亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        桔??傇碥諏δz原性關節(jié)炎大鼠的抗炎作用及對TLR/MyD88/NF-κB通路的影響①

        2021-05-27 11:06:12何曉麗鐘先錦龔菊梅劉修樹合肥職業(yè)技術學院生物工程學院合肥238000
        中國免疫學雜志 2021年8期
        關鍵詞:總皂苷桔梗滑膜

        何曉麗 鐘先錦 龔菊梅 劉修樹(合肥職業(yè)技術學院生物工程學院,合肥 238000)

        類風濕性關節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種自身免疫性疾病,以關節(jié)滑膜慢性炎癥為主[1]。在RA的發(fā)病過程中,Toll樣受體4/髓樣分子因子88/核因子-κB(TLR/MyD88/NF-κB)信號通路介導的炎癥反應在RA的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用,阻斷由NF-κB信號通路介導的炎癥反應可防治RA的發(fā)生發(fā)展[2-3]。桔梗是常見的一種藥用植物,桔??傇碥帐瞧渲饕钚猿煞?,具有抗病毒、抗炎、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、保肝等多種藥理作用,在肺部疾病和炎癥相關性疾病中具有一定治療作用[4-5]。桔梗總皂苷可通過抑制NF-κB信號通路發(fā)揮抗炎作用,如董雙勇等[6]研究發(fā)現(xiàn)桔梗總皂苷通過抑制NF-κB的表達抑制急性肺損傷大鼠體內(nèi)的炎癥反應,發(fā)揮對急性肺損傷的保護作用。陳昭琳等[7]研究發(fā)現(xiàn)桔??傇碥胀ㄟ^抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激發(fā)揮對RA大鼠的治療作用??紤]NF-κB信號通路介導的炎癥反應在RA發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用,桔??傇碥站哂锌寡缀鸵种芅F-κB信號通路的作用,本課題組對桔??傇碥諏δz原性關節(jié)炎大鼠的抗炎作用及對TLR/MyD88/NF-κB通路的影響進行研究,探討桔梗總皂苷在抑制RA炎癥反應的作用及可能機制。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 實驗動物 清潔級、體重150~180 g、6~8周齡、Wistar大鼠購自北京醫(yī)療器械檢驗所,許可證號:SYXK(京)2015-0005。

        1.1.2 主要試劑與儀器 桔??傇碥眨ㄉ虾T慈~生物科技有限公司,純度98.2%),牛Ⅱ型膠原、完全弗氏佐劑(美國Chondrex公司);IL-1β、IL-6、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)ELISA試劑盒(上海酶聯(lián)科技有限公司);伊紅、蘇木素、蛋白裂解液(RIPA)(上海碧云天生物技術有限公司),兔抗鼠TLR2單克隆抗體、兔抗鼠TLR4單克隆抗體、兔抗鼠MyD88單克隆抗體、兔抗鼠p-NF-κB p65單克隆抗體、兔抗鼠NFκB單克隆抗體(美國Invitrogen公司);BH-2型OLYMPUS顯微鏡(日本Olympus公司)等。

        1.2 方法

        1.2.1 動物分組 取70只大鼠,根據(jù)隨機數(shù)字表法分為對照組、模型組、CKS低劑量組、CKS高劑量組、雷公藤多苷組,每組14只。

        1.2.2 膠原性關節(jié)炎大鼠模型建立 除對照組外,其他各組建立膠原性關節(jié)炎大鼠模型,具體方法為[8]:將10 ml牛Ⅱ型膠原(2 mg/ml)和等體積完全弗氏佐劑混合均勻,制成乳劑,備用。采用水合氯醛腹腔麻醉大鼠,麻醉成功后剪去大鼠尾根部和背部毛,皮內(nèi)多點注射0.25 mg牛Ⅱ型膠原乳劑,1周后再次注射,首次注射2周后,關節(jié)炎指數(shù)≥4為造模成功。對照組大鼠采用同樣方法注射等量生理鹽水。

        1.2.3 處理方法 造模成功后,CKS低劑量組和高劑量組大鼠分別給予CKS 100 mg/kg和200 mg/kg灌胃[7],雷公藤多苷組大鼠給予雷公藤多苷12 mg/kg灌胃作為陽性對照組,對照組和模型組給予等量生理鹽水灌胃。共12 d。

        1.2.4 關節(jié)炎指數(shù)計算 所有大鼠于建模前、建模后、給藥28 d時觀察關節(jié)炎嚴重程度變化。0分:未見腫脹;1分:足趾關節(jié)微見腫脹;2分:足趾關節(jié)和小趾關節(jié)可見腫脹;3分:踝關節(jié)以下足爪見腫脹;4分:包括踝關節(jié)在內(nèi)的全部關節(jié)腫脹。關節(jié)炎指數(shù)=4只肢體關節(jié)評分之和,最高分16分,≥4分為造模成功。對于造模失敗大鼠,取正常大鼠重新造模,取造模成功者補充上述造模失敗大鼠。

        1.2.5 標本采集 于給藥第28天時處死大鼠,取大鼠右踝關節(jié),用多聚甲醛固定,硝酸溶液脫鈣,脫水,石蠟包埋,切成厚0.4μm切片,用于HE和免疫組化染色檢測;取大鼠左踝關節(jié),切取滑膜組織,用于ELISA和Western blot檢測。

        1.2.6 HE染色 取大鼠踝關節(jié)切片組織,常規(guī)進行HE染色,光鏡下觀察大鼠踝關節(jié)組織病理學變化。

        1.2.7 踝關節(jié)滑膜組織中IL-1β、IL-6、TNF-α水平 取大鼠踝關節(jié)滑膜組織,剪碎、勻漿,8 000 r/min離心12 min,取上清液,再12 000 r/min離心30 min,采用ELISA法測定IL-1β、IL-6、TNF-α水平,實驗步驟嚴格按照說明書進行。

        1.2.8 滑膜組織TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白水平測定 取大鼠滑膜組織,加入EP管中,加入1 ml RIPA裂解液和10μl蛋白酶抑制劑混合,裂解30 min,12 000 r/min離心15 min,取上清液,采用Western blot測定滑膜組織TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白水平。經(jīng)常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉,加入一抗:兔抗鼠TLR2單克隆抗體、兔抗鼠TLR4單克隆抗體、兔抗鼠MyD88單克隆抗體、兔抗鼠p-NFκB p65單克隆抗體,稀釋比例1∶300,過夜孵育,加入二抗(1∶2 000)孵育1 h,采用增強化學發(fā)光法檢測,采用Image J軟件測定蛋白條帶灰度值。以βactin為內(nèi)參,目標蛋白水平以目標蛋白條帶灰度值/β-actin條帶灰度值。

        1.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS20.0軟件進行分析,各組大鼠關節(jié)炎指標、踝關節(jié)滑膜組織中IL-1β、IL-6、TNF-α水 平、踝關節(jié)滑膜組織TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白水平、踝關節(jié)滑膜組織NFκB蛋白IOD值經(jīng)檢驗均符合正態(tài)分布,以±s表示,各組之間比較采用單因素方差分析,組內(nèi)兩兩比較采用LSD檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結(jié)果

        2.1 各組大鼠關節(jié)炎指標值比較0 d時,各組大鼠關節(jié)炎指數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);其他各時間點各組大鼠關節(jié)炎指數(shù)差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),與模型組比較,CKS組大鼠關節(jié)炎指數(shù)降低,且呈劑量依賴性。見表1。

        表1 各組大鼠關節(jié)炎指數(shù)值比較(±s,n=14)Tab.1 Comparison of arthritis index values of rats in each group(±s,n=14)

        表1 各組大鼠關節(jié)炎指數(shù)值比較(±s,n=14)Tab.1 Comparison of arthritis index values of rats in each group(±s,n=14)

        Note:Compared with model group,1)P<0.05.

        35 d 10.35±0.91 7.52±0.931)6.89±0.871)6.65±0.911)49.659 0.000 Groups Model CKS low dose CKS high dose Tripterygium wilfordii F P 0 d 9.31±1.12 9.27±0.98 9.23±1.32 9.24±1.25 0.013 0.998 7 d 11.12±1.17 9.93±1.141)9.44±1.121)9.39±1.181)6.818 0.000 14 d 10.65±1.01 9.47±1.061)8.68±1.211)8.61±1.171)10.130 0.000 28 d 10.57±0.93 8.67±0.881)7.23±0.921)7.14±0.971)42.155 0.000

        2.2 各組大鼠踝關節(jié)滑膜組織HE染色 對照組大鼠踝關節(jié)結(jié)構清晰完整,滑膜組織表層滑膜細胞排列整齊,關節(jié)面和滑膜層平整光滑,關節(jié)腔無增生纖維組織,關節(jié)骨組織和軟骨組織結(jié)構完整;模型組大鼠踝關節(jié)結(jié)構異常,出現(xiàn)增生性滑膜炎表現(xiàn),滑膜細胞增生、排列紊亂,滑膜組織有大量炎癥細胞浸潤,滑膜下層血管充血擴張,形成血管翳,關節(jié)腔中纖維結(jié)締組織增生,關節(jié)腔隙變窄,關節(jié)骨組織和軟骨組織破壞;CKS低劑量組大鼠踝關節(jié)結(jié)輕,滑膜下結(jié)締組織中度充血,關節(jié)腔隙變窄減輕,關節(jié)骨組織和軟骨組織被破壞程度減輕;CKS高劑量組大鼠踝關節(jié)結(jié)構破壞顯著減輕,滑膜細胞增生顯著減少,少量炎癥細胞浸潤,滑膜下結(jié)締組織輕度充血,關節(jié)骨組織和軟骨組織破壞較輕。見圖1。

        圖1 各組大鼠踝關節(jié)滑膜組織HE染色(×40)Fig.1 HE staining of synovial tissue of ankle joint of rats in each group(×40)

        2.3 各組大鼠踝關節(jié)滑膜組織中IL-1β、IL-6、TNF-α水平比較 各組大鼠踝關節(jié)滑膜組織中IL-1β、IL-6、TNF-α水平差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),與對照組比較,模型組大鼠踝關節(jié)滑膜組織中IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高;與模型組比較,CKS各劑量組大鼠踝關節(jié)滑膜組織中IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低。見表2。

        表2 各組大鼠踝關節(jié)滑膜組織中IL-1β、IL-6、TNF-α水平比較(±s,n=14)Tab.2 Comparison of IL-1β,IL-6 and TNF-αlevels in synovial tissue of rats in each group(±s,n=14)

        表2 各組大鼠踝關節(jié)滑膜組織中IL-1β、IL-6、TNF-α水平比較(±s,n=14)Tab.2 Comparison of IL-1β,IL-6 and TNF-αlevels in synovial tissue of rats in each group(±s,n=14)

        Note:Compared with control group,1)P<0.05;compared with model group,2)P<0.05.

        TNF-α(ng/L)127.59±21.43 352.46±28.711)171.43±27.541)2)157.38±33.511)2)154.29±31.241)2)139.202 0.000 Groups Control Model CKS low dose CKS high dose Tripterygium wilfordii F P IL-1β(ng/L)31.24±5.03 102.37±6.421)55.42±6.281)2)38.24±5.861)2)36.58±6.021)2)337.435 0.000 IL-6(ng/L)43.52±6.26 75.43±7.021)54.16±7.021)2)47.98±7.241)2)46.57±7.131)2)47.885 0.000

        2.4 各組大鼠踝關節(jié)滑膜組織TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白水平比較 各組大鼠踝關節(jié)滑膜組織TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),與對照組比較,模型組大鼠踝關節(jié)滑膜組織TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白水平升高;與模型組比較,CKS各劑量組大鼠踝關節(jié)滑膜組織TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白水平降低。見表3、圖2。

        表3 各組大鼠踝關節(jié)滑膜組織TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白水平比較(±s,n=14)Tab.3 Levels of TLR2,TLR4,MyD88 and p-NF-κB p65 protein in synovial tissues of rats in each group(±s,n=14)

        表3 各組大鼠踝關節(jié)滑膜組織TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白水平比較(±s,n=14)Tab.3 Levels of TLR2,TLR4,MyD88 and p-NF-κB p65 protein in synovial tissues of rats in each group(±s,n=14)

        Note:Compared with control group,1)P<0.05;compared with model group,2)P<0.05.

        p-NF-κB p65 0.11±0.03 0.83±0.091)0.32±0.051)2)0.14±0.021)2)0.15±0.031)2)499.023 0.000 Groups Control Model CKS low dose CKS high dose Tripterygium wilfordii F P TLR2 0.09±0.03 0.43±0.061)0.24±0.051)2)0.13±0.031)2)0.14±0.021)2)157.964 0.000 TLR4 0.07±0.02 0.55±0.071)0.29±0.061)2)0.21±0.041)2)0.19±0.031)2)197.228 0.000 MyD88 0.13±0.03 0.62±0.081)0.28±0.061)2)0.15±0.021)2)0.16±0.031)2)241.959 0.000

        3 討論

        桔梗為桔??浦参锝酃5母稍锔?,為常用中藥之一,具有排膿、祛痰、利咽、宣肺等功效[9-10]。桔梗中含有大量皂苷,皂苷是桔梗藥理活性的主要成分[11]。近年研究發(fā)現(xiàn)桔??傇碥站哂锌寡鬃饔?,如姚琳等[12]研究發(fā)現(xiàn)桔??傇碥湛赏ㄟ^抑制炎癥細胞因子引起的肺組織炎癥反應,從而達到抑制肺纖維化進程,發(fā)揮對急性肺損傷大鼠的保護作用;CHOI等[13]研究發(fā)現(xiàn)桔??傇碥站哂袦p輕氣道炎癥的作用。RA為一種炎癥性疾病,滑膜中炎癥細胞因子水平升高[14]。本研究通過建立RA大鼠模型,發(fā)現(xiàn)大鼠關節(jié)炎指數(shù)升高,踝關節(jié)滑膜組織中IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高,HE染色顯示大鼠踝關節(jié)滑膜組織出現(xiàn)增生性滑膜炎表現(xiàn)。RA大鼠踝關節(jié)中炎癥細胞因子水平升高,炎癥反應在RA發(fā)病中發(fā)揮重要作用。RA大鼠給予低劑量和高劑量桔??傇碥罩委熀?,大鼠關節(jié)炎指數(shù)降低,踝關節(jié)滑膜組織中IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低,HE染色顯示大鼠踝關節(jié)滑膜組織出現(xiàn)增生性滑膜炎表現(xiàn)明顯減輕,且呈現(xiàn)劑量依賴性。本研究結(jié)果和上述研究結(jié)果一致,表明桔??傇碥站哂锌寡鬃饔茫赗A中可通過抑制炎癥反應發(fā)揮治療作用。

        本研究結(jié)果顯示:模型組大鼠踝關節(jié)滑膜組織TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白水平升高,NF-κB蛋白IOD值升高;給予各劑量桔梗總皂苷干預后,大鼠踝關節(jié)滑膜組織TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白水平降低,NF-κB蛋白IOD值降低。TLR/MyD88/NF-κB信號通路在炎癥反應中發(fā)揮重要作用,TLRs參與機體固有免疫反應,TLR2和TLR4是該家族重要成員,在炎癥反應過程中發(fā)揮關鍵性作用[15-16]。MyD88為TLRs通路的關鍵分子,通過傳遞TLRs信息,參與炎癥的發(fā)生發(fā)展過程[17]。TLR2和TLR4可通過相應的配體和MyD88相結(jié)合,激活下游NF-κB等轉(zhuǎn)錄因子,形成活化的NF-κB(p-NF-κB p65為NF-κB的活化形式),啟動炎癥介質(zhì)表達,誘導IL-1β、IL-6、TNF-α等炎癥細胞因子水平升高[18]。TLR2、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65水平升高,表明TLR/MyD88/NF-κB信號通路被激活[19]。在RA發(fā)病過程中,TLR/MyD88/NF-κB信號通路介導的炎癥反應發(fā)揮重要作用,抑制TLR/MyD88/NFκB信號通路介導的炎癥反應對RA具有保護作用[20]。桔??傇碥兆鳛槌S弥兴?,可通過NF-κB通路發(fā)揮抗炎作用,如桔??傇碥湛赏ㄟ^抑制NF-κB介導的炎癥反應改善順鉑誘導的急性腎毒性[21];桔??傇碥湛赏ㄟ^抑制NF-κB介導的炎癥反應減輕特應性皮炎樣皮膚損傷[22]。結(jié)合既往研究及本研究結(jié)果,推測桔??傇碥湛赡芡ㄟ^抑制TLR/MyD88/NF-κB信號通路激活,進而抑制其下游IL-1β、IL-6、TNF-α等炎癥細胞因子表達,抑制炎癥反應,從而發(fā)揮對RA的保護作用。

        綜上所述,桔??傇碥湛赏ㄟ^抑制炎癥反應發(fā)揮對RA的保護作用,其機制可能與其抑制TLR/MyD88/NF-κB信號通路的激活有關。

        猜你喜歡
        總皂苷桔梗滑膜
        基于滑膜控制的船舶永磁同步推進電機直接轉(zhuǎn)矩控制研究
        桔梗皂苷D在抗腫瘤作用機制中的研究進展
        高層建筑施工中的滑膜施工技術要點探討
        三七總皂苷調(diào)節(jié)PDGF-BB/PDGFR-β的表達促進大鼠淺表Ⅱ°燒傷創(chuàng)面愈合
        三七總皂苷緩釋片處方的優(yōu)化
        中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:10
        桔梗及其種植技術
        三七總皂苷膠束狀態(tài)與超濾分離的相關性
        中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:18:44
        桔梗之真?zhèn)?br/>——辨別味之苦甜
        HPLC-ESI-MS法在西洋參總皂苷提取工藝研究中的應用
        滑膜肉瘤的研究進展
        免费人成视频在线观看视频| 免费人妻精品区一区二区三| 亚洲大胆视频在线观看| 五月婷婷丁香视频在线观看| 国产av剧情久久精品久久| 成人性生交大片免费入口| 丰满熟妇乱又伦精品| 国产白袜脚足j棉袜在线观看| 一二三四在线视频观看社区| 久久中文字幕av一区二区不卡| 久久久久久久一线毛片| av毛片一区二区少妇颜射| 丰满少妇av一区二区三区 | 亚洲一区二区三区综合网| 国产自拍一区二区三区| 国产一区二区精品亚洲| а√天堂8资源中文在线| 少妇私密会所按摩到高潮呻吟| 精品国产乱码久久久久久口爆网站| 一级做a爰片久久毛片| 日本精品久久久久中文字幕1| 午夜亚洲精品一区二区| 涩涩鲁精品亚洲一区二区| 欧美a级在线现免费观看| 国产成人精品一区二区三区视频| 国产成人久久777777| 99久久久精品免费香蕉| 激情五月婷婷久久综合| 美利坚合众国亚洲视频| av剧情演绎福利对白| 亚洲精品www久久久久久| 亚洲男人的天堂在线播放| 无码一区二区三区AV免费换脸| 亚洲无码美韩综合| 一区二区三区亚洲免费| 日本亚洲国产精品久久| 无码国产69精品久久久久孕妇| 精品久久亚洲中文无码| 亚州无线国产2021| 国产精品久久国产精品久久 | 亚洲综合偷拍一区二区|