝、脾、腎、心臟組織混合后研磨取上清液，分別用OMEGA微量DNA提取試劑盒和天隆科技病毒DNA/RNA提取試劑盒提取上清液中核酸作為模板。通過(guò)PCR方法檢測(cè)6種細(xì)菌核酸和2種病毒核酸，包括SS、豬丹毒絲菌（Erysipelothrixrhusiopathiae,ER）、HPS、APP、Pm、沙門(mén)氏菌（Salmonella）、PCV2、PRV。所用引物序列見(jiàn)表1，由通用生物系統(tǒng)（安徽）有限公司合成。按照世紀(jì)元亨CSFV通用型實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒和PRRSV通用型實(shí)時(shí)熒光RTPCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，檢測(cè)CSFV和PRRSV核酸。

表1 SS、ER、HPS、APP、Pm、Salmonella、PCV2、PRV鑒定引物序列

結(jié)果顯示，1號(hào)豬檢測(cè)為SS、HPS、PRRSV核酸陽(yáng)性，2號(hào)豬檢測(cè)為PCV2、PRRSV核酸陽(yáng)性，3號(hào)豬檢測(cè)為SS、HPS、PCV2、PRRSV核酸陽(yáng)性，其余病原核酸檢測(cè)均為陰性。見(jiàn)圖2。

圖2 病原核酸檢測(cè)結(jié)果

4 診斷

綜合該豬場(chǎng)發(fā)病情況、發(fā)病豬臨床癥狀、病理變化以及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，判定該豬場(chǎng)保育豬發(fā)生由PRRSV、PCV2、SS和HPS引起的PRDC。

5 討論

當(dāng)前，豬群中多種病原混合感染現(xiàn)象普遍存在，監(jiān)測(cè)原發(fā)性病原對(duì)PRDC防控意義重大。在本病例中，發(fā)病豬群近期使用過(guò)抗生素，但豬群仍持續(xù)發(fā)病并死亡，表明SS、HPS等細(xì)菌性病原并非引起PRDC的原發(fā)性病原。病原核酸檢測(cè)結(jié)果顯示，PRRSV陽(yáng)性率為100.0%（3/3），而PCV2、SS和HPS陽(yáng)性率均為66.7%（2/3），提示PRRSV是引起該豬群發(fā)病的主要病原。PRRSV作為免疫抑制性病原，可通過(guò)削弱豬肺泡巨噬細(xì)胞功能，破壞黏膜纖毛轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)及誘導(dǎo)免疫細(xì)胞凋亡來(lái)抑制機(jī)體的局部免疫反應(yīng)，提高機(jī)體對(duì)其他病原的易感性，如PCV2、PRV、SS、HPS、APP、Pm、Bb等[4-5]。

細(xì)菌性病原，如SS、HPS等，雖然不是PRDC發(fā)生的主要原因，但是在與PRRSV、PCV2等免疫抑制性病原混合感染時(shí)，可加劇宿主炎癥反應(yīng)，使豬群死亡率上升[6-7]。這是造成該豬場(chǎng)保育豬發(fā)病急、病程短、死亡率高的重要原因。因此，當(dāng)發(fā)生PRDC時(shí)，需及時(shí)確診細(xì)菌性病原，并使用敏感藥物治療，才能有效降低損失。臨床上常將病原學(xué)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合用于豬細(xì)菌病診斷。細(xì)菌分離培養(yǎng)耗時(shí)長(zhǎng)，某些對(duì)營(yíng)養(yǎng)條件要求高的病原菌不易被分離到，但是通過(guò)該方法可獲得細(xì)菌培養(yǎng)物，繼續(xù)開(kāi)展菌株的種屬、耐藥表型和血清型鑒定，可為臨床用藥和疫苗選擇提供依據(jù)；PCR方法敏感度高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)效率高，適用于豬群突然暴發(fā)疫病時(shí)的快速準(zhǔn)確診斷，以爭(zhēng)取時(shí)間采取各種防控措施。在本病例中，3頭病豬組織中均未分離到可疑病原菌，但是1號(hào)、3號(hào)病豬組織中SS和HPS核酸為陽(yáng)性。究其原因，一方面可能是因?yàn)椴∝i曾使用過(guò)替米考星、氟苯尼考、泰樂(lè)菌素等抗生素，將SS和HPS有效殺滅，另一方面可能是因?yàn)椴∝i組織保存、運(yùn)輸條件不當(dāng)，致使多數(shù)病原菌死亡，無(wú)法成功分離。因此，在臨床上應(yīng)根據(jù)豬群發(fā)病、用藥情況選擇合適的診斷方法。

疫苗接種是預(yù)防PRDC暴發(fā)的重要途徑，只要從源頭上控制住原發(fā)性病原，就能有效杜絕疾病發(fā)生。通常仔豬血液中母源抗體水平在30日齡左右會(huì)消退完全[8-9]。在本病例中，雖然母豬曾免疫過(guò)豬藍(lán)耳病疫苗，但是3頭保育豬已達(dá)40～70日齡，基本不再攜帶母源抗體，因此對(duì)PRRSV攻擊無(wú)保護(hù)作用。CSFV同樣作為PRDC原發(fā)性病原之一，在本病例中檢測(cè)結(jié)果均為陰性，這可能與保育豬均免疫過(guò)豬瘟疫苗相關(guān)。表明按照科學(xué)的免疫程序?qū)ωi只進(jìn)行免疫接種十分必要。

對(duì)于該豬場(chǎng)PPRSV、PCV2、SS、HPS多病原混合感染情況，建議采取以下措施：將病死豬和污染物品焚燒、深埋、無(wú)害化處理，發(fā)病豬緊急隔離飼養(yǎng)，嚴(yán)格控制病毒感染和蔓延；對(duì)發(fā)病豬綜合使用干擾素和抗生素進(jìn)行治療，降低損失；對(duì)所有受威脅豬群補(bǔ)免豬藍(lán)耳病、豬圓環(huán)病毒病、豬鏈球菌病、副豬嗜血桿菌病疫苗；制定科學(xué)免疫程序，做好其他重要疫病的全群免疫工作，定期監(jiān)測(cè)抗體水平；在飼料中添加保健藥物，提高豬群免疫力和抗應(yīng)激能力；加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，降低飼養(yǎng)密度，保持豬舍干燥、通風(fēng)、衛(wèi)生；對(duì)進(jìn)入豬場(chǎng)的人員、車(chē)輛、物品進(jìn)行消毒處理，避免引入外來(lái)病原。