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        4種香花型石斛花朵揮發(fā)性成分GC-MS分析

        2021-06-11 01:43:48姬語潞張寶瓊
        中國農(nóng)學通報 2021年13期
        關鍵詞:金釵萜烯石斛

        曹 樺,許 鳳,陸 琳,姬語潞,陳 翔,張寶瓊,李 涵

        (1云南省農(nóng)業(yè)科學院花卉研究所/國家觀賞園藝工程技術研究中心,昆明 650205;2福建省林業(yè)科技試驗中心,福建南靖 363600;3云南農(nóng)業(yè)大學熱帶作物學院,云南普洱 665000)

        0 引言

        石斛屬(Dendrobium)是蘭科(Orchidaceae)中較大的屬之一,與蝴蝶蘭、文心蘭、卡特蘭并稱為世界四大觀賞洋蘭,主要應用在切花、盆花方面。全世界的石斛資源非常豐富,有1500余種[1],中國分布有81個原生種(變種),主要分布于秦嶺、淮河以南的各省區(qū),以云南省分布最多,共63種。Kaise等[2]對140個石斛屬植物進行調(diào)查,發(fā)現(xiàn)一半左右的石斛具有花果香和草本香。香氣是石斛蘭觀賞價值的重要性狀之一,目前石斛屬香氣資源還沒得到很好的開發(fā)應用,栽培石斛蘭具香氣的品種也不多[3],選育出香氣俱佳的品種是石斛蘭育種的趨勢之一。

        國外對石斛屬植物花的香氣成分研究報道主要集中在對麝香石斛(D.parishii)、檀香石斛(D.anosmum)、長梳石斛(D.brymerianum)、細莖石斛(D.moniliforme)和黑毛石斛(D.willia-msonii)等花精油主要成分方面[4]。國內(nèi)報道了利用有機溶劑或水蒸氣蒸餾法提取鐵皮石斛(D.catenatum)、細莖石斛(D.moniliforme)、鼓槌石斛(D.chrysotoxum)、疊鞘石斛(D.denneanum)、球花石斛(D.thyrsiflorum)、金釵石斛(D.nobile)等藥用石斛花朵的揮發(fā)油[5-8]。鮮花的揮發(fā)性成分能真實地反映植物的花香,不同產(chǎn)地、不同栽培方式對石斛花朵揮發(fā)性成分影響很大。云南是石斛的主要產(chǎn)地,云南省原生地的石斛屬芳香揮發(fā)性成分研究卻少有報道。本研究采用SPME/GC-MS技術對云南4種香花型石斛原生種鮮花花朵的揮發(fā)性成分進行分析、鑒定,旨在評價和篩選有價值的石斛芳香種質(zhì)資源,為培育香型石斛蘭品種和后期產(chǎn)品開發(fā)利用提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        4種帶香味的石斛屬盛開期花朵,包括兜唇石斛(D.aphyllum)、金釵石斛(D.nobile)、鐵皮石斛(D.candidum)和美花石斛(D.loddigesii),采自云南省農(nóng)業(yè)科學院花卉研究所蘭花資源圃。

        1.2 方法

        1.2.1 香氣采集 每種材料選5株作為采集對象。于晴天10:00—11:00采樣后置于玻璃瓶中,采用固相微萃取法,室溫下,65 μm PDMS/DVB萃取頭萃取50 min進樣。

        1.2.2 GC-MS條件

        (1)GC條件:將樣品依次放在GC/MS進樣室中,起始溫度40℃,程序升溫3℃/min至80℃,再5℃/min升溫至280℃,保持10 min;柱流量1.0 mL/min;進樣口溫度250℃;柱前壓100 kPa;分流比5:1;載氣為高純氦氣。

        (2)MS條件:電離方式EI,電子能量70 eV,傳輸線溫度250℃,離子源溫度230℃,四極桿溫度150℃,掃描質(zhì)量范圍35~500 amu。GC/MS氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀是美國AgilentTechnologies公司HP6890GC/5973MS。采用wiley7n.l和NIST98.L標準譜庫對香氣成分進行檢索,結(jié)合保留時間計算化合物的保留指數(shù)(Kovàts retention indices)定性。依據(jù)總離子流各色譜峰平均峰面積,并通過面積歸一化法,計算各組分的相對百分含量進行定量分析。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 石斛花朵主要揮發(fā)性成分組成

        4種石斛盛花期揮發(fā)性成分的總離子流圖見圖1。經(jīng)GC/MS分析,鑒定出兜唇石斛揮發(fā)性化合物成分30種,相對含量為98%;金釵石斛揮發(fā)性化合物成分31種,相對含量為97.25%;鐵皮石斛揮發(fā)性化合物成分31種,相對含量為98.6%;美花石斛揮發(fā)性化合物成分20種,相對含量為99.7%。不同種類石斛花朵主要揮發(fā)性成分組成不同(圖2)。兜唇石斛、金釵石斛、鐵皮石斛主要以萜烯類化合物為主,其相對含量分別為51.19%、75.32%、70.90%;美花石斛主要以酯類化合物為主,其相對含量為88.44%。

        圖1 4種石斛揮發(fā)性成分的GC/MS總離子流圖

        圖2 4種石斛屬植物花朵主要揮發(fā)性成分組成

        2.2 石斛鮮花花朵主要揮發(fā)性成分比較

        由表1可知,兜唇石斛鑒定出30種揮發(fā)性成分,其中乙酸異辛酯相對含量最高(45.86%),其次為萜烯類化合物反式-α-羅勒烯(37.3%),其余百分含量在1%以上的揮發(fā)性成分有姜烯、α-律草烯、β-倍半水芹烯、α-柏木烯和正辛醇等5種,總相對含量為10.14%。金釵石斛鑒定出31種揮發(fā)性成分,其中β-石竹烯相對含量最高(20.7%),其余百分含量在1%以上的揮發(fā)性成分有水楊酸己酯、愈創(chuàng)木烯、環(huán)苜蓿烯、β-廣藿香烯、古蕓烯、α-蒎烯、α-布黎烯、β-瑟林烯、芳樟醇、正辛醇等16種,總相對含量達70.86%。鐵皮石斛鑒定出31種揮發(fā)性成分,其中α-蒎烯相對含量最高(31.49%),其次為檸檬烯和桉葉油醇,其相對含量分別為14.6%和13.6%,其余百分含量在1%以上的揮發(fā)性成分有月桂烯、檜烯、反式-α-羅勒烯、α-松油醇等10種,總相對含量為32.09%。美花石斛共鑒定出20種揮發(fā)性成分,其中乙酸異辛酯相對含量最高(83.21%),其余百分含量在1%以上的揮發(fā)性成分有反式-α-羅勒烯、正辛醇、芳樟醇、丁香酚等6種,其總相對含量為13.12%,

        表1 4種石斛花朵主要揮發(fā)性成分及相對含量

        續(xù)表1

        續(xù)表1

        通過GC/MS,4種石斛花朵共鑒定出揮發(fā)性成分80種。其中4種石斛共有的成分為反式-α-羅勒烯和月桂烯。共有5種揮發(fā)性成分存在于3種石斛中,其中正辛醇和α-律草烯為兜唇石斛、金釵石斛和美花石斛共有成分,芳樟醇和2,6-二叔丁基對甲酚為金釵石斛、鐵皮石斛和美花石斛共有成分,β-石竹烯為兜唇石斛、金釵石斛和鐵皮石斛共有成分。共有16種揮發(fā)性成分存在于2種石斛中,乙酸異辛酯為兜唇石斛和美花石斛的主要揮發(fā)性成分;在兜唇石斛和金釵石斛中檢測出含量較低含氮化合物吲哚,相對含量分別為0.06%和0.18%。4種石斛均含有特有的揮發(fā)性成分。兜唇石斛特有揮發(fā)性化合物共13種,主要為酯類、酮類和萜烯類化合物。金釵石斛特有揮發(fā)性化合物共13種,主要為醇類化合物為橙花叔醇、酮類化合物胡椒基甲基酮、萜烯類和芳香類。鐵皮石斛特有的揮發(fā)性化合物最多,共有21種,主要為酯類、醇類化合物桉葉油醇和α-松油醇、醛類、萜烯和烷烴。美花石斛特有揮發(fā)性化合物共10種,主要為酯類化合物、醇類化合物、酮類化合物等。

        3 結(jié)論與討論

        花香是由植物花朵內(nèi)所有揮發(fā)性香味組分共同作用形成的,具有吸引昆蟲傳粉和防御的功能[8]。鮮花的香氣成分常用萃取法或水蒸氣蒸餾法提取[2]。利用有機溶劑萃取以及水蒸汽蒸餾法,高溫會破壞植物結(jié)構(gòu),導致?lián)]發(fā)物的分解或流失,同時pH條件會改變花朵中原有的揮發(fā)物成分[9]。新鮮花朵的頂空固相微萃取方法測得香味化合物含量偏多,能有效減少成分損失,使結(jié)果接近于植株的真實狀態(tài)[10]。各揮發(fā)性成分對花香的貢獻除受化合物相對含量影響外,即具有較高相對含量的化合物可作為花的特征香氣[11-12],也由該種成分的香氣閾值決定[13],據(jù)報道萜烯類和酯類的香氣閾值較低[14-15]。

        前人利用溶劑對鐵皮石斛、細莖石斛、球花石斛、金釵石斛、美花石斛等石斛花朵揮發(fā)油進行提取并進行GC-MS分析[16-20],測得其揮發(fā)性成分主要含有萜烯類、醛類和脂肪酸類等化合物。采用SPME/GC-MS相結(jié)合技術,王元成等[21]確定了濃香型翅梗石斛和細葉石斛新鮮花朵的特征性揮發(fā)成分為羅勒烯、β-石竹烯和d-檸檬烯,細葉石斛花的特征香氣成分為羅勒烯、β-石竹烯、芳樟醇。楊曉蓓等[22]從流蘇石斛花中檢測出23種香氣成分,其主成分為α-蒎烯(45.06%)和β-蒎烯(23.22%)。李崇暉等[23]對4種石斛屬植物花朵揮發(fā)性成分進行了分析,發(fā)現(xiàn)不同石斛花朵揮發(fā)性成分的組成和含量差異明顯,鼓槌石斛和細葉石斛的主要香氣成分是3-蒈烯,羅河石斛的主要香氣成分是水楊酸甲酯,密花石斛花朵主要揮發(fā)性成分是2-亞甲基-4,8,8-三甲基-4-乙烯基-雙環(huán)[5.2.0]壬烷。丁靈等[24]對7種秋石斛品種的花朵揮發(fā)性成分進行研究,發(fā)現(xiàn)不同品種揮發(fā)性成分的組成和含量明顯不同,5種具香氣的秋石斛花朵所含揮發(fā)性成分絕大部分都是萜烯類化合物,主要包括3-蒈烯、芳樟醇、α-可巴烯和α-法尼烯,2種不具香氣的秋石斛品種主要揮發(fā)性成分為胡莫柳酯和異丁子香酚。

        本研究采用SPME/GC-MS技術,從兜唇石斛、金釵石斛、鐵皮石斛和美花石斛4種帶香味的石斛屬石斛組花朵中鑒定出80種化合物,以萜烯類、酯類和醇類為主,4種石斛所共有的揮發(fā)性成分為反式-α-羅勒烯和月桂烯。乙酸異辛酯香氣閾值為12 μg/kg[25],具有水果香味,是兜唇石斛和美花石斛的主要揮發(fā)性成分和賦香性成分,對鼓槌石斛的花香也具有一定的貢獻[26]。萜烯類化合物反式-α-羅勒烯有花香、草香并伴有橙花油氣息,有很強的甜香味[27],相對含量次之,是兜唇石斛和美花石斛的次要賦香性成分,同時也是翅梗石斛和細葉石斛的主要賦香成分[21];β-石竹烯具有丁香花香味,為雙環(huán)倍半萜型化合物,具有平喘、祛痰、抗炎作用[28],是金釵石斛的主要賦香成分,此外,愈創(chuàng)木烯、(+)-環(huán)苜蓿烯、水楊酸己酯、正辛醇等對花香也有一定的貢獻。鐵皮石斛花朵中的主要成分及賦香成分為具有松脂氣味的α-蒎烯,檸檬烯和桉葉油醇香氣閾值分別為10 μg/kg和1 μg/kg,對花香也有一定的貢獻,同時,桉葉油醇具有殺菌作用,為鐵皮石斛特有成分之一。

        本研究表明不同種類的石斛花朵揮發(fā)性成分不同,主要成分的組成和相對含量也有較大差別。筆者對云南省4種原生地香花型石斛的揮發(fā)性成分進行了初步研究,但關于云南其他香花型石斛的揮發(fā)性成分的種類及應用內(nèi)標對揮發(fā)性成分的定量分析,并未做相應的研究,因此,在后續(xù)研究中應當對云南整個石斛資源的花朵揮發(fā)性成分做出系統(tǒng)分析,在此基礎上對主要揮發(fā)性成分進行分析和鑒定,為挖掘云南石斛屬香氣基因資源、培育香型石斛蘭品種和開發(fā)蘭花精油產(chǎn)品提供理論基礎。

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