張夢瑩，周 軍，張曉潔

南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗學(xué)部，江蘇南京 210029

乙肝是由乙肝病毒(HBV)引起的一種全球性疾病。感染HBV可以誘發(fā)一系列肝臟疾病，以慢性型和亞臨床型多見。因其嚴(yán)重危害公共健康，我國從1992年開始為新生兒接種乙肝疫苗，2007年開始在全國范圍內(nèi)推廣接種[1-2]。目前，本院婦幼分院采用羅氏電化學(xué)發(fā)光法(ECL)檢測乙肝表面抗原(HBsAg)，檢測工作中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)母親HBsAg陰性而新生兒HBsAg弱陽性的病例。RYSGAARD等[3]報道新生兒接種疫苗后會出現(xiàn)短暫的HBsAg陽性。但近來有研究報道，新生兒高膽紅素血癥會對HBsAg的檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾[4]。本文對ECL檢測新生兒HBsAg弱陽性的影響因素進(jìn)行進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)了不同的結(jié)果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年2-8月在本院婦幼分院住院并進(jìn)行HBsAg檢測的516例新生兒作為研究對象，其中男315例(61.05)%，女201例(38.95%)；年齡1～7 d，中位年齡3 d；1～3 d 449例(87.02%)，4～7 d 67例(12.98%)。所有新生兒均在出生24 h內(nèi)接種乙肝疫苗，其中349例(67.64%)新生兒血清總膽紅素超過200.0 μmol/L，中位數(shù)水平230.5 μmol/L，以間接膽紅素(中位數(shù)水平209.8 μmol/L)升高為主。初次65例(12.60%)新生兒血清HBsAg檢測呈陽性，排除2例(3.08%，2/65)母親HBsAg陽性的新生兒病例，其余63例納入本研究。陽性標(biāo)本高速離心后HBsAg結(jié)果轉(zhuǎn)陰9例(14.29%,9/63),陽性標(biāo)本藍(lán)光照射后HBsAg結(jié)果轉(zhuǎn)陰2例(3.17%,2/63),陽性標(biāo)本7～14 d后HBsAg復(fù)檢結(jié)果轉(zhuǎn)陰62例(98.41%,62/63)。

1.2儀器與試劑 HBsAg檢測采用ECL，在Cobas e601羅氏免疫分析儀上按照檢測試劑說明書進(jìn)行。Cobas e601儀器會自動根據(jù)每次定標(biāo)時標(biāo)準(zhǔn)品的檢測信號計算cut off值，每份標(biāo)本的結(jié)果以該標(biāo)本的檢測信號cut off的形式(COI)報道。檢測結(jié)果>1.0 COI判定為陽性。血清膽紅素(包括總膽紅素和直接膽紅素)檢測采用釩酸氧化法，在貝克曼庫爾特AU5800全自動生化分析儀上進(jìn)行，使用試劑為寧波美康生物公司生產(chǎn)的總膽紅素和直接膽紅素試劑。成人總膽紅素參考區(qū)間為5.1～19.0 μmol/L，直接膽紅素參考區(qū)間為0.0～6.8 μmol/L，間接膽紅素參考區(qū)間為0.0～20.0 μmol/L。新生兒血清膽紅素目前尚無公認(rèn)的參考區(qū)間，有研究發(fā)現(xiàn)，66.7%的足月兒和80.0%的早產(chǎn)兒出生后1周內(nèi)由于生理、病理原因，會有肉眼可見的黃疸和不同程度的血清膽紅素升高[5-8]。

1.3檢測流程 抽取受試者靜脈血2 mL，置于真空采血管中，以3 500 r/min離心10 min后上機檢測HBsAg。HBsAg結(jié)果陽性的血清標(biāo)本收集于凍存管中保存于-80 ℃。同時追溯HBsAg陽性新生兒母親的HBsAg檢測結(jié)果63例均為陰性，排除了母嬰垂直傳播的可能性。所有收集的血清標(biāo)本分為2份：第1份進(jìn)一步以12 000 r /min離心10 min后上機檢測HBsAg，以排除纖維蛋白干擾或小顆粒物質(zhì)干擾的可能性；第2份血清標(biāo)本在貝克曼庫爾特AU5800全自動生化分析儀上檢測血清膽紅素(包括總膽紅素和直接膽紅素)，對血清總膽紅素高于200 μmol/L的血清標(biāo)本進(jìn)行藍(lán)光照射，照射時將血清裝于透明的EP管中，在嬰兒光療箱中以450 nm藍(lán)光照射8 h。照射后的血清再分為2份，一份用來檢測膽紅素，另一份用來檢測HBsAg。對血清HBsAg檢測陽性的新生兒，3～7 d后再次采集靜脈血分離血清檢測HBsAg。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用Graphpad Prism 7對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。因患者年齡、HBsAg COI值、血清膽紅素檢測值均呈偏態(tài)分布，故統(tǒng)計描述用中位數(shù)表示。

2 結(jié) 果

2.1高速離心后HBsAg結(jié)果 對母親HBsAg陰性的63例標(biāo)本經(jīng)12 000 r/min高速離心10 min后，82.54%(52/63)的血清HBsAg結(jié)果有不同程度降低，其中9例(14.29%)血清HBsAg轉(zhuǎn)陰，且轉(zhuǎn)陰的標(biāo)本HBsAg初次檢測結(jié)果COI值多集中在1.0～1.2。見表1。

2.2藍(lán)光照射后HBsAg結(jié)果 63例新生兒標(biāo)本總膽紅素水平(230.5 μmol/L)均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常參考范圍，79.37%(50/63)的標(biāo)本膽紅素>200 μmol/L，經(jīng)藍(lán)光照射8 h后血清總膽紅素水平均小于檢測下限。藍(lán)光照射后有42.86%(27/63)的標(biāo)本血清HBsAg檢測水平降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。僅有2例標(biāo)本血清HBsAg轉(zhuǎn)陰，見表1。

2.33～7 d后復(fù)檢HBsAg結(jié)果 對63例血清HBsAg檢測結(jié)果陽性的新生兒，收集其3～7 d后的靜脈血血清檢測HBsAg。結(jié)果發(fā)現(xiàn)63例標(biāo)本中的62例(98.41%)血清HBsAg均在3～7 d后轉(zhuǎn)陰，只有1例新生兒6 d后檢測HBsAg未轉(zhuǎn)陰，但后續(xù)結(jié)果失訪。見表1。

表1 不同條件處理對新生兒血清HBsAg的影響

續(xù)表1 不同條件處理對新生兒血清HBsAg的影響

3 討 論

HBsAg是體內(nèi)存在HBV感染的重要標(biāo)志之一，感染后最先出現(xiàn)，具有免疫原性，可激發(fā)機體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體[9]。HBV傳播方式有3種：血液傳播、性接觸傳播和母嬰垂直傳播，我國乙肝高發(fā)的主要原因是家族性傳播，其中以母嬰垂直傳播為主。檢驗工作中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)母親HBsAg陰性而新生兒HBsAg弱陽性的病例。有研究表明，接種乙肝疫苗會導(dǎo)致血清HBsAg檢測呈弱陽性反應(yīng)[10]。史曉敏等[4]發(fā)現(xiàn)，新生兒高膽紅素血癥影響其血清HBsAg的檢測結(jié)果，是造成新生兒血清HBsAg檢測假陽性的主要原因之一。本研究對新生兒高膽紅素血癥對HBsAg檢測結(jié)果的影響進(jìn)行探究，并對其他影響因素進(jìn)行分析。

516例新生兒中有65例血清HBsAg檢測結(jié)果為陽性，回顧HBsAg陽性的新生兒母親血清HBsAg檢測結(jié)果，其中63例陰性，2例陽性。排除母嬰垂直傳播的干擾，對這63例母親血清HBsAg陰性的新生兒標(biāo)本進(jìn)行高速離心，高速離心后82.50%的標(biāo)本HBsAg檢測結(jié)果有不同程度的降低，14.29%的標(biāo)本HBsAg結(jié)果轉(zhuǎn)陰，轉(zhuǎn)陰的標(biāo)本HBsAg初次檢測COI值多集中在1.0～1.2。這種假陽性可能是由于離心力不足，血清中殘留有纖維蛋白或細(xì)胞碎片等其他小顆粒物質(zhì)與試劑中的順磁微粒結(jié)合造成的，可以通過增加離心力，延長離心時間消除。

史曉敏等[4]認(rèn)為，新生兒體內(nèi)高水平的間接膽紅素會引起清蛋白之間交聯(lián)形成微小的顆粒物質(zhì)，無法通過高速離心去除時會導(dǎo)致血清HBsAg檢測結(jié)果呈假陽性。藍(lán)光照射可以破壞膽紅素分子的氫鍵，增加間接膽紅素的水溶性，使其通過膽汁和尿液迅速排泄，從而達(dá)到降低體內(nèi)膽紅素水平。因而臨床上對于新生兒黃疸一般采用藍(lán)光照射治療[11]。本研究對血清HBsAg陽性的新生兒標(biāo)本進(jìn)行藍(lán)光照射，照射后檢測血清膽紅素水平均低于檢測下限，排除了膽紅素的干擾。復(fù)檢后僅有2例HBsAg轉(zhuǎn)陰，42.86%(27/63)的標(biāo)本血清HBsAg檢測水平有不同程度的降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。不足以證實新生兒高血清膽紅素血癥的干擾造成HBsAg檢測呈假陽性的觀點。

有研究報道，新生兒接種乙肝疫苗后HBsAg陽性主要發(fā)生于接種后0～7 d[12-13]。由于本研究入選的新生兒標(biāo)本采集時間均小于7 d，所以在3～7 d后再次采集靜脈血檢測血清HBsAg，結(jié)果有53例轉(zhuǎn)陰，有1例新生兒HBsAg未轉(zhuǎn)陰，但多種原因造成結(jié)果失訪。進(jìn)一步佐證乙肝疫苗接種會引起HBsAg一過性陽性的推論[3]。

因此，臨床工作中對于新生兒HBsAg陽性，尤其是COI值<1.2 的標(biāo)本，應(yīng)首先考慮離心力和離心時間不夠?qū)е碌男☆w粒物質(zhì)干擾。經(jīng)提高轉(zhuǎn)速，延長離心時間消除干擾后復(fù)檢，仍然陽性者考慮乙肝疫苗接種后陽性，2周后復(fù)檢或進(jìn)一步檢測病毒核酸，尚無足夠證據(jù)證明新生兒血清高膽紅素血癥對HBsAg檢測結(jié)果的影響。