蘇德信，李海榮，梁美霞，黃燕平

（廣東江門市職業(yè)病防治所，廣東 江門 529000）

0 引言

乙型病毒性肝炎（以下簡稱“乙肝”）為我國最為常見的病毒性肝炎類型，其發(fā)病由乙肝病毒的感染及增殖所致，具有較強的傳染性[1]。據(jù)2019 年我國頒布的最新傳染病分析報告中顯示，國內(nèi)乙肝病毒攜帶人數(shù)已高達9300 萬，且這一數(shù)據(jù)呈現(xiàn)了逐年升高趨勢[2-4]。目前臨床主要采取加強民眾乙肝血清標志物篩查及疫苗接種兩種方式預(yù)防乙肝病情傳播，其中乙肝五項檢測也成為了乙肝疾病診斷、抗體形成與預(yù)后評估的重要依據(jù)[5]。電化學發(fā)光法（ECL）與酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）均為乙肝病毒常用的檢驗方法，本次研究進一步對比兩種檢測方法在乙肝五項血清標志物檢測中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年1 月至2020 年12 月我所擬行乙肝五項檢測的240 份臨床血清標本為研究對象，其中男106 份，女134 份，年齡18～65 歲，平均（40.19±4.76）歲。

1.2 儀器與試劑

ECL法采用羅氏E411全自動電化學發(fā)光分析儀，試劑、定標液及質(zhì)控品為儀器配套產(chǎn)品。儀器經(jīng)校準，質(zhì)控后再進行試驗。

ELISA 法試劑用北京萬泰診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法），主要儀器有匯松PW-960 洗板機、匯松M580酶標儀、普和希電熱恒溫培養(yǎng)箱。

1.3 檢測方法

被檢者于清晨空腹狀態(tài)下采集5mL 肘部靜脈血,于室溫環(huán)境下以4000r/min，離心5min，收集血清標本。所有血清標本均分為兩份，分別采用ECL 法與ELISA 法進行乙肝五項標志物檢測，包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb。ECL 法如下：ECL 是一種在電極表面由電化學引發(fā)的特異性化學反應(yīng)，實際上是電化學和化學發(fā)光兩個過程的完美結(jié)合。電化學發(fā)光免疫測定是電化學發(fā)光（ECL）和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物，直接以[Ru（bpy）3]2 ＋標記抗體，反應(yīng)是標記物直接發(fā)光。且[Ru（bpy）3]2 ＋在電極表面的反應(yīng)過程可以周而復(fù)始進行，產(chǎn)生許多光子，使光信號得以增強。結(jié)果判定：HBsAg、HBeAg的陽性標準為COI ≥1.0,HBeAb、HBcAb 陽性標準為COI ≤1.0,HBsAb 陽性標準為檢測值＞10mIU/mL。

ELISA 法如下：取所需數(shù)量微孔條固定于支架，按序編號。HBsAg 每孔加入20μL 樣品稀釋液，接著分別在相應(yīng)孔中加入100μL 陰、陽性對照血清或待測樣品，置37℃溫育60min 后取出分別在每孔中加入酶50μL，再置37℃溫育30min 后取出，去除微孔反應(yīng)條內(nèi)液體并洗滌5 次、洗滌后扣干（每次應(yīng)保持30～60s 的浸泡時間），每孔加入底物A、B 液各50μL，輕拍混勻，將其置37℃溫育30min 后取出每孔加入終止液50μL，混勻，測定（10min 內(nèi)測定結(jié)果，用空白孔調(diào)零后測定各孔A 值）。HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 分別在相應(yīng)孔中加入50μL 陰、陽性對照血清或待測樣品，接著分別在每孔中加入酶50μL，置37℃溫育30min 后取出用洗滌液充分洗滌5 次、洗滌后扣干（每次應(yīng)保持30～60s 的浸泡時間），每孔加入底物A、B 液各50μL，輕拍混勻，置37℃溫育15min 取出每孔加入終止液50μL，混勻，測定（10min 內(nèi)測定結(jié)果，用空白孔調(diào)零后測定各孔A 值）。結(jié)果判定：HBsAg、HBsAb、HBeAg 陽性標準為樣品A 值≥臨界值（CUTOFF）；HBeAb、HBcAb 陽性標準為樣品A 值≤臨界值（CUTOFF）。

選擇HBsAb 作為重復(fù)性試驗項目，評價兩種方法的重復(fù)性，選擇不同濃度血清標本3 份，按照上述方法測定20 次，統(tǒng)計批內(nèi)變異系數(shù)（CV），另取3 份不同濃度的血清標本予以分裝并進行冰凍處理，每日測定1 次，共測定20d，統(tǒng)計批間CV。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 24.0 統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用（n/%）表示，χ2檢驗，計量資料用（）表示，t檢驗，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 ECL 法與ELISA 法檢測乙肝五項結(jié)果對比

ECL 法檢測HBcAb、HBsAg 陽性率分別為55.83%、28.75%，顯著高于ELISA 法檢測HBcAb、HBsAg 的陽性率，有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）；其余指標兩種檢測方法陽性率對比，均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），見表1。

表1 ECL 法與ELISA 法檢測乙肝五項結(jié)果比較[n/%]

2.2 ECL 法與ELISA 法檢測乙肝五項靈敏性對比

將乙肝五項各項目ECL 法與ELISA 法檢測結(jié)果不符標本進一步進行重復(fù)檢測，結(jié)果顯示：ECL 法檢測HBcAb、HBsAg 兩個項目的靈敏性明顯高于ELISA法檢測結(jié)果，見表2。

表2 ECL 法與ELISA 法檢測乙肝五項靈敏性比較（n）

3 討論

乙肝病情初始階段，患者的臨床癥狀往往不具有特異性，極易出現(xiàn)漏診或誤診情況[6]，但如乙肝病情未及時引起重視并進行規(guī)范治療，有進展為肝硬化甚至肝癌的風險，嚴重威脅患者健康[7,8]。因此，加強乙肝篩查并進行早期診斷、規(guī)范治療，對于控制病情進展具有重要意義。

乙肝病情的診斷主要采取乙肝病毒血清學檢驗，近年隨著生物學技術(shù)的發(fā)展，臨床檢測乙肝病毒血清學方法及技術(shù)水平也得以逐步提升，其中ECL 法與ELISA 法仍為臨床運用最為廣泛的檢驗方法。ECL法所運用技術(shù)為電化學發(fā)光測定技術(shù)，在生化指標檢驗過程中應(yīng)用廣泛，具有較高的靈敏度，檢測過程中運用高特異性的免疫反應(yīng)技術(shù)，形成了具有一定特點的新型免疫檢測方法，檢驗過程中的突變抗體不會對原有抗體產(chǎn)生影響，能夠有效識別多種逃逸的變異株，同時受人為因素的作用較小，有效避免了外界因素對檢驗結(jié)果的干擾，確保了檢測結(jié)果的準確性。ELISA 法則主要將一定濃度的抗原或抗體通過物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待檢標本，通過酶標物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少。ELISA 法的操作較為簡單，但其最后測定的是顏色的光密度，其精密度和敏感度不如發(fā)光法，檢驗結(jié)果存在出現(xiàn)誤差的風險。

以往臨床多采用ELISA 法檢測乙肝五項血清標志物，作為乙肝臨床診斷及療效觀察的實驗室依據(jù)。近年來，ECL 法逐步在臨床運用并推廣，但多數(shù)檢驗人員對于兩種檢測技術(shù)的異同點了解不深入。為此，本次研究進一步對比了乙肝五項血清標志物運用ECL法檢測與ELISA 法檢測的價值，結(jié)果顯示：ECL 法檢測HBcAb、HBsAg 陽性率分別為55.83%、28.75%，顯著高于ELISA 法檢測HBcAb、HBsAg 的陽性率（P＜0.05）。將乙肝五項各項目ECL 法與ELISA 法檢測結(jié)果不符標本進一步進行重復(fù)檢測，結(jié)果顯示：ECL 法檢測HBcAb、HBsAg 兩個項目的靈敏性明顯高于ELISA 法檢測結(jié)果，研究進一步證實了ECL 法檢測的靈敏度高于ELISA 法，尤其在HBcAb、HBsAg 兩項指標的檢測中更為明顯。分析其原因：ECL 法檢測過程中清洗的效率更高，且受人為因素的影響更小，因此陽性檢出率相對更高；而ELISA 法檢測時，極易因高血脂、高膽紅素、溶血等標本異常情況對檢測結(jié)果準確性產(chǎn)生影響。

本次研究中，除了HBcAb、HBsAg 的其余指標兩種檢測方法檢測陽性率對比差異不明顯（P＞0.05），該結(jié)論與相關(guān)研究中的報道略有差異，分析其原因，可能與近年來ELISA 檢測技術(shù)的改良與儀器設(shè)備精準性的提高等因素相關(guān)。與重復(fù)檢測結(jié)果對比發(fā)現(xiàn)，本次研究中ELISA 法檢測結(jié)果仍舊存在少量假陽性或假陰性情況，可能與抗體來源或純化工藝等因素相關(guān)，但本研究中的假陽性或假陰性多數(shù)均在臨界值附近，因此考慮可能與ELISA 法檢測重復(fù)性差或局限性相關(guān)。ELISA 法操作簡單、成本低等優(yōu)勢已經(jīng)得到臨床的普遍認可，鑒于其靈敏度不理想，檢測過程中常需要反復(fù)予以洗板，但仍可能因孔間污染、孔間差異、主觀結(jié)果判定等因素出現(xiàn)檢測結(jié)果與實際情況不符的情況，因此不建議將其作為窗口期標本或低濃度標本的測定。目前ECL 法已經(jīng)全面實現(xiàn)了檢測的自動化與標準化，乙肝血清標志物檢測結(jié)果均可以量化并出具結(jié)果，各試劑均有配套的質(zhì)控品，保證了儀器檢測的精準性，此外，檢測過程中全程進行自動化加樣，也避免了人為誤差對檢測結(jié)果的影響，本次研究也證實ECL 法檢測乙肝血清標志物的靈敏性更高，尤其適用于窗口期標本或低濃度標本的測定，減少了漏檢情況的發(fā)生。

綜上所述，乙肝五項血清標志物運用ECL 法檢測與ELISA 法對比可重復(fù)性更好，且ECL 法檢測HBcAb、HBsAg 兩項指標的靈敏度更高，有利于提升乙肝五項檢測的準確性，為臨床提供更為可靠的參考。