姜學(xué)美，肖 波，鄒玉明，沈丹丹△

（1.重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院，重慶 401121； 2.國家藥品監(jiān)督管理局麻醉精神藥品質(zhì)量監(jiān)測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 401121； 3.重慶仁澤醫(yī)藥科技有限公司，重慶 400021）

2020年5月14日，國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心正式發(fā)布《化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)技術(shù)要求》《化學(xué)藥品注射劑（特殊注射劑）仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)技術(shù)要求》，對(duì)注射劑一致性評(píng)價(jià)指出了研究方向及提出了技術(shù)要求，特殊注射劑（如脂質(zhì)體、靜脈乳、微球、混懸注射劑等）一致性評(píng)價(jià)在按相關(guān)技術(shù)要求開展研究的同時(shí)，還應(yīng)根據(jù)特殊注射劑的特點(diǎn)，對(duì)其關(guān)鍵質(zhì)量屬性進(jìn)行研究，如Zeta電位、粒子形態(tài)、粒徑及粒徑分布，以及體外溶出／釋放行為等。復(fù)方倍他米松注射液為長效、緩釋、混懸的特殊注射劑，屬倍他米松酯類［倍他米松磷酸鈉（BSP）和二丙酸倍他米松（BD）］構(gòu)成的復(fù)方藥物劑型，有抗炎、抗過敏和抗風(fēng)濕作用［1-4］。微粉化的活性成分BD混懸于處方中，可起到延長藥物活性的作用，從而延長療效，因此，處方中BD粒度會(huì)影響體外溶出行為及藥代動(dòng)力學(xué)。本課題組已研究了BD粒度對(duì)溶出行為的影響［5］?，F(xiàn)行進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)［6］及國家藥監(jiān)局標(biāo)準(zhǔn)［7］均無粒度檢查項(xiàng)。在此，按2020年版《中國藥典（四部）》通則0982“粒度和粒度分布測定法第三法”［8］，建立了微粉化BD的粒徑分布測定法，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，用于評(píng)價(jià)微粉工藝及滅菌工藝對(duì)復(fù)方倍他米松注射液中BD粒度的影響，達(dá)到與原研產(chǎn)品粒度及粒度分布一致，同時(shí)也為該品種一致性評(píng)價(jià)提供研究基礎(chǔ)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

激光粒度儀器系統(tǒng)（主機(jī)Mastersizer 2000型激光粒度儀、樣品處理單元Hydro MU、軟件版本Mastersizer 2000版5.12C），Morphologi G3型顆粒粒度及粒形圖像分析儀，均購自英國Malvern公司。

1.2 試藥

吐溫80（南京化學(xué)試劑股份有限公司，批號(hào)為20161104，含量為99.0%）；BD原料（A廠，批號(hào)為20191009）；微粉化BD（課題組自制，批號(hào)分別為20200115-1，20200115-2，20200115-3，20200115-4，20200115-5，20200115-6）；中間體1（課題組自制，批號(hào) 分 別 為20200301-1，20200301-2，20200301-3，20200301-4，20200301-5，20200301-6）；復(fù)方倍他米松注射液（原研上市品，杭州默沙東制藥有限公司，批號(hào)為3BBKA03A01；課題組自制，批號(hào)為20200309）；去離子水（課題組自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定參數(shù)

樣品處理單元設(shè)置：泵轉(zhuǎn)速2 000 r／min；超聲時(shí)間120 s，超聲能量12.5。

儀器檢測參數(shù)設(shè)置：光學(xué)特性項(xiàng)樣品物質(zhì)名稱設(shè)為默認(rèn)（Default）；遮光度界限下限為5%，上限為10%；重復(fù)測量2個(gè)循環(huán)，之間延遲10 s；樣品、背景測量時(shí)間均為10 s，測量快照均為10 000。分散劑為經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過的去離子水或注射用水；表面活性劑為0.04%（W／W）吐溫80。

2.2 粒度測定

溶液配制：取吐溫80適量，加入2.1項(xiàng)下分散劑，配制成含0.04%（W／W）吐溫80的水溶液。取0.05 g微粉化的BD，加入0.04%（W／W）吐溫80水溶液10mL，混勻，即得供試品溶液Ⅰ。取復(fù)方倍他米松注射液，臨用前充分振搖混勻，即得供試品溶液Ⅱ。

測定法：于分散池中加入2.1項(xiàng)下分散劑800 mL，選擇手動(dòng)測定模式。按2.1項(xiàng)下參數(shù)設(shè)置、操作，測量背景后，緩緩加入供試品溶液Ⅰ6.25 mL，至遮光度達(dá)5%～10%時(shí)，開始測量。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn)

取吐溫80約0.202 g，精密稱定，加入去離子水500 mL，制成含0.04%（W／W）吐溫80的水溶液，精密量取6.25 mL，置800 mL去離子水中，按2.1項(xiàng)下參數(shù)設(shè)置操作。結(jié)果表明，空白樣品遮光度為0，說明分散劑、表面活性劑在該測定條件下不影響微粉化BD的粒度測定。

2.3.2 分散穩(wěn)定性考察

為了考察測定過程中的BD是否充分分散，并達(dá)到穩(wěn)定分散階段，設(shè)定等時(shí)間距的測量之間延遲和測量循環(huán)數(shù)，分別跟蹤考察攪拌和泵分散階段、超聲分散階段、超聲后測定階段實(shí)時(shí)粒徑變化；同時(shí)考察BD是否在測定過程中有溶解行為。取樣品（批號(hào)為20200115-5），依法制備供試品溶液Ⅰ（測定參數(shù)除超聲時(shí)間為140 s及測量循環(huán)數(shù)為20外，其余參數(shù)同2.1項(xiàng)）。遮光度與粒度實(shí)時(shí)監(jiān)測結(jié)果見表1。由表1可見，攪拌和泵分散階段，未見遮光度迅速下降，說明分散劑和表面活性劑選擇合理。超聲分散階段，隨著超聲時(shí)間的延長，粒徑趨于穩(wěn)定的平臺(tái)期，說明在超聲過程中未發(fā)生顆粒碎裂現(xiàn)象。超聲后測定階段，粒徑和遮光度均保持不變，證明分散條件合理。

2.3.3 精密度試驗(yàn)

取2.2項(xiàng)下供試品溶液Ⅰ，按2.1項(xiàng)下參數(shù)及條件連續(xù)測定同一樣品6次，記錄粒度檢測結(jié)果。結(jié)果d0.1，d0.5，d0.9的RSD均小于1.0%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批（批號(hào)為20200115-5）樣品，依法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下參數(shù)及條件測定粒度。結(jié)果d0.1，d0.5，d0.9的RSD分別為0.31%，1.41%，5.11%，同一批次微粉化BD 3次代表性取樣的變異系數(shù)均符合美國藥典［9］的規(guī)定，表明方法重復(fù)性好。

2.3.5 耐用性試驗(yàn)

泵轉(zhuǎn)速：設(shè)定泵轉(zhuǎn)速分別為300，500，700，1 000，1 500，2 000，2 500，3 000 r／min，其余參數(shù)同2.1項(xiàng)下，考察粒徑隨泵轉(zhuǎn)速增加的變化。結(jié)果見表2。可見，泵轉(zhuǎn)速較低（300～1 000 r／min）時(shí)，粒徑測定值較大，泵轉(zhuǎn)速較高（1 000～2 500 r／min）時(shí)，粒徑測定值基本保持不變，綜合考慮，確定泵轉(zhuǎn)速為2 000 r／min。

表1 不同分散階段遮光度與粒度實(shí)時(shí)監(jiān)測結(jié)果Tab.1 Real-time monitoring results of laser obscuration and particle size at different dispersion stages

表2 不同泵轉(zhuǎn)速的粒度檢測結(jié)果Tab.2 Results of different pump speed on particle size measurement

供試品溶液量：供試品溶液Ⅰ加樣量分別為2.75，4.75，6.25，7.75，12.75，15.75 mL，其余參數(shù)同2.1項(xiàng)下，考察粒徑與遮光度的變化。結(jié)果見表3?？梢?，供試品溶液Ⅰ的量低于4.75 mL時(shí)，遮光度偏低，粒度略大；供試品溶液Ⅰ的量為6.25 mL時(shí)，遮光度稍升高，粒度基本保持不變；供試品溶液Ⅰ的量繼續(xù)增大時(shí)，測得遮光度較高（＞10%），粒徑測定值略有變小，可能因發(fā)生了多重散射。故確定供試品溶液Ⅰ的量為6.25 mL。

表3 不同供試品溶液的量的遮光度和粒度檢測結(jié)果Tab.3 Influence of test solution with different injection volume on the laser obscuration and particle size

超聲時(shí)間：設(shè)定超聲時(shí)間分別為0，30，60，90，120，150，180，210，240 s，其余參數(shù)同2.1項(xiàng)下，考察粒徑隨超聲時(shí)間延長的變化。結(jié)果見表4。可見，超聲時(shí)間超過90 s時(shí)，粒度測定結(jié)果基本保持不變，但過長時(shí)間的超聲可能造成顆粒碎裂。故確定超聲時(shí)間為120s。

表4 不同超聲時(shí)間對(duì)粒度檢測結(jié)果的影響Tab.4 Influence of different ultrasonic time on the particle size

超聲強(qiáng)度：設(shè)定超聲強(qiáng)度分別為5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，其余參數(shù)同2.1項(xiàng)下，考察粒徑隨超聲強(qiáng)度增加的變化。結(jié)果見表5?？梢?，超聲強(qiáng)度超過7.5時(shí)，粒度測定結(jié)果基本保持不變，但應(yīng)避免強(qiáng)烈超聲可能造成的顆粒碎裂。因此確定超聲強(qiáng)度為12.5。

樣品測定時(shí)間：設(shè)定樣品（BD原料）及背景測量時(shí)間均分別為5，10，15，20，30 s，樣品及背景測量快照分別為5 000，10 000，15 000，20 000、30 000，其余參數(shù)同2.1項(xiàng)下，考察粒徑隨樣品測定時(shí)間延長的變化。結(jié)果見表6。可見，樣品測定時(shí)間和背景測量時(shí)間在5～30 s范圍內(nèi)，粒度測定結(jié)果基本保持不變。

表5 不同超聲強(qiáng)度對(duì)粒度檢測結(jié)果的影響Tab.5 Influence of different ultrasonic energy on the particle size

表6 不同樣品測定時(shí)間對(duì)粒度檢測結(jié)果的影響Tab.6 Influence of different measurement time on the particle size of samples

2.4 滅菌前后工藝影響試驗(yàn)

微粉工藝：采用氣流粉碎工藝，在不同工藝參數(shù)下（關(guān)鍵可控參數(shù)為環(huán)形腔噴嘴壓力和文氏管壓力，批號(hào)分 別 為20200115-1，20200115-2，20200115-3，20200115-4，20200115-5，20200115-6，樣品分別設(shè)為1.0，2.0 bar，2.0，3.0 bar，3.0，4.0 bar，4.0，5.0 bar，5.0，6.0 bar，1.5，2.5 bar），將BD原料藥進(jìn)行粉碎，得到不同粉碎工藝的滅菌前的微粉化BD。按2.1項(xiàng)下參數(shù)及條件和2.2項(xiàng)下供試品溶液Ⅰ的配制方法配制溶液，測定。結(jié)果見表7?？梢?，通過調(diào)整氣流粉碎工藝參數(shù)后，可制備出不同粒徑的微粉化BD，并用于熱壓滅菌工藝研究。

滅菌工藝：以不同工藝的滅菌前的微粉化BD，按專利處方及工藝配制方法，采用熱壓滅菌工藝制備中間體1（滅菌后的BD混懸液）。按2.1項(xiàng)下參數(shù)及條件和2.2項(xiàng)下供試品溶液Ⅰ、Ⅱ配制方法配制溶液，測定。結(jié)果見表8。原研產(chǎn)品滅菌后的粒度分別為d0.1＝1.194μm，d0.5＝6.298μm，d0.9＝13.644μm?？梢?，當(dāng)氣流粉碎工藝控制環(huán)形腔噴嘴壓力為4～5bar，文氏管壓力為5～6bar時(shí)，即可獲得與原研產(chǎn)品近似的粒度分布。

3 討論

3.1 分散劑選擇

由于原研參比制劑處方中含有表面活性劑吐溫80，故本研究中未對(duì)表面活性劑的種類和濃度進(jìn)行考察，參照原研處方，以0.04%（W／W）吐溫80作表面活性劑，以水為分散劑，測定BD粒度。

3.2 微粉工藝及滅菌工藝對(duì)粒度測定的影響

無論滅菌前的微粉化BD的粒度如何分布，在滅菌后粒度均有增加，說明在滅菌過程中會(huì)引起B(yǎng)D的晶體微小增長，從而導(dǎo)致粒度增加。但可通過控制氣流粉碎關(guān)鍵工藝參數(shù)，從而控制微粉化的BD粒度分布，并有效控制滅菌后的粒徑，達(dá)到與原研產(chǎn)品粒度分布基本一致的水平。

3.3 方法評(píng)價(jià)

本研究中建立了BD激光粒度測定方法，該方法簡單、快速、準(zhǔn)確、耐用性好，可用于復(fù)方倍他米松注射液的質(zhì)量評(píng)價(jià)，為本品處方工藝參數(shù)優(yōu)化提供了評(píng)價(jià)方法，同時(shí)為本品一致性評(píng)價(jià)奠定了研究基礎(chǔ)。粒度及其分布作為特殊注射劑的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，將影響產(chǎn)品體外與體內(nèi)溶出行為的差異，建議生產(chǎn)企業(yè)將BD激光粒度測定方法收入現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以更好地保證產(chǎn)品全生命周期的質(zhì)量。

表7 滅菌前原料二丙酸倍他米松粒度檢測結(jié)果Tab.7 Results of particle size of betamethasone dipropionate API before the sterilization

表8 滅菌后微粉化二丙酸倍他米松粒度檢測結(jié)果Tab.8 Results of particle size of micronized betamethasone dipropionate after the sterilization