陳瑤

胃癌是我國常見的消化道惡性腫瘤疾病之一，且多數(shù)患者胃癌早期癥狀隱匿，確診時多于處于胃癌進展期或晚期，患者生存預(yù)后較差。因此，對于探索胃癌相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物和血清學(xué)指標(biāo)，反映胃癌的生物學(xué)特點，提高胃癌的診斷率和患者生存率一直是臨床研究的熱點內(nèi)容。近年來，關(guān)于血清中線粒體肌酸激酶（mitochondrial creatine kinase，MtCK）在腫瘤中的異常表達及作用引起了臨床學(xué)者的關(guān)注，其包括廣泛型線粒體肌酸激酶（uMtCK）和肌節(jié)線粒體肌酸激酶（sMtCK）2 種，其中uMtCK 被認(rèn)為在前列腺癌、肝癌等惡性腫瘤中存在過表達［1］。胎球蛋白A（alpha2-Heremans-Schmid glycoprotein，AHSG）為肝細(xì)胞合成和分泌的一類糖蛋白，其可通過基質(zhì)膠促進腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，AHSG 在多種惡性腫瘤中均存在異常表達［2］。中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipo-calin，NGAL）為lipocalin 家族的一員，研究證明NGAL 與炎癥、細(xì)胞分化與凋亡、免疫反應(yīng)、組織重構(gòu)及多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)；且其表達與腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移和預(yù)后關(guān)系密切［3-4］。因此，本研究對血清uMtCK、AHSG 及NGAL 與胃癌患者病理參數(shù)及臨床預(yù)后的關(guān)系進行了探究，以探討三者作為胃癌有效診斷和預(yù)后指標(biāo)的可行性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院消化內(nèi)科2017年1月至2019年1月收治的85 例胃癌患者作為研究組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合中華醫(yī)學(xué)會消化內(nèi)鏡學(xué)分會及中國抗癌協(xié)會腫瘤內(nèi)鏡專業(yè)委員會制定的《中國早期胃癌篩查及內(nèi)鏡診治共識意見（2014年）》［5］關(guān)于胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②均對本研究知情自愿簽署知情同意書；③此前未接受放化療、手術(shù)及其他抗腫瘤藥物治療；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝腎等器質(zhì)性病變者；②合并其他惡性腫瘤者；③復(fù)發(fā)性胃癌患者及其他胃腸道疾病者；④感染、免疫系統(tǒng)疾病、造血系統(tǒng)疾病者；⑤無法配合完成研究者。其中，男44 例，女41 例，年齡平均（61.5±3.8）歲，患者組織類型、Lauren's 分型、腫瘤分化程度、TNM 分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、血管侵犯患者分布見表2。另選擇同期于本院門診健康體檢的志愿者85 例作為對照組，其中男46 例，女39 例，年齡平均（61.1±3.5）歲，均自愿參與本研究，能夠配合完成各項檢查。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過。

1.2 方法

1.2.1 病理參數(shù)統(tǒng)計

統(tǒng)計所有胃癌患者性別、年齡（≤60 歲，>60歲）、組織類型（未分化腺癌、管狀腺癌、粘液腺癌、印戒細(xì)胞癌）、Lauren's 分型（腸型胃癌、彌漫性胃癌、混合型胃癌）、腫瘤分化程度（低分化、中分化、高分化）、TNM 分期（Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期）、浸潤深度（T1、T2、T3、T4）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（N0、N1、N2、N3）、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（M0、M1）、血管侵犯（有或無）等臨床病理參數(shù)。

1.2.2 血清指標(biāo)檢測

所有研究對象均收集5 mL 空腹靜脈血，3 000 r/min 離心10 min，收集血清。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平，uMtCK 試劑盒購自上海圻明生物科技有限公司，AHSG 試劑盒購自美國Epitope Diagnostics，Inc 公司，NGAL 試劑盒購自上海依科賽生物制品有限公司。均按照試劑盒說明書所述進行步驟操作，讀取吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算血清uMtCK、AHSG 及NGAL 濃度。

1.2.3 隨訪

所有胃癌患者隨訪2～3年，統(tǒng)計期間患者任何原因?qū)е碌乃劳銮闆r，并分為生存組和死亡組，對比2 組胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平差異情況。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以（）表示，兩兩比較用t檢驗，多組間采用單因素方差分析；Cox 多因素回歸分析影響胃癌患者預(yù)后的獨立因素。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對照組血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平比較

研究組血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 研究組和對照組血清uMtCK、AHSG 及NGAL 比較Table 1 Comparison of serum uMtCK，AHSG and NGAL levels between the study group and the control group

2.2 胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析

不同年齡、性別、組織類型、Lauren's 分型胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平比較均差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。不同腫瘤分化程度、TNM 分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、血管侵犯胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析（±s）Table 2 Correlation analysis of serum uMtCK，AHSG and NGAL levels and clinicopathological parameters in patients with gastric cancer（±s）

表2 胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析（±s）Table 2 Correlation analysis of serum uMtCK，AHSG and NGAL levels and clinicopathological parameters in patients with gastric cancer（±s）

參數(shù)性別n男女44 41 t 值P 值年齡（歲）≤60>60 t 值P 值腫瘤大小（cm）≤4>4 t 值P 值Lauren's 分型腸型胃癌彌漫性胃癌混合型胃癌F 值P 值組織類型未分化腺癌管狀腺癌粘液腺癌印戒細(xì)胞癌F 值P 值腫瘤分化程度低分化中-高分化t 值P 值TNM 分期Ⅰ+ⅡⅢ+Ⅳt 值P 值浸潤深度T1/T2 T3/T4 t 值P 值淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N0 N1+N2+N3 t 值P 值遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移M0 M1 t 值P 值血管侵犯39 46 37 48 44 34 7 3 54 16 12 36 46 38 47 33 52 31 54 63 22有無69 16 t 值P 值uMtCK（μ/L）24.2±3.1 24.5±3.6 0.413 0.681 24.0±2.8 24.4±2.4 0.705 0.483 20.1±2.2 26.1±2.9 10.792 0.000 24.2±3.2 24.1±2.9 24.4±3.1 0.307 0.759 24.0±3.0 24.3±3.1 24.5±3.6 24.1±3.4 0.146 0.885 17.5±2.2 27.4±2.9 17.001 0.000 19.2±2.5 26.1±3.2 10.873 0.000 17.0±2.0 27.2±2.8 19.558 0.000 17.1±2.6 27.8±2.5 18.720 0.000 17.5±2.4 26.8±2.3 15.812 0.000 27.1±3.0 18.5±1.9 10.940 0.000 AHSG（μg/mL）325.7±44.6 322.2±41.2 0.375 0.709 318.7±44.2 324.3±40.9 0.605 0.547 295.7±39.9 332.1±55.1 3.467 0.001 320.2±43.4 323.8±44.1 326.5±47.1 0.671 0.504 323.6±44.5 327.9±49.1 321.1±41.8 322.7±40.6 0.101 0.922 265.1±33.5 341.9±56.9 7.621 0.000 275.2±36.6 336.7±41.5 7.157 0.000 301.3±39.2 329.7±45.1 2.973 0.004 296.3±46.5 360.4±55.1 5.454 0.000 299.2±36.7 331.6±42.5 3.420 0.001 360.8±43.8 244.8±3.1 21.765 0.000 NGAL（ng/mL）16.9±1.9 16.8±1.5 0.268 0.789 16.6±2.0 17.0±1.6 1.013 0.314 14.4±1.9 17.8±1.3 9.684 0.000 16.7±1.9 16.8±1.5 17.1±1.8 1.047 0.298 16.6±1.7 17.0±2.2 17.1±2.3 16.8±1.8 0.560 0.571 15.0±1.2 17.4±1.9 6.973 0.000 15.1±1.1 17.3±1.6 7.488 0.000 15.5±1.5 17.8±2.3 5.580 0.000 12.5±1.2 18.5±2.9 13.343 0.000 15.1±1.5 17.6±1.9 6.268 0.000 18.2±1.9 13.1±1.5 10.021 0.000

2.3 存活組與死亡組血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平比較

直至本研究隨訪結(jié)束，85 例胃癌患者中存活62 例，死亡23 例。存活組胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平均低于死亡組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

表3 存活組與死亡組血清uMtCK、AHSG 及NGAL 比較Table 3 Comparison of serum uMtCK，AHSG and NGAL levels between the survival group and the death group

2.4 Cox 多因素回歸分析

Cox 多因素回歸分析結(jié)果顯示，uMtCK、AHSG 及NGAL 升高為影響胃癌患者預(yù)后的獨立危險因素。見表4。

表4 Cox 多因素回歸分析結(jié)果Table 4 Cox multivariate regression analysis results

3 討論

近年來，惡性腫瘤的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈逐漸上升的趨勢，嚴(yán)重威脅了人類的身體健康和生存質(zhì)量。胃癌等惡性腫瘤的早發(fā)現(xiàn)與其預(yù)后關(guān)系密切，因此對于臨床尋求敏感性和特異性高、無創(chuàng)、易操作的理想腫瘤標(biāo)志物具有重要意義。

MtCK 為肌酸激酶（creatine kinase，CK）的同工酶之一，可催化肌酸和三磷酸腺苷之間的磷酸鍵可逆轉(zhuǎn)移并促進三磷酸腺苷的生成。MtCK 又可分為uMtCK 與sMtCK，uMtCK 為低聚的線粒體CK，是巨分子酶的一種，uMtCK 在腎臟、腦和平滑肌等組織或器官中表達，近年來多項研究報道uMtCK 在腫瘤患者病理組織或（和）血清中存在過表達，uMtCK常伴隨各種腫瘤出現(xiàn)，提示其可能為一種有效的潛在腫瘤標(biāo)志物［6-7］。AHSG 是肝細(xì)胞合成的一種磷酸化糖蛋白，為半脫氨酸蛋白酶抑制因子超家族成員。AHSG 參與了人體胰島素抵抗、骨骼代謝調(diào)節(jié)、惡性腫瘤遷移和侵襲過程［8-9］。研究顯示［10］，AHSG可介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞黏附作用，其可激活腫瘤細(xì)胞MAP和P13K/AKT 激酶信號，還可介導(dǎo)腫瘤外泌體形成，促進腫瘤細(xì)胞生長、運動和侵襲。NGAL 在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展紅發(fā)揮重要作用，但其在不同腫瘤中的作用有所差異。研究認(rèn)為［11］，NGAL 可抑制機體基質(zhì)金屬蛋白酶降解，參與食管癌、乳腺癌等腫瘤細(xì)胞的分化、侵襲和轉(zhuǎn)移，并具有加速腫瘤進程的作用。本研究結(jié)果顯示，在胃癌患者中血清uMtCK、AHSG 及NGAL 水平相較于健康人群血清水平明顯升高，在研究中，NGAL 可作為潛在的新型新型綜合治療靶標(biāo)［12］；Shi 等［13］研究認(rèn)為，AHSG 與胃癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，可作為為鑒定為胃癌的診斷生物標(biāo)志物；而等研究對于uMtCK 的生物學(xué)特性闡述中指出，其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系密切。

本研究結(jié)果提示，血清uMtCK、AHSG 及NGAL與胃癌臨床病理特征指標(biāo)存在密切相關(guān)性。uMtCK可提高腫瘤細(xì)胞對能量需求的適應(yīng)性，保護腫瘤細(xì)胞抵抗凋亡，并參與線粒體凋亡途徑和腫瘤細(xì)胞適應(yīng)性代謝過程。有研究指出［14］，AHSG可作為血清化學(xué)引誘劑，通過基質(zhì)膠促進腫瘤細(xì)胞的侵襲。研究認(rèn)為［15］，NGAL 還可促進皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而改變腫瘤微環(huán)境，進而在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。本研究中結(jié)果提示，血清uMtCK、AHSG 及NGAL 高水平患者往往在近期隨訪期間面臨著更高的死亡風(fēng)險。Cox 多因素回歸分析結(jié)果提示，uMtCK、AHSG及NGAL 升高不僅與胃癌額惡性程度及病情嚴(yán)重程度存在相關(guān)性，也預(yù)示著胃癌患者預(yù)后不良，可作為胃癌患者評估病情嚴(yán)重程度和預(yù)后的潛在指標(biāo)。

綜上所述，胃癌患者血清uMtCK、AHSG 及NGAL 存在異常升高的情況，且與胃癌進展、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后存在密切相關(guān)性，檢測相關(guān)指標(biāo)水平有助于胃癌患者的診斷和預(yù)后評估。