李侗曾 梁連春

首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院呼吸與感染疾病科（北京100069）

新型冠狀病毒肺炎（COVID?19）是由新型冠狀病毒（SARS?CoV?2）引起的急性呼吸道疾?。?］。該病屬于新發(fā)傳染病，目前的研究結(jié)果對于其診斷、治療以及預(yù)防等方面有一定的了解，SARS?CoV?2疫苗的研發(fā)也已上市；已有眾多研究［2-6］表明SARS?CoV?2抗體（IgG/IgM），可以用于協(xié)助診斷SARS?CoV?2感染，但鑒于抗體檢測試劑應(yīng)用于臨床的時間有限，目前尚缺乏對于恢復(fù)期COVID?19患者SARS?CoV?2抗體的長期觀察性研究報道。隨著感染后SARS?CoV?2隨訪時間的延長，可以觀察到SARS?CoV?2抗體由陰性轉(zhuǎn)陽性，再由陽性逐漸轉(zhuǎn)為陰性，其協(xié)助診斷SARS?CoV?2感染的價值可能受到發(fā)病時間長短限制，對回顧性的疫情流行病學(xué)調(diào)查、疫苗效果的評價有重要影響［7］。本研究以北京佑安醫(yī)院收治的COVID?19患者為研究對象，分析隨訪至發(fā)病6個月以后患者抗體持續(xù)陽性情況及患者抗體持續(xù)陽性的影響因素，為COVID?19的臨床診療、流行病學(xué)調(diào)查及疫苗應(yīng)用提供一定的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象本研究為回顧性研究，選取2020年1月21日至10月25日于北京佑安醫(yī)院就診的COVID?19患者為研究對象，納入在隨訪期間SARS?CoV?2抗體檢測結(jié)果且隨訪時間超過6個月的COVID?19患者43例。隨訪起點是患者發(fā)病時間，隨訪終點為患者最后1次檢測SARS?CoV?2抗體時間。COVID?19的診斷標(biāo)準(zhǔn)和臨床分型依據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會辦公廳頒布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第八版）》。本研究符合首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會倫理規(guī)范的要求。

1.2 資料收集收集患者的人口學(xué)資料（年齡、性別）、流行病學(xué)接觸史、發(fā)病日期、基礎(chǔ)疾病、血常規(guī)（白細(xì)胞計數(shù)、淋巴細(xì)胞絕對值、血紅蛋白）、肝腎功能、CRP、是否有發(fā)熱情況等資料。收集患者住院及出院后隨訪期間所有的SARS?CoV?2抗體檢測結(jié)果。

1.3 SARS?CoV?2抗體檢測采用唐山英諾特生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的SARS?CoV?2抗體檢測試劑盒（膠體金法）。

1.4 分組本研究根據(jù)患者發(fā)病后的SARS?CoV?2抗體檢測結(jié)果，將發(fā)病后6個月內(nèi)連續(xù)兩次檢測IgM、IgG抗體均轉(zhuǎn)為陰性的患者定義為轉(zhuǎn)陰組，抗體持續(xù)陽性時間超過了6個月的患者定義為持續(xù)陽性組［8］。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，正態(tài)分布的計量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，非正態(tài)分布的計量資料以M（P25，P75）表示，計數(shù)資料以例（%）表示。計量資料比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗或Fisher′s精確概率法檢驗。比較抗體持續(xù)陽性患者與轉(zhuǎn)陰組患者之間臨床指標(biāo)差異，并將單因素分析中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的變量納入多因素logistic回歸分析，采用逐步向前的回歸方法篩選變量。P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者臨床資料隨訪超過6個月的COVID?19患者共有43例，其中男23例（53.5%），臨床分型為普通型37例（86.0%），中位隨訪時間為182 d。轉(zhuǎn)陰組10例（23.3%），持續(xù)陽性組33例。持續(xù)陽性組患者的年齡、發(fā)熱的比例顯著高于轉(zhuǎn)陰組患者，而淋巴細(xì)胞計數(shù)顯著低于轉(zhuǎn)陰組患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 SARS?CoV?2抗體持續(xù)陽性時間的影響因素將表1中年齡、發(fā)熱、淋巴細(xì)胞計數(shù)納入多因素分析，結(jié)果顯示發(fā)熱、淋巴細(xì)胞計數(shù)低是患者SARS?CoV?2抗體持續(xù)陽性的獨立危險因素，見表2。

表1 SARS?CoV?2抗體持續(xù)陽性6個月患者與轉(zhuǎn)陰患者之間臨床特點比較Tab.1 Comparison of clinical characteristics between SARS?CoV?2 antibody positive patients and negative patients for 6 months M（P25，P75）

3 討論

SARS?CoV?2屬于β屬的冠狀病毒，與其他冠狀病毒有一定的同源性。以往研究表明，嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒（SARS?CoV）IgM抗體出現(xiàn)時間早于IgG，抗體在發(fā)病后4個月達(dá)到高峰，并持續(xù)時間至少2年［9］。中東呼吸綜合征（MERS?CoV）抗體在發(fā)病后至少持續(xù)34個月［10］。在本研究中，經(jīng)過對恢復(fù)期患者的長期隨訪，發(fā)現(xiàn)患者發(fā)病后6個月SARS?CoV?2 IgM全部轉(zhuǎn)陰，23.3%的恢復(fù)期COVID?19患者IgG轉(zhuǎn)陰；本研究最長隨訪到發(fā)病后231 d，該患者的IgG仍為陽性。這一結(jié)果與其他研究一致［11-12］，但與上述兩種冠狀病毒抗體相比，SARS?CoV?2抗體持續(xù)時間明顯較短，這對COVID?19疫情的回顧性診斷或流行病學(xué)調(diào)查有一定的參考價值。

表2 影響SARS?CoV?2抗體持續(xù)陽性（6個月）的logistic回歸分析Tab.2 Logistic regression analysis of SARS?CoV?2 antibody persistence（6 months）

謝朝梅等［4］發(fā)現(xiàn)COVID?19患者的核酸轉(zhuǎn)陰時間與IgM、IgG轉(zhuǎn)陽時間有關(guān)，IgM、IgG轉(zhuǎn)陽時間越快，核酸轉(zhuǎn)陰時間也越快，考慮SARS?CoV?2抗體有可能對感染SARS?CoV?2有一定的保護(hù)作用，SARS?CoV?2抗體檢出時間有助于對新冠疫苗保護(hù)時間的預(yù)估分析。在本研究中，COVID?19患者的抗體在發(fā)病后6個月23.3%轉(zhuǎn)為陰性，因此對于感染SARS?CoV?2以后發(fā)生再次感染的風(fēng)險隨著距離首次感染時間延長逐漸增加。近期香港大學(xué)報道了1例二次感染SARS?CoV?2的案例，該患者在首次感染后的4個月再次感染SARS?CoV?2，但該患者兩次感染的病毒株基因排序有多個不同之處，由此可知，即使SARS?CoV?2抗體有保護(hù)作用，其持續(xù)時間較短，且缺乏交叉保護(hù)作用，是否存在抗體依賴性感染增強作用尚需進(jìn)一步研究。另外，一項來自美國的研究報道了一例患者在48 d內(nèi)感染了兩種不同基因型的SARS?CoV?2，并且第二次感染更為嚴(yán)重，這就表明感染過SARS?CoV?2并不能對患者有完全的保護(hù)作用，對于所有患者都應(yīng)采取同樣的防護(hù)措施［13］。

本研究進(jìn)一步分析了可能影響COVID?19患者SARS?CoV?2抗體持續(xù)時間的因素，多因素回歸分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞計數(shù)較低、發(fā)熱的患者在發(fā)病后6個月抗體持續(xù)陽性率較高，在未轉(zhuǎn)陰患者中危重癥的比例也較高。有研究發(fā)現(xiàn)SARS?CoV?2 S1蛋白特異性IgG水平與年齡、乳酸脫氫酶（LDH）水平呈正相關(guān)，與淋巴細(xì)胞百分率呈負(fù)相關(guān)，與本研究結(jié)果一致［14］。另外，也有眾多研究表明淋巴細(xì)胞計數(shù)下降是COVID?19重癥化的預(yù)警指標(biāo)［14-17］，由此推測，抗體持續(xù)陽性的時間可能與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。一項來自法國的隨訪時間為6個月的前瞻性研究結(jié)果顯示大約一半的輕癥患者抗體檢測陰性［8］，另外一項對無癥狀感染者的研究顯示，40%的COVID?19無癥狀感染者的在診斷后的3～6個月內(nèi)的IgG變?yōu)殛幮裕c輕癥患者相比，重癥患者產(chǎn)生的抗體滴度顯著升高，且在至少持續(xù)5～7個月［18-19］，該研究再次證實了抗體持續(xù)時間與患者病情相關(guān)，對于無癥狀感染者，免疫應(yīng)答較弱，抗體水平快速下降，對回顧性免疫性調(diào)查造成一定影響［20］。

隨著對SARS?CoV?2病毒的研究不斷加深，核酸以及抗體檢測試劑的普及，COVID?19診斷、治療及預(yù)防措施也不斷提高。本研究結(jié)果提示淋巴細(xì)胞計數(shù)偏低、臨床有發(fā)熱癥狀的COVID?19患者的抗體陽性持續(xù)時間更長，本研究可以為COVID?19疫情的追蹤調(diào)查、疫苗的研發(fā)等提供參考依據(jù)。