甘永霞 楊崢嶸 李浩 黎桂連 石向東 劉少礎(chǔ) 王曉輝 趙錦

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是艾滋?。℉uman Immunodeficien-cy Virus，HIV）防治的基礎(chǔ)，盡早并最大限度地及時(shí)診斷發(fā)現(xiàn)艾滋病感染者是有效阻斷艾滋病傳播的重要環(huán)節(jié)［1-2］?！度珖滩z測(cè)技術(shù)規(guī)范》（2015年修訂版）新增了核酸檢測(cè)作為HIV-1 感染診斷的補(bǔ)充試驗(yàn)，但對(duì)受檢者檢測(cè)前的近期內(nèi)有明確流行病學(xué)史的個(gè)體，核酸檢測(cè)結(jié)果陰性或低于最低檢測(cè)限也不能排除HIV-1 感染［3］。目前國內(nèi)使用最為廣泛的方法仍是蛋白印跡試驗(yàn)（Western blotting，WB），該方法特異性很高，出現(xiàn)不確定結(jié)果很多［4］。為更清晰認(rèn)識(shí)不確定帶型和HIV 感染之間的關(guān)系，提高HIV 感染的診斷率，現(xiàn)將2017 至2019年深圳報(bào)告的141 例HIV 抗體不確定結(jié)果的具體分析如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 樣本來源

選取2017 至2019年深圳市疾病預(yù)防控制中心艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室接收的HIV 抗體篩查有反應(yīng)的待確證樣本，包括自愿咨詢檢測(cè)點(diǎn)（VCT）、醫(yī)療機(jī)構(gòu)、血站和羈押監(jiān)管場(chǎng)所等。對(duì)所有WB法為“不確定”結(jié)果的樣本納入進(jìn)一步的研究和分析。141 例受檢者中，男性82 例，女性59 例，年齡最大83 歲，最小16 歲，平均年齡（34.99±14.23）歲。此項(xiàng)研究不會(huì)對(duì)受檢者造成額外傷害，研究經(jīng)深圳市疾病預(yù)防控制中心倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法與試劑

采用由MP 生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)免疫蛋白印跡儀及人類免疫缺陷病毒（HIV 1+2 型）抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行蛋白印跡試驗(yàn)。CD4+T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)采用貝克曼公司生產(chǎn)的Cytomics FC 500MPL 儀器及其配套的四色試劑CD45/CD4/CD8/CD3 檢測(cè)試劑盒（Syto-STATtetro CHROME CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5）。所有檢測(cè)流程及結(jié)果判定嚴(yán)格按照《全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》的要求執(zhí)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SAS9.4 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析；計(jì)量資料以（）表示，用t檢驗(yàn)分別比較轉(zhuǎn)陽者與條帶未進(jìn)展者的CD4+T 淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)和CD4+/CD8+細(xì)胞比值的差異；以P<0.05 為差異表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 帶型分布

141 例不確定樣本中，出現(xiàn)條帶p24 的占比為77.3%，條帶gp160 為32.6%，其它條帶為：gp120 為3（2.1%），gp41 為5（3.5%），p55 為2（1.4%），p17 為10（7.1%），p66 為4（2.8%），p51 為1（0.7%），p31 為1（0.7%）。

2.2 不同WB 帶型的失訪情況

109 例失訪者中，醫(yī)療機(jī)構(gòu)占45.0%（49 例），其中出現(xiàn)單一的p24 帶型失訪數(shù)為60 例，血站占50.0%（30/60）。見表1。

表1 109 例不確定樣本不同WB 帶型的失訪情況Table 1 Not follow-up in 109 uncertain samples with different WB band type

2.3 隨訪陽轉(zhuǎn)情況

32 例被隨訪的受檢者中，其中11（34.4%）例轉(zhuǎn)為陽性，21 例條帶無進(jìn)展。2 例第一帶型為（gp160、p24、p17）的陽轉(zhuǎn)為1（50%）例，10 例第一帶型為（gp160、p24）的陽轉(zhuǎn)為8（80%）例，13 例第一帶型為（p24）的陽轉(zhuǎn)為1（7.7%）例，3 例第一帶型為（gp160）的陽轉(zhuǎn)為1（33.3%）例。見表2。

表2 32 例不確定樣本的WB 帶型的陽轉(zhuǎn)情況Table 2 Positive conversion of WB band type in 32 uncertain samples

2.4 11 例陽轉(zhuǎn)的被隨訪受檢者免疫功能檢測(cè)分析

被隨訪的32 例受檢者有11 例發(fā)生了陽轉(zhuǎn)。受檢者陽轉(zhuǎn)前后的CD4+T 淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)和CD4+/CD8+細(xì)胞比值分別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

表3 11 例被隨訪受檢者陽轉(zhuǎn)前后的免疫功能指標(biāo)分析（±s）Table 3 Analysis of immune function indexes of 11 cases were followed up before and after positive rotation（±s）

表3 11 例被隨訪受檢者陽轉(zhuǎn)前后的免疫功能指標(biāo)分析（±s）Table 3 Analysis of immune function indexes of 11 cases were followed up before and after positive rotation（±s）

注：前表示為第一帶型，后表示為第二帶型，后同。

樣本序號(hào)第一帶型/第二帶型時(shí)間（天）t 值P 值t 值P 值1第一帶型CD4+絕對(duì)數(shù)418.09±190.04第二帶型CD4+絕對(duì)數(shù)383.18±97.180.6200.549第一帶型比值0.48±0.22第二帶型比值0.56±0.27-1.0280.328 1a 2 2a 3 3a 4 4a 5 5a 6 6a 7 7a 8 8a 9 9a 10 10a 11 11a gp160、p24、p17 gp160、gp120、p66、p51、gp41、p31、p24、p17 gp160、p24 gp160、gp120、p66、p51、gp41、p31、p24 gp160、p24 gp160、gp120、gp41、p24、p17 gp160、p24 gp160、gp120、p24、p17 gp160、p24 gp160、gp120、gp41、p24、p17 gp160、p24 gp160、gp120、p66、p51、gp41、p31、p24 gp160、p24 gp160、gp120、p66、gp41、p24 gp160、p24 gp160、gp120、gp41、p24 gp160、p24 gp160、gp120、gp41、p24 p24 gp160、gp120、gp41、p24、p17 gp160 gp160、gp120、p66、p51、gp41、p31、p24 69 116 34 26 34 92 32 14 14 32 90 CD4+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)（個(gè)/μL）334 405 395 549 229 249 265 304 278 356 553 393 523 396 553 432 229 249 384 525 856 357 CD4+/CD8+細(xì)胞比值0.48 0.39 1.08 1.19 0.28 0.62 0.42 0.36 0.57 0.59 0.36 0.32 0.42 0.45 0.48 0.52 0.28 0.62 0.55 0.84 0.32 0.25

2.5 21 例條帶未進(jìn)展者的免疫功能檢測(cè)分析

32 例被隨訪的受檢者中有21 例出現(xiàn)條帶未進(jìn)展。條帶未進(jìn)展受檢者前后的CD4+T 淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)的比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。條帶未進(jìn)展受檢者前后的CD4+/CD8+細(xì)胞比值的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

表4 21 例條帶未進(jìn)展者前后的免疫功能指標(biāo)分析（±s）Table 4 Analysis of the immune function indexes of 21 cases with no progress of banding（±s）

表4 21 例條帶未進(jìn)展者前后的免疫功能指標(biāo)分析（±s）Table 4 Analysis of the immune function indexes of 21 cases with no progress of banding（±s）

注：無特異條帶出現(xiàn)用“-”表示。

樣本序號(hào)1 1a 2 2a 3 3a 4 4a 5 5a 6 6a 7 7a 8 8a 9 9a 10 10a 11 11a 12 12a 13 13a 14 14a 15 15a 16 16a 17 17a 18 18a 19 19a 20 20a 21 21a第一帶型/第二帶型gp160、p24 gp160 p24—p24—p24 p24 p24—p24 p24 p24 p24 p24—p24 p24 p24 p24 p24 p24 p24 p24 p24、p17 p24 p24—gp41、p17 p17 p24、p17 p17 p66、p24—gp160 gp160 gp41—p66 p66 p55、p17—時(shí)間（天）78 31 35 55 81 32 75 65 31 46 37 41 92 32 48 32 48 62 95 47 61 CD4+T 淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)(個(gè)/μL）557 602 322 411 724 804 758 587 855 663 725 656 552 586 325 361 456 769 438 432 459 603 570 644 216 188 537 697 574 504 443 363 540 665 754 508 903 770 847 1201 391 248第一帶型CD4+絕對(duì)數(shù)568.86±190.53第二帶型CD4+絕對(duì)數(shù)583.90±219.82 t 值-0.442 P 值0.663 CD4+/CD8+細(xì)胞比值1.29 1.40 0.90 0.94 1.22 1.19 1.31 1.54 2.01 2.17 1.19 1.08 1.63 1.86 0.92 1.39 1.67 1.76 1.13 1.08 0.90 0.94 1.15 1.30 0.65 0.54 1.10 1.41 0.66 1.34 1.30 1.47 1.14 1.21 1.56 1.66 1.45 1.73 1.99 2.43 2.40 2.04第一帶型比值1.31±0.44第二帶型比值1.45±0.45 t 值-2.835 P 值0.01

2.6 11 例陽轉(zhuǎn)者與21 例條帶未進(jìn)展者免疫功能的比較分析

11 例陽轉(zhuǎn)者與21 例條帶未進(jìn)展者的（第一條帶比較，第二條帶作比較）CD4+T 淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)CD4+/CD8+細(xì)胞比值分別比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

本文不確定結(jié)果帶型的比例構(gòu)成與既往的文獻(xiàn)研究報(bào)道相似［5-6］，按試劑盒的判定標(biāo)準(zhǔn)，出現(xiàn)一條env 帶和一條gag 帶可判定為HIV 抗體陽性，但實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，WB 反應(yīng)會(huì)出現(xiàn)不典型的陽性反應(yīng)條帶，這種假陽性結(jié)果可能會(huì)對(duì)受檢者帶來很大的影響［7］。本文發(fā)現(xiàn)2 例首次帶型為3 個(gè)條帶的受檢者，其中1 例經(jīng)過69 天后的隨訪復(fù)查，條帶有明顯的進(jìn)展被確證為陽性，而另1 例受檢者失訪。另外有2 個(gè)條帶的共40 例，其中隨訪到的10例中有8（80%）例最終確證為陽性。因此，不確定條帶越多陽轉(zhuǎn)的可能性越大［8］。

141 例不確定的受檢者中，隨訪率為22.7%（32/141），比其他文獻(xiàn)報(bào)道都低［9-10］，109 例失訪者出現(xiàn)單一的p24（+）為60 例，而p24（+）失訪人群主要來自于血站和醫(yī)療機(jī)構(gòu)。分析其原因：①可能由于血站和醫(yī)療機(jī)構(gòu)大部分都使用了高敏感性的第四代檢測(cè)試劑，導(dǎo)致篩查的假陽性率偏高；②p24（+）的出現(xiàn)可能與注射藥物、自身免疫性疾病、急性病毒感染、腫瘤、妊娠等因素有關(guān)；③p24（+）的陰轉(zhuǎn)率最高［11］，該部分失訪人群對(duì)其出現(xiàn)單一條帶的不確定結(jié)果重視度不夠，更不會(huì)主動(dòng)要求復(fù)查而造成高比例的失訪。據(jù)以往研究報(bào)道［12-14］，出現(xiàn)單一的條帶大多數(shù)只是一些雜帶最終被排除HIV 感染。但本文發(fā)現(xiàn)，有2 例首次帶型為單一條帶（p24 和gp160）的受檢者，分別經(jīng)過32 天，90 天后復(fù)查，條帶明顯增加被判定為陽性。因此對(duì)出現(xiàn)單一帶型的不確定結(jié)果需要謹(jǐn)慎對(duì)待，有條件的要加強(qiáng)定期的跟蹤隨訪。

人類自身的免疫功能系統(tǒng)極其復(fù)雜，感染HIV 后機(jī)體的免疫功能受到損害，CD4+T 淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)和CD4+/CD8+細(xì)胞比值都發(fā)生了明顯變化，本文結(jié)果跟以往的文獻(xiàn)報(bào)道一致［15-16］。不確定結(jié)果中各WB 反應(yīng)條帶出現(xiàn)存在個(gè)體差異，必要時(shí)借助CD4+T 淋巴細(xì)胞檢測(cè)、病毒載量檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)室輔助檢測(cè)，尤其是結(jié)合個(gè)體的流行病學(xué)調(diào)查，增加定期的追蹤隨訪頻率等手段提高HIV 的診斷發(fā)現(xiàn)率。