李 瀟，郭 雷，游 暢，白亦昊，邵天舒，張建敏，王 靜，郜昭慧，丁 銳，周長明

（北京市藥品檢驗(yàn)所·國家藥品監(jiān)督管理局仿制藥研究與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室·中藥成分分析與生物評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102206）

難溶性藥物多具有親脂性，將其溶于適宜的油相中制成載藥乳，可有效提高其溶解度［1］。靜脈注射用乳劑常被用作藥物載體［2］，但易氧化降解、穩(wěn)定性差，凍干技術(shù)應(yīng)用于載藥微乳制劑，有利于制劑的穩(wěn)定［3］。脂肪乳中的油相在制備過程中極易分解為醛、酮、酸等，易引起臨床用藥的安全隱患［1］。前列地爾臨床多被用于改善心腦血管微循環(huán)障礙，以及臟器移植術(shù)后的抗栓治療等［4］。注射用前列地爾干乳劑為前列地爾無菌凍干乳劑，使用時(shí)加水溶解后為白色或類白色乳液，其輔料為大豆油及甘油。預(yù)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，以三氟乙酸為破乳劑可使油相更好地釋放，有助于甲氧基苯胺值的測定。本研究中建立了專屬性和耐用性均良好的測定注射用前列地爾干乳劑中甲氧基苯胺值的方法［5-6］?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-2450型紫外可見分光光度計(jì)（日本Shimadzu公司）；Rotavapor R-3型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；MEGAFUGE8型低速離心機(jī)（美國ThermoScientific公司）；KQ-500型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

注射用前列地爾干乳劑（A企業(yè)，批號(hào)分別為13102864，13102525，14100265，13102843，14012040，15010091）；4-甲氧基苯胺（美國Sigma-Aldrich公司，批號(hào)為＃BVBW9024，含量為99%）；其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

避光操作，取樣品5瓶（規(guī)格為10μg）或10瓶（規(guī)格為5μg）內(nèi)容物，置25 mL容量瓶中，加水5 mL使復(fù)乳，加入三氟乙酸2 mL，振搖約1 min使破乳，用異辛烷定容，振搖提取約1 min，2 000 r／min離心5 min；取異辛烷層置圓底燒瓶中，并置60℃水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)15 min，將殘?jiān)卯惐?異辛烷（2∶8，V／V）適量溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用異丙醇-異辛烷（2∶8，V／V）定容，搖勻，即得供試品溶液。按注射用前列地爾處方，制備缺油相的空白對(duì)照溶液。取4-甲氧基苯胺125 mg，精密稱定，置50 mL棕色容量瓶中，用冰醋酸超聲（功率500 W，頻率40 kHz）溶解，并定容，即得0.25%4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液，遮光放置，臨用現(xiàn)配。

2.2 測定方法

精密量取異丙醇-異辛烷（2∶8，V／V）與供試品溶液各5 mL，分別置甲、乙2支具塞試管中，分別精密加入0.25%4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液1 mL，密塞，搖勻，避光準(zhǔn)確放置10 min，以異丙醇-異辛烷（2∶8，V／V）為空白，在350 nm波長處分別測定吸光度A1和A2；另取供試品溶液，以異丙醇-異辛烷（2∶8，V／V）為空白，在350 nm波長處測定吸光度A0。按下列公式計(jì)算得本品的甲氧基苯胺值擬定限度為5.0。

甲氧基苯胺值＝25×［1.2×（A2-A1）-A0］／W

式中，A1為空白溶劑反應(yīng)后的吸光度；A2為供試品溶液反應(yīng)后的吸光度；A0為供試品溶液未反應(yīng)的吸光度；1.2為加入4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液后的溶液稀釋因子；W為供試品溶液中的油相質(zhì)量（g），結(jié)合本品處方折算后以0.75計(jì)。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取空白對(duì)照溶液5 mL，置25 mL容量瓶中，按2.2項(xiàng)下“加入2 mL三氟乙酸……”起，同法操作，并計(jì)算甲氧基苯胺值。不含油相的處方組分混合后測定的甲氧基苯胺值為0.003 3，遠(yuǎn)低于國家藥典委員會(huì)公示的脂肪乳相關(guān)品種標(biāo)準(zhǔn)中甲氧基苯胺值的限度［7-9］，表明方法專屬性良好。

2.4 線性關(guān)系與檢測限考察

取供試品5，15，25，35，45，50，60μg，分別置25 mL容量瓶中，同2.1項(xiàng)下方法制成系列供試品溶液。按2.2項(xiàng)下“加入2 mL三氟乙酸……”起，同法操作，以甲氧基苯胺值（A）為縱坐標(biāo)、供試品中油相的量（W）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果，待測溶液質(zhì)量濃度在0.2～2.4μg／mL范圍內(nèi)的線性回歸方程為A＝0.556 2W＋0.048 5（r2＝0.963 7，n＝7），在0.6～2.4μg／mL范圍內(nèi)的線性回歸方程為A＝0.6361W-0.0058（r2＝0.9902，n＝7），表明甲氧基苯胺質(zhì)量濃度在0.6～2.4μg／mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好；在0.2μg／mL時(shí)偏離線性，但仍可檢出?？偟膩砜矗瑱z測限約為0.2μg／mL，靈敏度良好。詳見表1。

表1 線性關(guān)系及檢測限考察結(jié)果Tab.1 Linear relationship and results of LOD

2.5 耐用性試驗(yàn)

稱取樣品適量，精密稱定，按2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.2項(xiàng)下試驗(yàn)條件［分別設(shè)置旋蒸溫度和時(shí)間為55℃10min、55℃20min、65℃10min、65℃20min］進(jìn)樣測定，記錄吸光度，并計(jì)算甲氧基苯胺值。結(jié)果見表2?？梢姡魷囟群蜁r(shí)間發(fā)生一定程度變化時(shí)，本方法能滿足試驗(yàn)要求，耐用性良好。

2.6 樣品中甲氧基苯胺值測定

取6批樣品各適量，分別按2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.2項(xiàng)下方法測定，平行測定3次，記錄吸光度，并計(jì)算甲氧基苯胺值。結(jié)果見表3。

表2 耐用性試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of the durability test

表3 樣品中甲氧基苯胺值測定結(jié)果（n＝3）Tab.3 Content determination of anisidine value in Alprostadil Dried Emulsion for Injection（n＝3）

3 討論

甲氧基苯胺值常被用于評(píng)價(jià)油脂中的次級(jí)氧化產(chǎn)物水平，是脂肪乳質(zhì)量控制的重要指標(biāo)［10］。現(xiàn)行版英國藥典及美國藥典中，均收錄了甲氧基苯胺值的測定方法：取供試品，用異辛烷溶解后，與4-甲氧基苯胺發(fā)生反應(yīng)，并在350 nm波長處測定吸光度，計(jì)算，即得。此外，由于4-甲氧基苯胺的光敏性，因此均要求避光操作［11-12］。

脂肪乳是將脂質(zhì)以小液滴狀分散在水中形成的非均相的水包油型乳劑。市售脂肪乳主要是靜脈注射類，其中脂質(zhì)成分主要是大豆油［13］。脂肪乳能明顯提高疏水藥物在水溶液中的溶解度，從而增加藥物的生物利用度［14］。注射用前列地爾干乳劑主要含有甘油和大豆油。目前，國家藥典委員會(huì)公示的脂肪乳相關(guān)品種標(biāo)準(zhǔn)中，甲氧基苯胺值的限度標(biāo)準(zhǔn)有3.0及5.0［7-9］。本研究中樣品的油相質(zhì)量均遠(yuǎn)小于其他乳劑產(chǎn)品，參考上述標(biāo)準(zhǔn)，將本品的甲氧基苯胺值限度定為不得過5.0。在該限度下，患者接觸到的醛、酮類等有害物質(zhì)的量仍遠(yuǎn)小于其他乳劑產(chǎn)品，可以保證本品具有良好的安全性。國家藥典委員會(huì)于2015年6月15日公示的《丙泊酚乳狀注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（征求意見稿）》中，將供試品溶于無水乙醇后，反復(fù)旋蒸除盡水分，再用異丙醇-異辛烷（2∶8，V／V）溶解后進(jìn)行測定。此方法需要對(duì)無水乙醇反復(fù)旋蒸，以除盡水分，比較麻煩。本研究中參考相關(guān)文獻(xiàn)，并結(jié)合本品的劑型特點(diǎn)，建立了適于本品中甲氧基苯胺值的檢測方法。高速離心、高壓電場或添加破乳劑均可使乳液失穩(wěn)［15］，且高速離心或高壓電場對(duì)設(shè)備也有一定要求，因此本研究中選擇了相對(duì)簡單的方法，即加破乳劑。醛、酮類物質(zhì)產(chǎn)生于油相中，而本品為水包油型乳劑，因此加入三氟乙酸后，乳狀液被破壞，達(dá)到了油、水兩相分離，從而可更好地從油相中提取醛、酮類物質(zhì)，以進(jìn)行檢測。

綜上所述，本研究中所建立的方法操作簡便、準(zhǔn)確，可用于注射用前列地爾干乳劑中甲氧基苯胺值的測定。