周文峰 金朝紅 梁琳珂

地中海貧血簡稱地貧,是一種遺傳性疾病,由于珠蛋白基因突變或缺失導致珠蛋白肽鏈合成不足,使紅細胞數(shù)量和血紅蛋白濃度比例失衡,導致不同程度的貧血和輕重各異的臨床表現(xiàn)［1］。α 珠蛋白鏈缺乏者稱為α 地貧,β 珠蛋白鏈缺乏者稱為β 地貧,同時還有α 和β 鏈都異常的復(fù)合型基因異常及特殊罕見類型的肽鏈基因缺陷等［2］。該疾病廣泛分布于世界各大地區(qū),在我國的兩廣地區(qū)、云貴川、東南沿海及湖南、湖北等地區(qū)多見,北方則少見［3］。目前除了輸注紅細胞,缺乏其他有效手段,國外有使用羥基脲調(diào)節(jié)肽鏈合成改善貧血的治療方法,但療效不明顯［4］；造血干細胞移植是目前臨床唯一治愈重型β 地貧的方法,但國內(nèi)外尚無一致認可的臨床指南或共識,無法廣泛有效的開展［5］；基因治療可以擺脫輸血依賴,理論上可以根治地貧,這為地貧提供了新的有希望的治療方向,但目前處于研究階段［6］。因此通過合理的檢查手段和方法進行地貧的篩查和確診,發(fā)現(xiàn)潛在地貧基因異?；颊?避免重型地貧嬰兒的出生是控制該病的最經(jīng)濟有效的手段。本研究主要分析MCV、MCH 及EFT 結(jié)合地貧基因檢測在地貧診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016 年9 月～2020 年9 月就診本院的3956 例普通患者,將血常規(guī)指標MCV＜82 fl 或/和MCH＜27 pg 的患者納入研究對象,行紅細胞脆性試驗,溶血百分率＜55%的患者為陽性,應(yīng)用地貧基因檢測進行確診。最終將224 例地貧基因突變患者設(shè)為觀察組,另將248 例地貧基因陰性患者設(shè)為對照組。

1.2 方法 血常規(guī)：使用希森美康XN2000 血細胞分析儀(希森美康XN 血球試劑)進行檢驗,MCV 正常參考值為82～100 fl,低值設(shè)置為82 fl,MCH 正常參考值為27～34 pg,低值設(shè)置為27 pg；對MCV＜82 fl 和(或)MCH＜27 pg 的患者行紅細胞脆性試驗。

紅細胞脆性試驗：采用直接比色法,使用儀器是日立7600 全自動生化分析儀,由廣州科方生物技術(shù)股份有限公司提供的檢測試劑,設(shè)置為溶血百分率＜55%為陽性。

地貧基因檢測：采用深圳匯研科創(chuàng)Expure-20 核酸提取儀；珠海黑馬HEMA9600 基因擴增儀；亞能(深圳)YN-H18 型全自動核酸分子雜交儀及地貧基因提取和檢測試劑盒。α 地貧基因檢測采用gap-PCR 法,非缺失型α 地貧基因突變檢測和β 地貧基因檢測采用PCR-反向點雜交法。

1.3 觀察指標 比較觀察組中α 地貧基因突變患者與對照組的MCV、MCH、EFT 水平；比較觀察組中β 及αβ 地貧混合基因突變患者與對照組的MCV、MCH、EFT 水平；比較觀察組和對照組在MCV、MCH、EFT 的單一檢出率和三項聯(lián)合檢出率。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0 統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標準差()表示,采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 地貧基因突變患者和陰性對照組MCV、MCH、EFT 水平比較 血常規(guī)化驗發(fā)現(xiàn)α 地貧、β 地貧及αβ 地貧混合患者的MCV、MCH、EFT 指標均低于對照組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1,表2。

表1 α 地貧基因突變患者與對照組MCV、MCH、EFT 水平比較()

表1 α 地貧基因突變患者與對照組MCV、MCH、EFT 水平比較()

注：與對照組比較,aP＜0.05

表2 β 及αβ 地貧混合基因突變患者與對照組MCV、MCH、EFT 水平比較()

表2 β 及αβ 地貧混合基因突變患者與對照組MCV、MCH、EFT 水平比較()

注：與對照組比較,aP＜0.05

2.2 觀察組和對照組MCV、MCH、EFT 的單一檢出率和三項聯(lián)合檢出率比較 觀察組MCV、MCH、EFT 單一檢出率以及三項聯(lián)合檢出率分別為84.82%、82.59%、69.64%、91.52%,均高于對照組的18.15%、16.53%、15.32%、24.60%,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3 觀察組和對照組MCV、MCH、EFT 的單一檢出率和三項聯(lián)合檢出率比較 ［n(%)］

3 討論

我國南方地區(qū)地貧主要類型為α 地貧和β 地貧,發(fā)病率最高的是α 地貧,其次是β 地貧［7］。部分地貧基因攜帶者由于缺乏臨床癥狀而難以發(fā)現(xiàn),重度地貧患者給家庭帶來難以承受的壓力［8］。我國部分地區(qū)地貧的發(fā)病率相對較高,具有明顯的地域分布規(guī)律,據(jù)報道,在廣東地區(qū)人群中α 地貧基因突變率為4%～16%,β 地貧基因突變率約為1%～5%［9,10］。其中比例最高的α 地貧基因突變類型為SEA,最多見的β地貧基因突變類型為CD41-42(-TTCT),最常見的αβ混合型地貧基因突變?yōu)?-SEA/CD41-42 類型［11,12］。地貧基因突變分布具有地域和人群的差異性,發(fā)現(xiàn)并研究這些差異性可為地貧的預(yù)防工作提供數(shù)據(jù)支持,也可為本地區(qū)的地貧診斷方式提供借鑒。

相關(guān)研究認為紅細胞脆性試驗是篩查地貧的常用方法,紅細胞在低滲鹽水溶液中發(fā)生膨脹破裂的特性叫紅細胞脆性,脆性增高說明低滲鹽水中紅細胞更易破裂,對低滲溶液抵抗力減弱,反之為紅細胞脆性減低,紅細胞脆性減低是地貧患者的特點［13］。地貧患者的紅細胞形態(tài)為小細胞低色素改變,其中MCV、MCH水平大多會同時減低,部分為一項水平減低。本研究發(fā)現(xiàn)血常規(guī)化驗發(fā)現(xiàn)α 地貧、β 地貧及αβ 地貧混合患者的MCV、MCH、EFT 水平均低于對照組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。觀察組MCV、MCH、EFT 單一檢出率以及三項聯(lián)合檢出率均高于對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

綜上所述,地中海基因檢測是確診地貧的最佳試驗,但由于價格較貴、檢測時間較長、部分醫(yī)院無實驗室技術(shù)條件等因素限制了檢測普及,所以MCV、MCH,聯(lián)合紅細胞脆性試驗及地中?；驒z測是合理且經(jīng)濟的檢測手段,這為臨床考慮為地貧的患者提供了極大的幫助,紅細胞脆性試驗是非常成熟的技術(shù),臨床上廣泛用于貧血患者的疾病鑒別和篩查,地中海基因檢測是先進、有效、精準的試驗,為患者后續(xù)可能治療提供非常重要的臨床實驗資料。本研究在地貧患者篩查和診斷過程中可以構(gòu)建一個合理、高效、穩(wěn)定、經(jīng)濟的實驗確診體系,可以為潛在的地貧患者及地中?；驍y帶者提供了新的選擇。