李標(biāo)，韓雷鳴

摘要：目的：通過敵敵畏合并乙醇中毒死亡案例分析，為司法鑒定人在其他案件檢材鑒定過程中提供幫助。方法：通過頂空氣相色譜儀檢測(cè)血液中乙醇含量，利用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)出血液和胃內(nèi)容物中敵敵畏，提供了相應(yīng)的檢測(cè)方法，此方法準(zhǔn)確、快捷，以供法醫(yī)毒物鑒定人員交流使用。結(jié)果：本文在送檢檢材中檢出乙醇和敵敵畏成分。結(jié)論：死者的死亡原因符合飲酒后口服敵敵畏殺蟲劑合并乙醇中毒死亡。

關(guān)鍵詞：敵敵畏;乙醇;液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀;頂空氣相色譜儀

1案例資料

1.1 簡(jiǎn)要案情

李某，男。2021年1月18日被發(fā)現(xiàn)死于其出租屋內(nèi)，現(xiàn)場(chǎng)有一空白藥瓶，瓶?jī)?nèi)有刺激性農(nóng)藥氣味。經(jīng)法醫(yī)現(xiàn)場(chǎng)分別提取死者胃內(nèi)容物及心血送檢我中心進(jìn)行毒物分析。

1.2 材料與方法

1.2.1 儀器與試劑

AB SCIEX TRIPLE QUAD 4500質(zhì)譜儀，美國AB SCIEX公司;Agilent 7697A-7890B頂空氣相色譜儀，美國Agilent Technologies公司;單道可調(diào)移液器，德國BRANG;TG1850-WS高速離心機(jī)，上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

SKF525A（25mg）、地西泮-d5（1.0mg/mL）采購于北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司;敵敵畏（100μg/mL）采購于壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司。

1.2.2 儀器條件

質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧電壓（ESI+）;離子源溫度：600℃;電噴霧電壓：5.5kV;碰撞氣（CAD）9psi;氣簾氣（CUR）30psi;霧化氣（GS1）55psi;輔助加熱氣（GS2）60psi;以上氣體均為高純氮?dú)狻Ｅ鲎材芰浚–E）、去簇電壓（DP）及檢測(cè)特征離子對(duì)見表一。

液相條件：色譜柱ACQUITY UPLC BEH C18（100×2.1mm，1.7μm），進(jìn)樣體積5μL;流速0.3mL/min。流動(dòng)相及洗脫條件見表二。

頂空氣相色譜儀條件：色譜柱為安捷倫123-9234（30m×1.2μm×0.32mm;30m×1.8μm×0.32mm）;進(jìn)樣體積：1mL，分流比：12：1，進(jìn)樣口溫度：200℃，檢測(cè)器溫度：280℃;載氣流速：4.0mL/min;尾吹：20mL/min;H2流量：30mL/min;空氣流量：300mL/min;柱箱溫度：45℃;頂空進(jìn)樣器加熱箱溫度：65℃，定量環(huán)溫度：90℃，傳輸管線溫度：110℃，樣品瓶加熱平衡時(shí)間：10min。

1.2.3 檢材處理與檢驗(yàn)

檢材中毒藥物提取分析：分別取1mL胃內(nèi)容物和心血于玻璃離心管中，各離心管中加入SKF525A、地西泮-d5內(nèi)標(biāo)工作液，加入3mLpH=9.2的硼砂緩沖溶液，另加入4mL乙醚后依次渦旋、8000r/min離心5min。靜置3分鐘后取上層有機(jī)溶劑于潔凈離心管中，50℃水浴揮干。用初始流動(dòng)相復(fù)溶，過0.22μm濾膜。通過LC—MS/MS進(jìn)樣分析。分別取1mL空白血液和水同上述實(shí)驗(yàn)處理過程作為空白對(duì)照。

檢材中乙醇提取分析：取500μL的4mg/100mL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作溶液及100μL待測(cè)心血加入頂空瓶中，并用橡膠墊鋁帽密封、搖勻后置于安捷倫7697A頂空進(jìn)樣器中加熱10 min，取1.0mL液上氣體進(jìn)樣。取取蒸餾水100μL、80mg/100mL乙醇陽性對(duì)照樣品100μL分別加入取500μL的4mg/100mL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作溶液同上述過程操作，作為空白樣品和陽性對(duì)照品。

1.3 結(jié)果分析

死者胃內(nèi)容物及心血均檢出敵敵畏特征離子對(duì)，通過陽性添加敵敵畏進(jìn)行比對(duì)，證實(shí)檢材中檢出毒物為敵敵畏。同時(shí)死者心血中檢出乙醇，其質(zhì)量濃度為7.8mg/100mL。死者的死亡原因符合飲酒后口服敵敵畏殺蟲劑合并乙醇中毒死亡。

2討論

有機(jī)磷農(nóng)藥給我們的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來了諸多便利，也會(huì)帶來食物和環(huán)境的污染，此外有機(jī)磷農(nóng)藥中毒事件頻發(fā)，也是困擾世界各國的社會(huì)性問題。世界各國每年有數(shù)百萬件有機(jī)磷農(nóng)藥中毒案例[1]，這些中毒案件中包含家畜中毒、他人投毒或自殺。發(fā)展中國家發(fā)生中毒案件的比例明顯高于發(fā)達(dá)國家，并且在全球范圍內(nèi)30%的自殺者是通過服用農(nóng)藥中毒死亡。因我國的農(nóng)藥生產(chǎn)及使用量較大，且多數(shù)為高毒性有機(jī)磷農(nóng)藥，又因其價(jià)格便宜容易獲得，最終導(dǎo)致在近些年的農(nóng)藥中毒案件中有機(jī)磷農(nóng)藥中毒或投毒案件占比較高[2]。

敵敵畏是一種常用的有機(jī)磷殺蟲劑。其中毒機(jī)理為磷酸根通過與體內(nèi)的乙酰膽堿酯酶組合，形成磷酸化的膽堿酯酶，達(dá)到抑制乙酰膽堿酯酶的活性作用。失活的乙酰膽堿酯酶使生物體喪失分解乙酰膽堿的能力，乙酰膽堿在體內(nèi)大量聚集，導(dǎo)致神經(jīng)功能紊亂，生物體中毒癥狀顯現(xiàn)[3]。另據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道敵敵畏中毒致死量為成人口服10—14g[4]。

乙醇在尸體中可以從一個(gè)器官向附近組織擴(kuò)散。人若在大量飲酒后突發(fā)死亡，胃內(nèi)仍有乙醇未被消化吸收，因心臟與胃距離較近，乙醇能通過向周圍組織擴(kuò)散的方式進(jìn)入心臟，進(jìn)而導(dǎo)致心血中乙醇的檢測(cè)值較高。為了保證檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，尸體中血液乙醇含量檢測(cè)所用檢材應(yīng)首選尸體中靜脈血部位，鎖骨下靜脈血和股靜脈血是尸體中血液乙醇含量檢測(cè)常選擇的取材部位，在兩者都可以取材的情況下股靜脈是乙醇含量檢測(cè)的最佳選擇部位。在實(shí)際案件中如果尸體的盆骨或者肩部受損比較嚴(yán)重，無法抽取鎖骨下靜脈血和股靜脈血，這時(shí)就需要選擇死者心血作為檢材。抽取心血時(shí)有一點(diǎn)需要注意，鑒定人員需要讓心臟內(nèi)的血液進(jìn)行充分混合，避免檢材中紅細(xì)胞比容過多影響鑒定結(jié)論。

尸體中的血液若發(fā)生腐敗也會(huì)有乙醇產(chǎn)生。尸體中存在有大量微生物，在適宜的溫度條件下尸體內(nèi)血液及其他機(jī)體組織會(huì)發(fā)生腐敗，導(dǎo)致尸體內(nèi)產(chǎn)生正丁醇、乙醇、正丙醇等有機(jī)物。如果在較低冷凍溫度條件下保存尸體，在一天內(nèi)不會(huì)生成乙醇。但微生物在尸體內(nèi)的含量是會(huì)隨著死亡時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。在大量微生物的作用下會(huì)有乙醇等物質(zhì)的產(chǎn)生，若沒有進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證容易誤判為生前飲酒。所以在處理尸體中血液乙醇檢測(cè)時(shí)，若尸體死亡時(shí)間超過一天，鑒定人員需對(duì)乙醇是否為腐敗產(chǎn)生進(jìn)行分析。結(jié)合案件檢材，尸體中血液乙醇含量會(huì)出現(xiàn)丟失、下降或升高的現(xiàn)象。微生物降解、酶降解以及隨著水分蒸發(fā)都會(huì)使尸體中血液乙醇含量會(huì)出現(xiàn)丟失或下降。即使在低溫下保存檢材也會(huì)有上述情況發(fā)生。

生物體腐敗后不僅能產(chǎn)生乙醇，還能產(chǎn)生正丙醇等醇類物質(zhì)。所以在檢測(cè)長(zhǎng)時(shí)間存放后的尸體血液中乙醇含量時(shí)，鑒定人員應(yīng)考慮檢出的乙醇是否由檢材腐敗產(chǎn)生的。具體運(yùn)用到實(shí)驗(yàn)過程中就是鑒定人員需要對(duì)尸體中尿液或者血液中的乙醇和正丙醇成分進(jìn)行定量檢測(cè)。如果檢材中能同時(shí)檢測(cè)到乙醇和正丙醇，表示尸體中的乙醇含量已經(jīng)受到外界環(huán)境等其他因素的影響，鑒定人員需要扣除檢材腐敗產(chǎn)生乙醇的份額，進(jìn)而得出死者生前體內(nèi)乙醇含量。

對(duì)于腐敗檢材產(chǎn)生的代謝物進(jìn)行檢測(cè)時(shí)一些方面需要注意，就是不同種類的微生物腐敗代謝，其代謝產(chǎn)物和代謝途徑都有一定的變異性，并且不同種類檢材在不同環(huán)境條件下其代謝產(chǎn)物的種類以及相應(yīng)的數(shù)量有稍微差別。尸體腐敗可產(chǎn)生正丁醇和正丙醇并伴隨有乙醇生成，若生物檢材中有正丁醇和正丙醇含量異常升高的情況，并且血液中乙醇的含量與正丙醇的含量比值小于20時(shí)，就可初步判定此檢材中的乙醇是腐敗產(chǎn)生的。因有些飲料中也會(huì)含有少量正丙醇，若飲用此類飲料后生物檢材中有檢出正丙醇的情況，這也會(huì)影響生物檢材中乙醇含量的判定。而正丁醇逐漸被認(rèn)為是尸體腐敗后生成乙醇的標(biāo)志物，其和乙醇的比值關(guān)系有待進(jìn)一步研究。在腐敗檢材中2-甲基丙酸也被發(fā)現(xiàn)伴隨乙醇同時(shí)生成，具體以哪種有機(jī)物作為腐敗檢材中生成乙醇的標(biāo)志物還未達(dá)成共識(shí)，它們之間的構(gòu)效關(guān)系需廣大鑒定人員不斷探索。

敵敵畏合并乙醇中毒機(jī)制中，敵敵畏的作用是抑制膽堿酯酶活性，進(jìn)而引起中樞抑制癥狀。乙醇作為常見有機(jī)溶劑，其可以使生物體內(nèi)血管擴(kuò)張，造成血液流速加快，進(jìn)而促進(jìn)敵敵畏在體內(nèi)的分布和吸收，使敵敵畏中毒癥狀進(jìn)一步惡化，出現(xiàn)呼吸困難到多器官衰竭死亡。服用農(nóng)藥自殺案件近年來在司法鑒定中并不少見，但市場(chǎng)上流通的農(nóng)藥大多為多種制劑混合而成，伴隨的中毒機(jī)制也十分復(fù)雜，對(duì)司法鑒定和臨床治療都有不小的挑戰(zhàn)，所以在實(shí)際鑒定工作中需要多方面考慮，避免出現(xiàn)誤鑒或漏檢的情況發(fā)生。

本次采用頂空氣相色譜儀對(duì)死者心血中乙醇進(jìn)行定量檢測(cè)，利用AB SCIEX TRIPLE QUAD 4500質(zhì)譜儀對(duì)中毒者的胃內(nèi)容物及心血進(jìn)行毒藥物快速定性分析，此方法準(zhǔn)確、快捷。因乙醚沸點(diǎn)較低、易揮發(fā)，用乙醚提取毒物可減少濃縮時(shí)間，提高鑒定效率。死者心血中檢測(cè)出乙醇含量為7.8mg/100mL，本例中對(duì)死者胃內(nèi)容物及心血進(jìn)行毒物提取、濃縮、復(fù)溶。因提取物刺激性農(nóng)藥味較大，對(duì)死者胃內(nèi)容物及心血提取后的復(fù)溶液體分別稀釋100萬倍和1萬倍，進(jìn)樣分析仍可檢測(cè)到敵敵畏特征離子對(duì)。與陽性添加敵敵畏進(jìn)行比對(duì)定性分析，李某生前服入大量敵敵畏。因李某心血中乙醇含量相對(duì)較低，推測(cè)為李某生前飲酒一段時(shí)間后大量服用敵敵畏。根據(jù)李某體內(nèi)同時(shí)檢出乙醇和敵敵畏成分，符合敵敵畏合并乙醇中毒導(dǎo)致死亡的結(jié)論。

參考文獻(xiàn)

[1]韓佳坤.重癥有機(jī)磷農(nóng)藥中毒的急診急救措施探討.世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2015，15（A2）：260.

[2]陳曙旸，王鴻飛，尹萸.我國農(nóng)藥中毒的流行特點(diǎn)和農(nóng)藥中毒報(bào)告的現(xiàn)狀[J].中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志，2005，23（5）：336.

[3]劉良，張國華，李利華，贠克明.法醫(yī)毒理學(xué)（第五版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2016.

[4]劉衡，李潔冰，孔振青，羅陽.敵敵畏、氟乙酰胺中毒法醫(yī)鑒定及現(xiàn)場(chǎng)勘查淺析[J].法制博覽，2017.08（上）：115.