左洪波，夏伯陽(yáng)，王夕亮，李華利，蘇小林，劉紅粉

（1.山東中泰藥業(yè)有限公司，山東聊城 252000；2.聊城伯陽(yáng)藥食真菌研究所，山東聊城 252000）

0 引言

靈芝是一種極為珍貴的中藥材，其被譽(yù)為“健康食物之冠”。近年來，隨著中醫(yī)學(xué)的發(fā)展及人們健康意識(shí)的增強(qiáng)，靈芝在中醫(yī)藥及保健領(lǐng)域的應(yīng)用不斷增加，較大的需求量促進(jìn)了靈芝種植產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。在靈芝選擇及栽培過程中，系統(tǒng)分析靈芝的生物學(xué)特性，然后由此來決定最佳的種植、生長(zhǎng)條件，能有效地增加靈芝的產(chǎn)量，提升靈芝品質(zhì)。本文就不同生境靈芝對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性展開分析。

1 靈芝的藥理價(jià)值

現(xiàn)階段，除癌癥、心腦血管疾病外，靈芝在胃腸道疾病、肝腎臟疾病、神經(jīng)衰弱等疾病治療中均有廣泛應(yīng)用[1]，此外，慢性支氣管炎、過敏等疾病均可采用靈芝來進(jìn)行治療。隨著中醫(yī)藥技術(shù)的不斷發(fā)展，人們對(duì)于靈芝的研究愈發(fā)深入?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，在靈芝中含有較為豐富的有機(jī)鍺，該元素被稱為“長(zhǎng)壽元素”，醫(yī)療保健價(jià)值極為突出，并且與人參相比，靈芝中有機(jī)鍺的含量更加豐富，其含量約為靈芝中有機(jī)鍺含量的4～5倍[2]。

2 不同生境靈芝對(duì)環(huán)境適應(yīng)性的對(duì)比試驗(yàn)

2.1 試驗(yàn)材料

提供兩種不同地區(qū)的靈芝菌株，分別記為A、B，A靈芝生長(zhǎng)地屬于寒溫帶，而B靈芝生長(zhǎng)地區(qū)處于中溫帶。兩地冬季漫長(zhǎng)寒冷，夏季溫暖短促，年均降水量為514 mm。在供試培養(yǎng)基選擇中，先選擇固態(tài)PDA培養(yǎng)基，然后選擇不同成分的完全培養(yǎng)基備用。

2.2 試驗(yàn)方法

本試驗(yàn)方法為：先對(duì)選擇的A、B靈芝菌種進(jìn)行分離、純化處理，然后選擇PDA培養(yǎng)基來對(duì)AB靈芝菌株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。隨后設(shè)定不同條件，對(duì)比AB靈芝菌株擴(kuò)大培養(yǎng)的實(shí)際情況，具體條件不僅包含溫度、濕度、pH值，而且涉及碳源、氮源等要素。要求每個(gè)環(huán)境條件下重復(fù)測(cè)試5次，對(duì)比兩種靈芝菌種的生長(zhǎng)速度，進(jìn)而掌握環(huán)境因素對(duì)靈芝的影響效果，以此來確定靈芝菌絲最佳的生長(zhǎng)條件[3]。

2.3 試驗(yàn)操作

試驗(yàn)方法執(zhí)行操作遵守以下要求和要點(diǎn)：①溫度測(cè)試中，將溫度要素分為5個(gè)梯度，溫度區(qū)間為16～32℃，各梯度相差4℃。②濕度要素從土壤和空氣兩個(gè)層面進(jìn)行分析，由于靈芝生長(zhǎng)對(duì)于濕度要求較高，設(shè)置土壤濕度為50%～70%，空氣濕度為70%～85%。③pH值同樣設(shè)置5梯度，pH值區(qū)間為4～8，分析pH值對(duì)靈芝菌種影響時(shí)，需將試驗(yàn)樣品放在25℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。④碳氮源控制中，對(duì)碳氮比進(jìn)行合理控制。就碳源而言，要求碳含量保持在2%，具體碳源構(gòu)成物不僅包含葡萄糖、蔗糖、淀粉，而且涉及麥芽糖、乳糖配；氮源中的氮含量保持在0.2%，構(gòu)成氮源的物質(zhì)主要有入酵母菌、黃豆粉、甘氨酸，除此之外，氮源構(gòu)成物還包括硫氨酸、蛋白胨。值得注意的是，對(duì)于碳氮比的控制，設(shè)置五種不同情況的碳氮比，碳氮比以葡萄糖和甘氨酸配成，具體碳氮比為5：1、10：1、20：1、30：1、40：1。在對(duì)碳氮源進(jìn)行對(duì)比分析時(shí)，要求均在25℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，并且培養(yǎng)過程要求無光照條件。上述操作完成后，接種并培養(yǎng)72 h，然后觀察菌絲半徑的生長(zhǎng)情況。

3 試驗(yàn)結(jié)果分析

3.1 溫度對(duì)靈芝菌種的影響

本試驗(yàn)顯示，AB菌種在16～32℃條件下聚能生長(zhǎng)，但菌絲的生長(zhǎng)速度具有一定的差異性（見圖1）。溫度處于16℃條件時(shí)，AB菌種生長(zhǎng)速度均較為緩慢，A菌種在16～28℃條件下菌絲生長(zhǎng)速度持續(xù)增加，而B菌種在16～24℃下菌絲生長(zhǎng)速度加快。當(dāng)溫度超過32℃以后，2種靈芝菌種的生長(zhǎng)速度均變慢。從差異顯著性層面進(jìn)行考慮，在24～18℃條件下，AB靈芝菌株的生長(zhǎng)速度無顯著差異。這表明在靈芝培養(yǎng)中，24～28℃的溫度條件是較適宜的溫度。

圖1 不同溫度條件下A、B菌種菌絲生長(zhǎng)情況

3.2 濕度對(duì)靈芝菌種的影響

本試驗(yàn)研究中，設(shè)定土壤濕度、空氣濕度的區(qū)間分別為50%～70%和70%～85%[4]。從不同濕度條件下靈芝菌種菌絲生長(zhǎng)情況來看，在50%～65%土壤濕度條件下，靈芝菌種菌絲的生長(zhǎng)條件較好，而當(dāng)空氣濕度達(dá)到70%～80%時(shí)，靈芝菌種的菌絲生長(zhǎng)較快。值得注意的是，當(dāng)靈芝均值處于子實(shí)體發(fā)育期時(shí)，其對(duì)于濕度的要求更高，在這一階段，空氣濕度若低于80%，則靈芝菌種的子實(shí)體容易出現(xiàn)發(fā)育不良問題，這不僅會(huì)降低靈芝的產(chǎn)量，而且會(huì)嚴(yán)重影響靈芝的品質(zhì)。結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果，建議在子實(shí)體發(fā)育階段，將空氣濕度控制在90%以上。

3.3 pH值對(duì)靈芝生長(zhǎng)的影響

本試驗(yàn)設(shè)定靈芝生長(zhǎng)的pH條件為4～8，在這一條件下，靈芝均可生長(zhǎng)。并且在試驗(yàn)過程中，pH值處于4～6時(shí)，AB菌種的菌絲均獲得了較快生長(zhǎng)，他們不僅菌落菌絲濃密，而且長(zhǎng)勢(shì)極為旺盛。當(dāng)pH值進(jìn)一步上升時(shí)，菌絲的生長(zhǎng)速度會(huì)有所變慢。其中當(dāng)pH值為5時(shí)，A靈芝菌株的生長(zhǎng)情況良好，而當(dāng)pH值為6時(shí)，B靈芝菌種的生長(zhǎng)情況較優(yōu)。對(duì)AB靈芝在不同pH值條件下的生長(zhǎng)情況進(jìn)行差異顯著性對(duì)比，結(jié)果表明，在pH為4～6條件下，兩種靈芝菌種的生長(zhǎng)速度無顯著差異，這表明在偏酸性條件下，靈芝的生長(zhǎng)狀況較為良好（見圖2）。

圖2 不同pH值條件下A、B菌種菌絲生長(zhǎng)情況

4 碳氮源對(duì)靈芝生長(zhǎng)的影響

在靈芝菌株碳氮源生長(zhǎng)情況分析中，需考慮碳源、氮源、碳氮比三種情況下的靈芝生長(zhǎng)情況。

本試驗(yàn)設(shè)置5種不同的碳源，結(jié)果顯示，在葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、果糖、可溶性淀粉物5種碳源條件下，AB靈芝菌種均能獲的生長(zhǎng)。對(duì)于A靈芝菌株而言，其在可溶性淀粉物中的生長(zhǎng)情況最優(yōu)，在葡萄糖中的生長(zhǎng)情況最長(zhǎng)，前者環(huán)境中，菌絲生長(zhǎng)濃密，長(zhǎng)勢(shì)旺盛，其余碳源條件中，靈芝菌株長(zhǎng)勢(shì)由優(yōu)到劣依次為芽糖、蔗糖、果糖。B靈芝菌株在葡萄糖碳源中的生長(zhǎng)條件較好，在可溶性淀粉中的長(zhǎng)勢(shì)較差，其他碳源條件下，靈芝菌株生長(zhǎng)長(zhǎng)勢(shì)由優(yōu)到劣分別為蔗糖、果糖、可溶性淀粉。

AB靈芝菌株在不同氮源條件下均能生長(zhǎng)。并且菌絲生長(zhǎng)速度最快，長(zhǎng)勢(shì)最為旺盛的氮源條件為蛋白胨，硫胺酸氮源條件下，靈芝菌種的生長(zhǎng)速度最慢，其中氮源條件中，磷脂生長(zhǎng)速度由快到慢依次為酵母菌、黃豆粉、甘氨酸；值得注意的是，在蛋白胨、酵母菌、黃豆粉氮源條件下，靈芝的生長(zhǎng)速度較快，且無顯著差異，而當(dāng)?shù)礂l件為甘氨酸、硫氨酸時(shí)，其生長(zhǎng)速度較慢。由此可見，有機(jī)氮對(duì)于靈芝菌株的生長(zhǎng)具有積極作用，并且當(dāng)?shù)礊榈鞍纂藭r(shí)，靈芝的生長(zhǎng)條件明顯較優(yōu)。

碳氮比條件不同時(shí)，其對(duì)于靈芝的生長(zhǎng)也有較大差異。本研究設(shè)置五種不同的碳氮比條件。在這5種碳氮比條件中，靈芝均能生長(zhǎng)。碳氮比為5：1時(shí)，靈芝菌株的生長(zhǎng)速度較為緩慢，而當(dāng)碳氮比為40：1時(shí)，兩種靈芝菌種的生長(zhǎng)速度最快，在此期間，隨著碳氮比值的增大，靈芝的生長(zhǎng)速度也隨之較快。

5 結(jié)論

結(jié)合本試驗(yàn)研究表明：①24～28℃溫度條件是AB靈芝菌株生長(zhǎng)的適宜溫度條件；②靈芝種植中應(yīng)注意濕度的控制，其中土壤濕度應(yīng)保持在50%～65%，空氣濕度應(yīng)保持在70%～80%。值得注意的是，在子實(shí)體發(fā)育期，靈芝對(duì)于濕度的要求更高，且不得低于80℃，故而建議靈芝養(yǎng)殖中，子實(shí)體發(fā)育期的控制濕度應(yīng)控制在90%，以此來保證靈芝發(fā)育良好。③靈芝在偏酸性條件下的長(zhǎng)勢(shì)較好，故可在種植中將其pH值控制在4～6之間。④靈芝菌種不同，其對(duì)于碳源條件的適用性具有較大差異，本研究中，A靈芝對(duì)于可溶性淀粉適應(yīng)性較強(qiáng)，而B靈芝在葡萄糖中長(zhǎng)勢(shì)良好；從氮源情況來看，靈芝在有機(jī)氮、無機(jī)氮中均能生長(zhǎng)，其中，有機(jī)氮中靈芝的長(zhǎng)勢(shì)更好，以蛋白胨氮源條件的表現(xiàn)最為突出。隨著碳氮比的增大，靈芝菌株的生長(zhǎng)速度也逐漸加快，碳氮比40：1時(shí)，兩種靈芝菌株菌絲的生長(zhǎng)速度最快。