梁超堅(jiān),曾德理,龐麗麗,覃碧靜
(廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院,廣西 南寧 530000)
新生兒溶血?。℉emolytic disease of the newborn,HDN)是一種由母嬰血型不合而誘發(fā)的新生兒免疫溶血性疾病。臨床上最常見的HDN為新生兒ABO溶血?。ㄖ敢蚰缸覣BO血型不合而導(dǎo)致的HDN),其次為新生兒Rh溶血病。肝脾腫大、黃疸是HDN患兒的主要臨床表現(xiàn),部分病情嚴(yán)重者可發(fā)生膽紅素腦病[1]。對此病患兒的病情進(jìn)行早診斷、早治療是控制其病情、改善其預(yù)后的關(guān)鍵。目前,臨床上主要是通過進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)(包括直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體釋放試驗(yàn)及游離抗體試驗(yàn))來診斷HDN。微柱凝膠法是一種新型的將抗原抗體反應(yīng)與凝膠層析技術(shù)相結(jié)合的檢測技術(shù)。本文主要是探討采用微柱凝膠法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)診斷HDN的效果。
選擇2018年5月至2019年10月期間我院收治的500例疑似患有HDN的新生兒作為研究對象。在這些新生兒中,有男285例,女215例;其日齡為1~6 d,平均日齡為(1.93±1.01)d。
采用微柱凝膠法對這500例新生兒及其母親進(jìn)行ABO血型及Rh(D)血型鑒定,方法是:抽取其靜脈血2 mL,置于抗凝試管中,采用微柱凝膠卡式法進(jìn)行血型鑒定。依據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》中的規(guī)定進(jìn)行操作。微柱凝膠血型卡由長春博迅生物技術(shù)有限公司生產(chǎn),檢驗(yàn)過程中所用的抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清、ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞和Rh(D)血型鑒定試劑均由上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)。采用微柱凝膠法對這500例新生兒進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn),方法是:1)直接抗人球蛋白試驗(yàn)。采集新生兒的靜脈血2 mL,對血液標(biāo)本進(jìn)行離心處理,分離出紅細(xì)胞。用生理鹽水對分離出的紅細(xì)胞進(jìn)行多次洗滌,配制成0.8%的紅細(xì)胞懸液。將50 μl的紅細(xì)胞懸液加入到微柱凝膠孔中,進(jìn)行10 min的離心處理(轉(zhuǎn)速為1030 r/min),然后對結(jié)果進(jìn)行觀察、判讀。若紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中,可認(rèn)定檢測結(jié)果呈陽性。2)游離抗體試驗(yàn)。配制0.8%的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液。在微柱凝膠卡的A孔、B孔和O孔中分別加入50 μl的A、B、O紅細(xì)胞和50 μl的血清。將上述標(biāo)本置于37℃的凝膠卡孵育器中孵育15 min后進(jìn)行10 min的離心處理(轉(zhuǎn)速為1030r/min),然后對結(jié)果進(jìn)行觀察、判讀。判定試驗(yàn)結(jié)果呈陽性的標(biāo)準(zhǔn)同上。3)抗體釋放試驗(yàn)。將500 μl經(jīng)過4次洗滌的紅細(xì)胞置于試管中,并在試管中加入等量的生理鹽水。將上述標(biāo)本置于56℃的水浴箱中孵育10 min后進(jìn)行1 min的離心處理(轉(zhuǎn)速為3000 r/min),取上清液作為放散液。在微柱凝膠卡的A孔、B孔和O孔中分別加入50 μl的A、B、O紅細(xì)胞,然后各加入100 μl的放散液,在37℃的凝膠卡孵育器中孵育15 min,之后進(jìn)行10 min的離心處理(轉(zhuǎn)速為1030 r/min)。對結(jié)果進(jìn)行觀察、判讀。判定試驗(yàn)結(jié)果呈陽性的標(biāo)準(zhǔn)同上。
觀察對這500例新生兒及其母親進(jìn)行ABO血型及Rh(D)血型鑒定的結(jié)果。觀察采用微柱凝膠法對這500例新生兒進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果。
用SPSS 20.0軟件處理本研究中的數(shù)據(jù),計(jì)數(shù)資料用%表示,用χ2檢驗(yàn),計(jì)量資料用±s表示,用t檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
對這500例新生兒及其母親進(jìn)行ABO血型鑒定的結(jié)果顯示,這些新生兒中ABO血型為A型的新生兒有225例(占45%),為B型的新生兒有275例(占55%),其母親的ABO血型均為O型。對這500例新生兒進(jìn)行Rh(D)血型鑒定的結(jié)果均呈陽性。對這500例新生兒的母親進(jìn)行Rh(D)血型鑒定的結(jié)果顯示,其中鑒定結(jié)果呈陽性的新生兒母親有498例,鑒定結(jié)果呈陰性的新生兒母親有2例。
采用微柱凝膠法對這500例新生兒進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果顯示,試驗(yàn)結(jié)果呈陽性的新生兒有454例,陽性檢出率為90.8%;其中進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)的結(jié)果呈陽性的新生兒有58例,陽性檢出率為11.6%;進(jìn)行游離抗體試驗(yàn)的結(jié)果陽性的新生兒有268例,陽性檢出率為53.6%;進(jìn)行抗體釋放試驗(yàn)的結(jié)果呈陽性的新生兒有454例,陽性檢出率為90.8%。在這500例新生兒中,A型血新生兒和B型血新生兒中進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果呈陽性的新生兒所占的比例相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。
表1 采用微柱凝膠法對這500例新生兒進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果[例(%)]
HDN是臨床上常見的一種新生兒疾病。此病的發(fā)病原因主要是母體內(nèi)的同種免疫抗體——免疫球蛋白G(IgG)經(jīng)過胎盤進(jìn)入胎兒的血液循環(huán),與胎兒血液中的紅細(xì)胞結(jié)合,引起免疫性溶血反應(yīng)。有研究指出,對發(fā)生貧血或HDN風(fēng)險(xiǎn)較高的孕婦進(jìn)行胎兒宮內(nèi)輸血術(shù)等能降低其HDN的發(fā)生率,但不能避免其發(fā)生HDN[2]。對新生兒進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)是臨床上診斷其是否發(fā)生HDN最準(zhǔn)確的方法。有研究指出,進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)不僅能評估新生兒是否發(fā)生溶血,還可為判斷HDN是否惡化提供有力的依據(jù)[3]。溶血三項(xiàng)試驗(yàn)包括直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體釋放試驗(yàn)和游離抗體試驗(yàn)。進(jìn)行直接抗球蛋白試驗(yàn)主要是通過抗球蛋白試劑直接與紅細(xì)胞上吸附的不完全抗體相結(jié)合,在致敏紅細(xì)胞間搭橋,形成凝集,來檢測新生兒血液中的紅細(xì)胞是否受到抗體致敏。進(jìn)行直接抗球蛋白試驗(yàn)的結(jié)果呈陽性可提示新生兒血液中存在免疫性抗體IgG,導(dǎo)致其紅細(xì)胞致敏。進(jìn)行游離抗體試驗(yàn)主要是針對新生兒血液中是否存在與其紅細(xì)胞不匹配的ABO外抗體和(或)IgG 抗-A(B)進(jìn)行檢測,進(jìn)而明確其有無HDN??贵w釋放試驗(yàn)是指通過某種方法將血液中的致敏紅細(xì)胞抗體釋放出來,并用已知抗原的紅細(xì)胞來確定釋放液中抗體的特異性,進(jìn)而得出試驗(yàn)結(jié)果。本研究的結(jié)果顯示,在這500例新生兒中,A型血新生兒和B型血新生兒中進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果呈陽性的新生兒所占的比例相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這說明,新生兒的A、B血型與其發(fā)生新生兒ABO溶血病無關(guān)。這一結(jié)果與蔡大鳳等[4]的報(bào)道基本一致。但秦華等[5]報(bào)道稱,A型血的新生兒HDN的發(fā)生率高于B型血的新生兒。陳陸飛等[6]報(bào)道稱,B型血的新生兒HDN的發(fā)生率高于A型血的新生兒。導(dǎo)致這一情況出現(xiàn)的原因可能是研究對象所在的區(qū)域不同,其血型基因頻率分布存在差異。本研究的結(jié)果顯示,進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)的陽性檢出率為11.6%,進(jìn)行游離抗體試驗(yàn)的陽性檢出率為53.6%,進(jìn)行抗體釋放試驗(yàn)的陽性檢出率為90.8%。這說明,在溶血三項(xiàng)試驗(yàn)中,進(jìn)行抗體釋放試驗(yàn)的陽性檢出率最高。一旦進(jìn)行抗體釋放試驗(yàn)的結(jié)果呈陽性,不論其他兩項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果如何,都可以確定新生兒發(fā)生HDN。導(dǎo)致直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性檢出率偏低的原因可能是新生兒的紅細(xì)胞中攜帶的抗原表位數(shù)只有成人的1/2~1/4,因此結(jié)合抗體的致敏紅細(xì)胞較少[7]。微柱凝膠法是將抗原抗體反應(yīng)與凝膠層析技術(shù)相結(jié)合的一種檢測方法。用微柱凝膠法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)具有操作簡單、方便、標(biāo)本用量少、結(jié)果準(zhǔn)確易判斷、診斷的敏感性高、特異性強(qiáng)、受人為因素影響小、與臨床診斷的符合率高等優(yōu)點(diǎn)[8]。另外,采用微柱凝膠法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)還可直觀地觀察檢測結(jié)果,無需借助顯微鏡進(jìn)行觀察。在同類研究中,張?jiān)伔糩9]和趙冬梅[10]均認(rèn)為與采用試管法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)相比,采用微柱凝膠法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的陽性檢出率和診斷的準(zhǔn)確率均更高。
綜上所述,采用微柱凝膠法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)診斷新生兒溶血病的效果較好,可在臨床上推廣應(yīng)用。但本研究也存在一定的不足之處(如樣本量少、結(jié)果未引用客觀性指標(biāo)進(jìn)行評價(jià)及研究的時(shí)間短等),在今后的研究中我們將進(jìn)一步加大樣本量,在結(jié)果中引用具有說服力的指標(biāo),并延長研究時(shí)間,以進(jìn)一步證實(shí)本研究結(jié)論。