周 衍，蔣 為，傅宗芬，施龍順，周 彬

（1.無錫市江原實(shí)業(yè)技貿(mào)有限公司，江蘇 無錫 214063；2.江蘇省原子醫(yī)學(xué)研究所，江蘇 無錫 214063；3.江蘇省榮軍醫(yī)院內(nèi)科，江蘇 無錫 214035；4.江蘇省寶應(yīng)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 寶應(yīng) 225800）

胃蛋白酶原（pepsinogens, PG）是由胃黏膜組織分泌的胃蛋白酶的無活性前體[1]，根據(jù)分布和免疫原性不同，分為胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）兩個(gè)亞型[2]。血清PG水平可反映胃黏膜的狀態(tài)和功能，當(dāng)發(fā)生幽門螺桿菌（Hp）感染、胃炎、消化性潰瘍、萎縮性變化、癌前病變、胃癌時(shí)，PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ比值會(huì)發(fā)生變化[3-6]。在日本，血清PG檢測已被用于胃癌的早期篩查，相對于其他標(biāo)志物，PG在高危人群胃癌篩查及早期診斷等方面更具有潛在的價(jià)值[7]。目前國內(nèi)外關(guān)于PG臨床應(yīng)用評價(jià)的文章報(bào)道較多，但是關(guān)于PG檢測結(jié)果的影響因素的研究鮮有報(bào)道。本研究通過分析采血管和保存時(shí)間對PG檢測結(jié)果的影響，確定適宜的樣本收集和保存條件，確保PG檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，更好地指導(dǎo)臨床應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 普通血清管、肝素抗凝管和惰性分離膠促凝管3種采血管均采購于廣州陽普醫(yī)療科技股份有限公司；PGⅠ檢測試劑盒（注冊證：蘇械住準(zhǔn)20152401384）和PGⅡ檢測試劑盒（注冊證：蘇械住準(zhǔn)20152401385）由無錫市江原實(shí)業(yè)技貿(mào)有限公司生產(chǎn)；全自動(dòng)時(shí)間分辨檢測儀（Auto DELFLA 1235）采購于芬蘭Wallac公司。

1.2 方法 按照采血標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，分別用普通血清管、肝素抗凝管和惰性分離膠促凝管采集血樣（2019年9月在本院進(jìn)行健康體檢人員50 名），室溫條件下3 000 r/min離心15 min。上清血樣當(dāng)場即時(shí)檢測，記為第1天。剩余樣本連同采血管，置2℃～8 ℃冰箱冷藏保存，分別在第2、3、4、6、8、10、13、16天取出檢測。標(biāo)本檢測方法嚴(yán)格參照試劑盒及儀器說明書，每次檢測均帶上低高質(zhì)控品（質(zhì)控在控，且檢測偏差小于15%）。普通血清管是不含任何添加劑的采血管，檢測結(jié)果作為初始檢測值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用配對t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同采血管對檢測結(jié)果的影響 PGⅠ、PGⅡ及PGⅠ/PGⅡ比值各組間值的統(tǒng)計(jì)分析詳見表1～表3。分析數(shù)值，檢測結(jié)果均不存在異常值，不需要進(jìn)行樣本剔除。PGⅠ檢測結(jié)果顯示，抗凝管與血清管比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；分離膠管與血清管比較，檢測值明顯偏低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；PGⅡ檢測結(jié)果顯示血清管、抗凝管和分離膠管比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；PGⅠ/PGⅡ比值是隨著PGⅠ、PGⅡ值的變動(dòng)而改變，所以分離膠管的檢測值明顯要低于血清管和抗凝管。

表1 不同采血管樣本組的PGⅠ統(tǒng)計(jì)描述（μg/L）

表2 不同采血管樣本組的PGⅡ統(tǒng)計(jì)描述（μg/L）

表3 不同采血管樣本組的PGⅠ/PGⅡ統(tǒng)計(jì)描述

2.2 冷藏條件下保存時(shí)間對檢測結(jié)果的影響 普通血清管標(biāo)本和肝素抗凝管樣本在冰箱內(nèi)冷藏的4 d內(nèi)，PGⅠ的檢測結(jié)果與第一天檢測的結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），檢測偏差在可接受范圍內(nèi)（檢測偏差小于15%）。冷藏6 d后PGⅠ的檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），檢測偏差在可接受范圍內(nèi)（檢測偏差小于15%）。8 d后PGⅠ的檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），檢測偏差超過可接受范圍內(nèi)（檢測偏差大于15%）；PGⅡ在6 d內(nèi)的檢測結(jié)果與第一天檢測的結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），檢測偏差在可接受范圍內(nèi)（檢測偏差小于15%）。8 d后PGⅡ檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），檢測偏差在可接受范圍內(nèi)（檢測偏差小于15%）。13 d后PGⅡ檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），檢測偏差超過可接受范圍內(nèi)（檢測偏差大于15%）。冷藏條件下，保存不同時(shí)間下的檢測偏差變化趨勢見圖1、圖2。

圖1 不同保存時(shí)間下PGⅠ檢測偏差變化趨勢

圖2 不同保存時(shí)間下PGⅡ檢測偏差變化趨勢

3 討論

中國是一個(gè)胃癌高發(fā)國家，根據(jù)衛(wèi)生部主辦的“中國健康激勵(lì)計(jì)劃”報(bào)道：中國每年新發(fā)胃癌患者50萬 人、死亡人數(shù)達(dá)40萬 人，居消化系統(tǒng)腫瘤第一位，嚴(yán)重威脅國民身體健康，影響社會(huì)和諧發(fā)展。我國胃癌的早診率僅為10%，早期胃癌預(yù)后良好，5 年生存率在90%以上，而晚期胃癌的5 年生存率僅為30%～40%[8]，所以胃癌的早發(fā)現(xiàn)早治療有著非常重要的意義。

PG檢測是一種簡便、快速、依從性好的血清學(xué)指標(biāo)，可反映胃黏膜的功能和組織學(xué)狀況，是胃底腺黏膜“血清學(xué)活檢”指標(biāo)[8]。PG在常規(guī)健康體檢和胃癌早期篩查中有很好的應(yīng)用價(jià)值。在炎癥及潰瘍的應(yīng)激狀態(tài)下，胃腺體細(xì)胞代償性增加，PG大量分泌，同時(shí)胃黏膜受損（尤其在潰瘍急性期）時(shí)，PG也更容易通過血-黏膜屏障進(jìn)入血循環(huán)，血清中PG的檢測值會(huì)異常增高；萎縮性胃炎患者由于胃體黏膜萎縮，腺體和主細(xì)胞數(shù)量減少，被幽門腺腸上皮化生代替，PG普遍降低，且隨著PGⅠ/PGⅡ比值降低，胃癌的風(fēng)險(xiǎn)越高[9-12]。所以，定量檢測血清PG非常重要。

影響實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的因素眾多，樣本采集、保存條件、操作檢測都直接決定了結(jié)果的準(zhǔn)確性[13]。重視檢測前質(zhì)量控制，處理好檢測標(biāo)本，對保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性十分重要[14]。目前，普通血清管、肝素抗凝管和惰性分離膠促凝管都已經(jīng)普遍應(yīng)用于各個(gè)醫(yī)院。普通血清管不含添加劑，對于檢測結(jié)果影響最??；肝素抗凝管的采血管內(nèi)添加有抗凝血酶的肝素，可延長標(biāo)本凝血時(shí)間。惰性分離膠促凝管有特制的具有觸變性的分離膠，在離心時(shí)分離膠會(huì)發(fā)生形變，從而有效隔離血清和血細(xì)胞，阻止二者之間的物質(zhì)交流和生化作用（離子、酶降解、糖分解等）[15-16]。在本次研究中發(fā)現(xiàn)，血清管和肝素管對于PG檢測結(jié)果差異性不大，而分離膠管測得的PGⅠ檢測結(jié)果要明顯偏低，但是對PGⅡ結(jié)果影響不大，所以不推薦在PG檢測中使用陽普廠家生產(chǎn)的分離膠管。查閱文獻(xiàn)后我們推測，可能是在離心過程中產(chǎn)生的熱量使陽普牌分離膠中某些添加劑揮發(fā)到血液中，對PGⅠ產(chǎn)生明顯吸附或?qū)GⅠ試劑有拮抗作用而造成結(jié)果偏低，具體原因還有待于進(jìn)一步研究。

低溫冷藏條件下，保存不同時(shí)間對PG的檢測也是有影響。PGⅠ在2 ℃～8 ℃能穩(wěn)定4 d，但是隨著時(shí)間的延長，降解幅度增大；PGⅡ能穩(wěn)定6 d，隨后也會(huì)降解，但是降解幅度沒有PGⅠ大。我們推測，這可能與血清中PGⅠ、PGⅡ本身抗原的效價(jià)降低或者降解有關(guān)。PG的穩(wěn)定性與文獻(xiàn)報(bào)道不一致，估計(jì)是檢測方法學(xué)不同導(dǎo)致，本實(shí)驗(yàn)中使用的試劑盒是時(shí)間分辨免疫分析法平臺(tái)上的，靈敏度更高。由于目前PG檢測試劑以ELISA和時(shí)間分辨平臺(tái)的手工板式操作為主，從檢測結(jié)果、勞動(dòng)強(qiáng)度、檢測成本上綜合考慮，我們建議PG檢測可以累積，每周做2 次。這對于基層醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室因樣本量不足不便開展該項(xiàng)目提供了另外一種解決途徑。

通過本次研究，提示我們在平時(shí)的檢驗(yàn)工作中要充分了解影響檢測項(xiàng)目的因素，將干擾的因素降到最低，合理安排，提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，為臨床診斷和治療提供科學(xué)依據(jù)和保障。