張紅強(qiáng) 王 欣 王佳慧 張佳美

（1. 山西振東制藥股份有限公司，山西長治，047100；2. 山西振東健康生物科技股份有限公司，山西長治，047100）

三氯異氰脲酸作為新一代消毒劑，因其消毒能力強(qiáng)、作用時(shí)間長、安全性能好等優(yōu)點(diǎn)，在水質(zhì)處理，醫(yī)療衛(wèi)生，工、農(nóng)、漁業(yè)等行業(yè)被廣泛應(yīng)用。將三氯異氰脲酸制備成泡騰片，不僅解決了三氯異氰脲酸不易儲(chǔ)存的問題，而且攜帶更方便、用量更準(zhǔn)確[1]。2020年由于新型冠狀肺炎的暴發(fā)，消費(fèi)者的消毒意識有了明顯提升，對消毒產(chǎn)品的需求明顯增多，因此三氯異氰脲酸消毒劑的市場不再僅局限于國外，國內(nèi)市場前景日漸明朗。

通過粉末壓片工藝制備的三氯異氰脲酸泡騰片，有效氯含量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)30.0%，可在5 min中完全溶解，符合《中國藥典》規(guī)定[2]。本文主要評價(jià)其對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的殺菌效果，以及不同作用時(shí)間對物體表面的消毒效果。

1 實(shí)驗(yàn)試劑

1.1 樣品溶液配制

取自制消毒片，分別配制成濃度為200、250、500 mg/L的消毒液。

1.2 菌種

金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌均由中國食品藥品檢定研究院提供。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基

改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基均由北京三藥科技開發(fā)公司提供。

1.4 中和劑

硫代硫酸鈉、吐溫80均由天津市永大化學(xué)試劑有限公司提供。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)用菌懸液的制備

用接種環(huán)挑取各實(shí)驗(yàn)菌，用磷酸緩沖溶液(PBS)洗下制成108cfu/mL菌懸液，按10倍梯度稀釋至106cfu/mL。

2.2 中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)

按照《消毒技術(shù)規(guī)范》[3]2.1.1.5中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)方法，設(shè)計(jì)6組實(shí)驗(yàn)。按菌懸液定量殺菌方法進(jìn)行中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.3 懸液定量殺菌實(shí)驗(yàn)

（1）取無菌試管，加入0.5 mL 106cfu/mL菌懸液，再加入0.5 mL有機(jī)干擾物，混勻置于(20±1)℃水浴5 min，加入4.0 mL消毒液，迅速混勻后計(jì)時(shí)。至作用時(shí)間，吸取0.5 mL上述實(shí)驗(yàn)菌與消毒劑混合液加于4.5 mL中和劑中，作用10 min后，分別吸取0.5 mL放入2個(gè)平皿中，作活菌計(jì)數(shù)。再分別按10倍梯度稀釋，分別吸取0.5 mL放入2個(gè)平皿中，作活菌計(jì)數(shù)。

（2）陽性對照：取無菌試管，加入0.5 mL 106cfu/mL菌懸液，再加入0.5 mL有機(jī)干擾物，混勻置于(20±1)℃水浴5 min，用移液槍吸取標(biāo)準(zhǔn)硬水4.0 mL注入其中，混勻，按10的倍數(shù)稀釋，從102、10 cfu/mL的試管中各吸取0.5 mL放入2個(gè)平皿中，作活菌計(jì)數(shù)。

（3）倒入15 mL冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基，手動(dòng)搖勻，待凝固后，將金黃色葡萄球菌和大腸桿菌試樣放入37℃培養(yǎng)箱中，48 h后觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果；將白色念珠菌試樣放入28℃培養(yǎng)箱中，72 h后觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2.4 物體表面現(xiàn)場消毒實(shí)驗(yàn)

（1）隨機(jī)取物體表面，用規(guī)格板標(biāo)定2塊面積各為25 cm2的區(qū)域，一個(gè)供消毒前采樣，一個(gè)供消毒后采樣。

（2）消毒前，將無菌棉拭于5 mL稀釋液管中沾濕，對1區(qū)塊涂抹采樣，橫豎往返各8次。采樣后（采樣區(qū)為30個(gè)不同區(qū)域），以無菌操作方式將棉拭采樣端剪入原稀釋液管內(nèi)，震蕩20 s，作為陽性對照樣本。

（3）將消毒液噴灑于物體表面，作用5 min后，將無菌棉拭于含5 mL中和劑試管中沾濕，對消毒區(qū)域采樣，將采樣后的棉拭剪入原中和劑管中，作為消毒組樣本。

（4）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將同批次稀釋液、中和劑各1 mL接種于培養(yǎng)基，作為陰性對照組。

⑤將陽性對照組、陰性對照組和消毒組樣本，每份吸取1 mL，以瓊脂傾注法接種平皿，每個(gè)樣品接種2個(gè)平皿，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，觀察最終結(jié)果。

3 結(jié)果與分析

3.1 中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)

不同菌種、不同消毒劑含量對應(yīng)的中和劑結(jié)果如表1，表2，表3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同濃度的消毒劑、不同菌種所對應(yīng)的中和劑不同，所篩選的中和劑可有效中和消毒液對實(shí)驗(yàn)菌的殘留作用，且中和產(chǎn)物對實(shí)驗(yàn)菌的生長無明顯的影響。

3.2 殺菌實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果（見表4）表明，自制消毒片有效氯含量為200 mg/L和250 mg/L時(shí)，僅作用2 min，對大腸桿菌平均殺滅對數(shù)值＞5，對白色念珠菌作用10 min時(shí)平均殺滅對數(shù)值＞5；有效氯含量為500 mg/L時(shí)，僅作用2 min就對白色念珠菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有較好的殺滅效果，平均殺滅對數(shù)值＞5。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出該消毒片對3種菌的效果為：大腸桿菌＞金黃色葡萄球菌＞白色念珠菌，且隨著時(shí)間和濃度的增加，三氯異氰脲酸的殺菌性能更強(qiáng)。

表1 消毒劑濃度為200 mg/L時(shí)不同菌種中和劑鑒定結(jié)果

表2 消毒劑濃度為250 mg/L時(shí)不同菌種中和劑鑒定結(jié)果

表3 消毒劑濃度為500mg/L時(shí)不同菌種中和劑鑒定結(jié)果

表4 殺菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.3 物體表面現(xiàn)場消毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果

對30個(gè)區(qū)域消毒前后菌落數(shù)比較，結(jié)果顯示用500 mg/L的消毒劑噴灑物體表面，作用5 min后，對自然菌的殺滅對數(shù)值＞1.0。

4 結(jié)論

本文所研究的消毒泡騰殺菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明有效氯含量為500 mg/L時(shí)，僅作用2 min就對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌有較強(qiáng)的殺滅作用。物體表面實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，有效氯含量為500 mg/L的消毒劑對自然菌也有較好的殺滅作用。目前市場上三氯異氰尿酸消毒片種類繁多，但我國對其可使用濃度以及安全性沒有明確的標(biāo)準(zhǔn)，隨著人們消毒意識的不斷提高，三氯異氰尿酸的市場要求亟需得到規(guī)范[4]。