莊子瑜，于遠(yuǎn)洋，董斌

(大連市檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證技術(shù)服務(wù)中心，遼寧 大連)

0 引言

穿心蓮為爵床科植物Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees.的地上部分，有清熱解毒、消腫止痛、涼血等作用，民間用作苦補(bǔ)健胃和抗菌消炎藥?，F(xiàn)代研究表明，穿心蓮的主要成分穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯類化合物具有明顯的藥理活性，可用于感冒發(fā)熱，咽喉腫痛，口舌生瘡，頓咳勞嗽，泄瀉痢疾，熱淋澀痛，癰腫瘡瘍，蛇蟲咬傷[1]。中國(guó)藥典2015年版(一部)穿心蓮項(xiàng)下對(duì)穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)行了含量測(cè)定。本文參考文獻(xiàn)，使用藥典方法微調(diào)后[2，3]，采用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography,HPLC）測(cè)定穿心蓮植株不同部位(葉、嫩莖、老莖)中兩者的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters2998 ACQUITY HPLC 系 統(tǒng) (PDA 檢測(cè) 器)，Empower 工作站(Waters 公司)；Diamonsil C18（2）（5μm，4.6×250mm）填料：十八烷基鍵合硅膠；Waters 公司)；Sartorius BP211D、Sartorius BP221S 電子天平(Sartorius 公司)。

1.2 試藥

對(duì)照品穿心蓮內(nèi)酯（批號(hào)110797-201609 99.7%），脫水穿心蓮內(nèi)酯（批號(hào)110854-201710 99.4%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，水為超純水。穿心蓮藥材(購(gòu)自河北亳州藥材市場(chǎng)，經(jīng)大連市藥檢院中藥室鑒定)。

2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

采用Diamonsil C18（2）（5μm，4.6×250mm）色譜柱，以甲醇- 水（50:50）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng): 穿心蓮內(nèi)酯225nm，脫水穿心蓮內(nèi)酯254nm；流速1.0ml/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量10μl。

3 溶液配制

3.1 對(duì)照品溶液

精密稱取穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml 各含0.1mg 的混合溶液，即得。

3.2 供試品溶液

取穿心蓮藥材，將嫩莖（綠色）、葉、老莖（非綠色）分類后，分別粉碎，過(guò)四號(hào)篩，分別精密稱取各部位細(xì)粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40% 甲醇25ml，稱定重量，浸泡1h，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）30min，放冷，再稱定重量，用40%甲醇補(bǔ)足減失的重量。離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘8000 轉(zhuǎn)）10min，精密量上清液10ml，加在中性氧化鋁柱（200-300 目，5g，內(nèi)徑為1.5cm）上，用甲醇30ml 洗脫，收集洗脫液，置50ml 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

4 樣品測(cè)定

按“3.2”項(xiàng)操作，得供試品溶液。精密吸取供試品溶液10L 注入色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 穿心蓮不同部位含量

5 方法學(xué)驗(yàn)證

5.1 線性范圍考察

取穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品10.39mg，分別制成62.15、41.44、20.72、10.36、5.18μg/ml 的溶液，取脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品10.22mg，分別制成20.32、10.16、4.063、2.032、1.016μg/ml 的溶液，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯線性范圍考察結(jié)果

以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程分別為：Y=2120019X-3466 r=0.9999（穿心蓮內(nèi)酯）和Y=1816518X-3294 r=0.9999（脫水穿心蓮內(nèi)酯）。

結(jié)果表明：穿心蓮內(nèi)酯在0.05179-0.6215μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；脫水穿心蓮內(nèi)酯在0.01016-0.2032μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好[4]。

5.2 精密度

考察取同一供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯峰面積的RSD分別為0.9%、0.9%。結(jié)果表明，儀器精密度良好[5]。

5.3 穩(wěn)定性考察

取同一供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、16 和24h 進(jìn)樣測(cè)定。測(cè)得穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯峰面積的RSD分別為0.9%、0.9%。結(jié)果表明供試品溶液中上述2個(gè)成分在24h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

5.4 重復(fù)性考察

取同一批供試品，平行制備6 份供試品溶液，測(cè)定，記錄各組分色譜峰面積。結(jié)果重復(fù)性符合要求。

5.5 加樣回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法，精密稱取已知含量的同一批號(hào)的樣品共9 份（各0.5g），取每三份為一組，每組分別精密加入含穿心蓮內(nèi)酯（0.5987mg/ml）及脫水穿心蓮內(nèi)酯（0.1495mg/ml）的混合對(duì)照品各1ml、2ml、3ml，再分別精密加入甲醇50ml，按上述條件操作，計(jì)算回收率。測(cè)定結(jié)果表明方法的準(zhǔn)確度較好[6]。

5.6 定量限

測(cè)定取同一對(duì)照品溶液，用甲醇溶液逐級(jí)稀釋，進(jìn)樣測(cè)定。取穿心蓮對(duì)照品溶液（0.1657μg/ml），其信號(hào)約為噪音信號(hào)的10 倍，得檢測(cè)限為0.1657μg/ml（即1.657×10-9g）；取脫水穿心蓮對(duì)照品溶液（0.3250μg/ml），其信號(hào)約為噪音信號(hào)的10 倍，得檢測(cè)限為0.7663μg/ml（即3.250×10-9g）。

5.7 檢出限

測(cè)定取同一對(duì)照品溶液，用甲醇溶液逐級(jí)稀釋，進(jìn)樣測(cè)定。取穿心蓮對(duì)照品溶液（0.08287μg/ml），其信號(hào)約為噪音信號(hào)的3 倍，得檢測(cè)限為0.08287μg/ml（即0.8287×10-9g）；取脫水穿心蓮對(duì)照品溶液（0.1625μg/ml），其信號(hào)約為噪音信號(hào)的3 倍，得檢測(cè)限為0.1625μg/ml（即1.625×10-9g）。

6 討論

從穿心蓮藥材的測(cè)定結(jié)果來(lái)看，穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯含量葉中均明顯高于莖；葉中穿心蓮內(nèi)酯含量約為嫩莖的4.1 倍，約為老莖的21.9 倍；葉中脫水穿心蓮內(nèi)酯含量約為嫩莖的3.3 倍，約為老莖的26.2 倍；所以藥用穿心蓮的采集使用應(yīng)以葉多莖少時(shí)為佳[7,8]，鑒于安國(guó)、亳州藥材市場(chǎng)已將穿心蓮莖葉分開(kāi)銷售，建議藥典委完善使用穿心蓮藥材的中成藥處方，對(duì)穿心蓮?fù)读系那o葉比例作出相關(guān)規(guī)定。