楊先富， 楊勝紅， 莫興虎， 袁曉娟， 楊政益， 彭彩麗， 趙孝木， 吳通奎

(黔東南州動物疫病預(yù)防控制中心， 貴州 凱里 556000)

豬瘟是由黃病毒科豬瘟病毒屬豬瘟病毒引起的一種急性、接觸性傳染，具有高度傳染性和致死性[1]。豬瘟一般分為急性、慢性和亞臨床性3種類型，慢性和亞臨床性豬瘟統(tǒng)稱為非典型豬瘟。急性豬瘟由強(qiáng)毒力豬瘟病毒感染引起，發(fā)病率和死亡率均很高。非典型豬瘟由低毒力豬瘟病毒感染引起，臨床癥狀和病理變化表現(xiàn)為多樣性，而且特征不明顯，是目前危害我國養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一[2]。豬瘟在我國主要采取以疫苗免疫為主的綜合防治措施，抗體檢測是評價(jià)豬瘟疫苗免疫效果的主要方法，也是豬群免疫水平監(jiān)測的重點(diǎn)。為掌握黔東南州育肥豬的豬瘟疫苗免疫效果，2020年12月至2021年1月，對黔東南州13個(gè)規(guī)模豬場和13個(gè)散養(yǎng)點(diǎn)開展了豬瘟免疫抗體檢測，現(xiàn)將檢測結(jié)果報(bào)道如下，為當(dāng)?shù)刎i瘟的防控提供參考。

1材料與方法

1.1豬血清與檢測試劑

育肥豬血清：采集于黔東南州的13個(gè)規(guī)模養(yǎng)豬場(360份)和13個(gè)散養(yǎng)點(diǎn)(358份)，共計(jì)718份。豬瘟病毒ELISA檢測試劑盒：由北京納百生物科技有限公司生產(chǎn)，批號：ZE0011201001。

1.2豬瘟疫苗免疫抗體檢測

1) 洗滌液配置。按1∶25比例，用滅菌水稀釋濃縮洗滌液至25倍。

2) 加樣。取出酶標(biāo)版，記錄樣品位置。在酶標(biāo)版各孔中分別加入血清稀釋液(試劑盒提供)50 μL。在適當(dāng)?shù)膬煽字屑尤胛聪♂尩年幮詫φ?0 μL，在適當(dāng)?shù)膬煽字屑尤胛聪♂尩年栃詫φ?0 μL，其余各孔分別加入50 μL血清樣品，用封板膜密封酶標(biāo)版，室溫孵育120 min。

3) 洗板。棄去板孔中液體，用洗滌液300 μL洗板，重復(fù)5次，最后一次洗板后將液體徹底拍干。

4) 加酶標(biāo)抗體。每孔加入酶標(biāo)抗體100 μL，蓋好反應(yīng)板，室溫孵育30 min。

5) 洗板。棄去板孔中的液體，用洗滌液300 μL洗板，重復(fù)5次，最后一次洗板后將液體徹底拍干。

6) 加底物。每孔加入底物溶液100 μL，蓋好反應(yīng)板，室溫避光孵育10 min。

7) 終止反應(yīng)。每孔加入終止液50 μL終止反應(yīng)。

8) 測定吸光值。測定樣品、對照在450 nm波長下的吸光值(OD450nm)。

1.3檢測結(jié)果判定

陰性對照的OD450nm平均值≥0.5，陽性對照的阻斷率>50%，表明抗體檢測實(shí)驗(yàn)條件成立。待檢血清的阻斷率計(jì)算公式如下。

阻斷率=[(陰性對照OD450nm平均值-樣品OD450nm平均值)/陰性對照OD450nm平均值]×100%

阻斷率≥40%，判斷為陽性；阻斷率≤30%，判斷為陰性；阻斷率在30%～40%，應(yīng)在14 d后重新檢測。

2結(jié)果與分析

經(jīng)測定，陰性對照的OD450nm平均值為1.478，陽性對照的平均阻斷率為70.23%，根據(jù)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，此次豬瘟疫苗免疫抗體檢測實(shí)驗(yàn)條件成立。

2.1豬瘟疫苗免疫抗體合格率

從表1看出，規(guī)模場、散養(yǎng)點(diǎn)的豬瘟疫苗免疫抗體平均合格率分別為80.28%和73.74%，規(guī)模場的豬瘟疫苗免疫抗體合格率明顯高于散養(yǎng)點(diǎn)。從規(guī)模場看，13個(gè)規(guī)模場中有11個(gè)場豬瘟疫苗免疫抗體合格率達(dá)80%以上，高于國家規(guī)定的免疫群體豬瘟疫苗免疫抗體合格率(≥70%)的要求，說明大部分豬受到豬瘟疫苗免疫抗體保護(hù)，較為安全；而1號、10號場免疫合格率均為50%，低于70%，未達(dá)到國家規(guī)定的合格標(biāo)準(zhǔn)，可能是首次免疫后1月左右未加強(qiáng)免疫導(dǎo)致。

表1黔東南州規(guī)模場和散養(yǎng)點(diǎn)豬瘟疫苗免疫抗體檢測結(jié)果

從散養(yǎng)點(diǎn)看，2號、3號、4號、5號、6號、7號和11號散養(yǎng)點(diǎn)豬瘟疫苗免疫抗體合格率分別為86.67%、80.00%、80.00%、80.00%、76.67%、87.50%和76.67%，高于國家規(guī)定的合格率，而1號、8號、9號、10號、12號和13號散養(yǎng)點(diǎn)的合格率分別為40.00%、50.00%、40.00%、55.55%、67.65%和52.00%，低于國家標(biāo)準(zhǔn)。原因之一是部分養(yǎng)殖戶的防疫意識淡薄，未開展豬瘟疫苗免疫；原因之二是一些養(yǎng)殖戶只在秋季給豬免疫1次，免疫抗體水平低，所以免疫合格率較低。

2.2阻斷率

根據(jù)表1計(jì)算得規(guī)模場、散養(yǎng)點(diǎn)豬瘟疫苗免疫抗體平均阻斷率分別為51.50%和40.09%，規(guī)模場豬的豬瘟免疫抗體水平明顯高于散養(yǎng)點(diǎn)?？贵w阻斷率與抗體水平成正比，即抗體水平越高抗體阻斷率也越高。從規(guī)模場看，除1號、10號場外，其余11個(gè)場的豬瘟疫苗免疫抗體平均阻斷率均在50%以上，說明這些場豬瘟免疫抗體水平較高，免疫效果好；1號、10號場的平均阻斷率分別為25.65%和25.13%，說明這2個(gè)場豬瘟免疫抗體水平低，近半數(shù)的豬未得到有效保護(hù)。

從散養(yǎng)點(diǎn)看，2號、3號、4號、5號、6號、7號和11號散養(yǎng)點(diǎn)豬瘟疫苗免疫抗體平均阻斷率分別為59.36%、51.12%、51.36%、51.24%、48.62%、61.01%和47.65%，均高于40%，免疫效果較好；而1號、8號、9號、10號、12號和13號豬瘟疫苗免疫抗體平均阻斷率分別為14.38%、25.13%、14.48%、29.73%、39.50%和27.61%，說明這6個(gè)散養(yǎng)點(diǎn)豬瘟疫苗免疫抗體水平低，感染豬瘟的風(fēng)險(xiǎn)極高。

3小結(jié)

對黔東南州13個(gè)規(guī)模豬場和13個(gè)散養(yǎng)點(diǎn)的豬瘟疫苗免疫抗體水平檢測結(jié)果表明，規(guī)模養(yǎng)豬場中有11個(gè)場的豬瘟疫苗免疫抗體合格率在80%以上，而1號、10號場的合格率僅為50%，建議這2個(gè)場建立豬瘟疫苗免疫程序并按程序開展免疫，使其免疫抗體合格率達(dá)到國家規(guī)定的合格標(biāo)準(zhǔn)。對于散養(yǎng)豬，建議加強(qiáng)豬病防治知識宣傳，增強(qiáng)養(yǎng)殖戶對豬疫病的防控意識，做到應(yīng)免盡免，一般仔豬在35日齡左右首次免疫，65日齡加強(qiáng)免疫1次，免疫保護(hù)期可達(dá)半年以上[3]。