鄭娟，徐元成，呂可君

漿膜腔積液是惡性腫瘤患者較為常見的病理表現(xiàn)，也是惡性腫瘤較為常見的轉(zhuǎn)移部位，對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行判斷十分重要，對(duì)患者后續(xù)治療方案的確定也有一定的指導(dǎo)意義，因此尋找準(zhǔn)確率高的檢測(cè)方式具有十分重要的意義[1-2]。既往臨床上較為常見的檢測(cè)方式是進(jìn)行細(xì)胞涂片檢查，但是在進(jìn)行檢測(cè)操作過程中由于細(xì)胞聚集及結(jié)構(gòu)清晰度不夠、細(xì)胞數(shù)量少等多種因素的影響，癌細(xì)胞與正常細(xì)胞容易混淆，檢測(cè)準(zhǔn)確性不夠[3-4]。進(jìn)行細(xì)胞塊石蠟包埋處理能夠有效減少細(xì)胞病理學(xué)與組織病理學(xué)之間的差異，有效提升臨床檢測(cè)的準(zhǔn)確性[5]。本研究探討免疫組化與細(xì)胞塊技術(shù)在惡性漿膜腔積液分子病理診斷中的臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料標(biāo)本來源為2020年1―12月浙江省永康市第一人民醫(yī)院收集的143例漿膜腔積液患者，其中男72例，女71例；標(biāo)本類型：胸腔積液66例，腹腔積液72例，心包液5例。所有患者均符合《漿膜腔積液細(xì)胞病理學(xué)診斷》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，對(duì)本研究均知情同意，并積極配合相關(guān)檢查。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞涂片將20～40 ml的漿膜腔積液標(biāo)本分別置于4支離心試管中，使用湘儀TDZ5-WS多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)以2 500 r/min的速度進(jìn)行高速離心5 min后，將上層清液棄去后向離心管中加入20 ml含10%的中性甲醛，將離心試管置于震蕩儀中震蕩10 min，重復(fù)上述離心處理操作，將4支試管中的沉淀物取出，將其均勻涂在載玻片上，使用95%的乙醇進(jìn)行固定30 min后行HE染色。

1.2.2 細(xì)胞塊制作在室溫環(huán)境下將20 ml膜腔積液標(biāo)本固定20 min，將其放置到尖底離心試管中，將試管底層的10 ml標(biāo)本進(jìn)行5 000 r/min離心處理5 min，棄去上層清液后向下層沉淀物中加入10%的中性甲醛5 ml，進(jìn)行充分混勻后在室溫環(huán)境下靜置1 h，重復(fù)上述離心操作處理后，沉淀物使用濾紙包好置入自動(dòng)脫水機(jī)進(jìn)行脫水，制成細(xì)胞塊并將其切成3 m厚的切片，將切片放置在60℃環(huán)境中烘干1 h后進(jìn)行HE染色。

1.2.3 免疫組化染色將制好的細(xì)胞塊切片進(jìn)行免疫組化染色，將包埋的細(xì)胞塊切片進(jìn)行烤片后使用羅氏BenchMark ULTRA全自動(dòng)免疫組化染色系統(tǒng)進(jìn)行染色，單克隆抗體細(xì)胞角蛋白7（CK7）、癌胚抗原（CEA）及甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（TTF-1）均購(gòu)自羅氏公司。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞涂片及細(xì)胞塊HE染色均以可觀測(cè)到有惡性特征的細(xì)胞判斷為檢測(cè)陽性，無惡性特征的細(xì)胞判斷為陰性，如果存在異型細(xì)胞但無法支撐確診條件判斷為不確定。細(xì)胞塊免疫組化染色以靶細(xì)胞可見明顯的棕褐色或黃色顆粒為陽性，無著色情況則為陰性，著色情況置于兩者之間判斷為不確定。本研究以組織病理檢查結(jié)果作為診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”，分析細(xì)胞涂片及細(xì)胞塊技術(shù)對(duì)惡性漿膜腔積液的診斷效能。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同檢測(cè)方式陽性檢出結(jié)果比較細(xì)胞塊免疫組化染色檢出陽性率高于細(xì)胞涂片及細(xì)胞塊HE染色（2=6.091、4.608，均P＜0.05），與組織病理檢查結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 不同檢測(cè)方式陽性檢出結(jié)果比較 例（%）

2.2 不同腫瘤TTF-1、CK7及CEA陽性率情況免疫組化檢測(cè)TTF-1腫瘤細(xì)胞陽性率最高為肺癌（78.57%），CK7陽性率最高為乳腺癌（77.78%），CEA在肺癌中的陽性檢最高（92.86%），見表2。

表2 不同腫瘤TTF-1、CK7及CEA陽性率情況 例（%）

3 討論

漿膜腔積液是惡性腫瘤患者的常見并發(fā)癥，惡性漿膜腔積液的產(chǎn)生與癌細(xì)胞刺激、血管引起組織液回流障礙及癌栓阻塞淋巴管等原因存在明顯關(guān)系[6-7]。隨著人體內(nèi)部循環(huán)的進(jìn)行，隨時(shí)可能引起腫瘤的漿膜腔轉(zhuǎn)移，尤其是對(duì)于中晚期惡性腫瘤患者。影像學(xué)檢查受到積液的影響難以對(duì)患者原發(fā)病灶進(jìn)行探查，因此在惡性漿膜腔積液的檢查中存在一定的局限性，漏誤診率較高。細(xì)胞病理學(xué)檢查最為突出的優(yōu)勢(shì)就是操作簡(jiǎn)單和創(chuàng)傷小，安全性較高，而且還能進(jìn)行反復(fù)檢測(cè)，不僅檢測(cè)速度快還能有效提升檢查的準(zhǔn)確性[8]。

常規(guī)細(xì)胞涂片是細(xì)胞病理學(xué)檢查最常見的檢查方式，但是涂片過程中難以保證涂片的均勻，因而容易出現(xiàn)細(xì)胞組織重疊及結(jié)構(gòu)觀察難度大等問題，對(duì)閱片和診斷準(zhǔn)確性造成較大的影響；此外在制片過程中還容易產(chǎn)生脫片、紅細(xì)胞及炎癥細(xì)胞較多等問題，在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)標(biāo)記時(shí)對(duì)陽性蛋白的定位容易出現(xiàn)差異，因而難以滿足臨床診斷的要求。隨著臨床檢查技術(shù)的進(jìn)步，免疫組化與細(xì)胞塊技術(shù)在臨床病理檢查中的應(yīng)用越來越廣泛，細(xì)胞塊技術(shù)能夠有效使用離心處理，將紅細(xì)胞的干擾性因素進(jìn)行排除，減少對(duì)檢查結(jié)果的影響；而免疫組化技術(shù)細(xì)胞更加集中，且能夠呈現(xiàn)更加明顯的組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征，便于對(duì)細(xì)胞特征及組織差異進(jìn)行判斷，可準(zhǔn)確定位陽性表達(dá)位置，更加利于臨床診斷。

本研究結(jié)果顯示細(xì)胞塊與免疫組化技術(shù)結(jié)合對(duì)惡性漿膜腔積液的檢測(cè)陽性率與組織病理檢查接近，能夠有效判斷漿膜腔積液的細(xì)胞組織形態(tài)，并對(duì)異型細(xì)胞進(jìn)行判斷。隨著惡性腫瘤臨床治療的不斷進(jìn)步，現(xiàn)在靶向治療已經(jīng)成為廣為認(rèn)同的治療方式，因而對(duì)患者腫瘤相關(guān)蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)有利于指導(dǎo)臨床治療。本研究結(jié)果顯示不同惡性腫瘤患者抗體蛋白表達(dá)存在差異，可對(duì)臨床治療用藥的選擇提供借鑒。惡性腫瘤患者產(chǎn)生漿膜腔積液會(huì)造成胸悶、腹部不適等不良癥狀，造成較大的痛苦，因此進(jìn)行漿膜腔積液抽取不僅能緩解患者不良癥狀，還能用于探查其漿膜腔積液的性質(zhì)，提供基因和細(xì)胞檢查標(biāo)本。