文 /保麗玲

腫瘤通過淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移主要是由于腫瘤細胞對淋巴管侵犯破壞了淋巴管網(wǎng)絡(luò)，使淋巴管僅殘存剩余的內(nèi)皮細胞使其喪失了免疫功能[1]。腫瘤外周通過誘導(dǎo)新淋巴管生成促進淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而淋巴管侵犯以及新淋巴管的生成與惡性腫瘤不良的預(yù)后存在相關(guān)的聯(lián)系[2]?，F(xiàn)階段，由于無針對淋巴管的特異標志物，導(dǎo)致臨床上缺乏淋巴管生成對腫瘤轉(zhuǎn)移影響的研究。有相關(guān)報道表明，單克隆抗體D2-40作為一種IgG抗體通過識別淋巴管內(nèi)皮糖蛋白中一個固定抗原表位，可以嚴格區(qū)分血管內(nèi)皮和淋巴內(nèi)皮，因此，可以作為淋巴管內(nèi)皮的特異性標志物[3]。血管生成促進了腫瘤的進展和轉(zhuǎn)移，而血管生成通常采用MVD作為測量指標[4]。由于目前臨床上關(guān)于淋巴管密度、微血管密度水平與胃癌病理特征的關(guān)系缺乏足夠的科學(xué)理論，故本研究將對我院2018年12月-2019年12月收治的120例胃癌手術(shù)患者為研究對象，分析腫瘤組織中LVD與MVD與胃癌病理特征的關(guān)系，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2018年12月至2019年12月期間收治的120例胃癌手術(shù)患者為研究對象，其中男性56例，女性64例，最小年齡37歲，最大年齡76歲，平均年齡（67.5±3.5）歲，患者腫瘤直徑3.5-8.3cm,其中5cm以下者62例，超過5cm者58例，術(shù)后對患者的胃癌組織進行研究發(fā)現(xiàn)，腺管狀胃癌32例，乳頭狀胃癌33例，黏液狀胃癌31例，印戒細胞胃癌24例。所有患者術(shù)前均無其他輔助性治療并排除合并其他臟器器質(zhì)性病變患者。

1.2 檢驗試劑

以即用型D2-40單克隆抗體、即用型CD31單克隆抗體、SP免疫組化試劑為檢驗試劑進行免疫組織化學(xué)染色后，以光學(xué)顯微鏡輔助下觀察并統(tǒng)計腫瘤邊緣及腫瘤中心的MVD及LVD形態(tài)及數(shù)量分布情況。

1.3 檢測方法

將腫瘤組織以10%福爾馬林浸泡并實施石蠟包埋后進行免疫組化染色。取4-6um腫瘤組織切片以二甲苯行脫蠟處理后進行復(fù)水操作。內(nèi)源性過氧化物酶以3%過氧化氫阻滯15min并行SP法。以檸檬酸鈉緩沖液聯(lián)合加熱操作使D2-40抗原修復(fù)。對組織切片進行EDTA預(yù)處理后觀察CD-31抗體的抗原表達。阻斷非特異性抗體結(jié)合反應(yīng)時使用普通兔血漿。加入經(jīng)稀釋的D2-40和CD-31抗體，使組織切片在4℃的夜間進行孵化。以3-氨基和-9乙基咔唑為色原體，觀察抗原抗體反應(yīng)情況。采用蘇木素對組織切片進行反染后計數(shù)。以PBS代替主要抗體作為陰性，以淋巴管瘤切片為陽性對照。

1.4 判定標準

在光學(xué)顯微鏡輔助下采用雙盲法觀察組織切片的抗原抗體反應(yīng)顯影。腫瘤邊緣部位D2-40單克隆染色體陽性呈黃色顆粒狀，而腫瘤中央部位則數(shù)量較少甚至未見表現(xiàn)，因此可以確定其具有標記作用，在腫瘤組織中可以作為淋巴管內(nèi)皮的特異性標志物。有關(guān)醫(yī)療研究人員指出了評估MVD和LVD的具體方法如下：以兩組胃癌組織切片為例，用低倍鏡觀察D4-20免疫染色顯影情況，選取2個最高密度脈管化區(qū)域進行仔細檢查，取2個高倍鏡視對視野下的D2-40陽性淋巴管進行計數(shù)并取平均值代表LVD；以低倍鏡觀察CD-31免疫染色顯影情況，選取2個最高密度脈管化區(qū)域進行仔細檢查。取2個高倍鏡對視野下CD-31陽性的血管進行計數(shù)并取平均值代表MVD。在腫瘤細胞中對腫瘤中心脈管進行計數(shù)，而高倍鏡視野范圍內(nèi)對圍繞在腫瘤細胞邊緣的脈管計數(shù)為瘤周脈管。

1.5 評價指標

分析癌邊緣及癌中心MVD和LVD[5-6]與胃癌腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型的關(guān)系。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

對本次研究數(shù)據(jù)采用SPSS22.0進行分析，計量資料采用（）表示，計數(shù)資料用%表示，以t和x2檢驗，以P＜0.05為準，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 淋巴管密度（LVD）。

癌細胞內(nèi)LVD總體為（4.7±1.8）個；癌細胞邊緣LVD為（7.8±2.6）個且癌細胞邊緣LVD與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）,但與組織病理學(xué)類型無關(guān)（P＞0.05）。癌細胞內(nèi)LVD與胃癌腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織病理學(xué)類型均無關(guān)聯(lián)性（P＞0.05）。詳見表 1。

表1 LVD對胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)的影響（，個）

表1 LVD對胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)的影響（，個）

臨床病理學(xué)參數(shù) 癌邊緣LVD 癌中心LVD腫瘤 ＜5cm 5.7±1.5 5.5±2.1腫瘤≥5cm 9.3±2.8 5.8±3.4腺管狀和乳頭狀 6.7±2.8 /粘液狀 7.1±3.8 5.5±1.5印戒細胞 8.7±4.2 5.4±2.3無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 3.5±2.4 3.7±1.3有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 9.3±4.1 4.2±2.4

2.2 微血管密度（MVD）

癌細胞內(nèi)MVD為（48.7±14.5）個，癌細胞邊緣MVD為（46.2±13.2）個；癌細胞內(nèi)及癌細胞邊緣MVD與腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移情況、組織病理學(xué)類型均無關(guān)聯(lián)性（P＞0.05）,詳見表2。

表2 MVD對胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)的影響（，個）

表2 MVD對胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)的影響（，個）

臨床病理學(xué)參數(shù) 癌邊緣MVD 癌中心MVD腫瘤 ＜5cm 43.2±16.6 42.7±17.9腫瘤≥5cm 47.6±14.7 48.5±16.3腺管狀和乳頭狀 42.6±17.0 50.2±16.8粘液狀 35.4±14.9 42.9±12.6印戒細胞 54.1±13.1 40.7±11.7無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 42.3±14.5 41.6±13.9有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 45.7±16.2 47.9±15.8

3 討論

新生血管對腫瘤具有促進發(fā)展和轉(zhuǎn)移的作用已得到科學(xué)驗證。淋巴結(jié)作為腫瘤的最初轉(zhuǎn)移途徑，其轉(zhuǎn)移程度直接影響患者的臨床癥狀及預(yù)后情況。雖然腫瘤最初經(jīng)淋巴轉(zhuǎn)移，但腫瘤細胞因何進入淋巴系統(tǒng)以及腫瘤誘導(dǎo)的新生淋巴管或原淋巴管是否促進淋巴轉(zhuǎn)移，有待醫(yī)療學(xué)者提供科學(xué)證實[7]。

此前，相關(guān)學(xué)者通過采用除D2-40外不同的淋巴管標志物分析胃癌與淋巴管生成的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)在胃癌中淋巴管密度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，但因缺乏深入的探討，故研究意義有待考量[8-9]。近年來，有醫(yī)療學(xué)者發(fā)現(xiàn)，D2-40單克隆抗體可以作為針對淋巴管內(nèi)皮的選擇性標志物，因此，眾多醫(yī)學(xué)研究人員以D2-40區(qū)分血管內(nèi)皮和淋巴內(nèi)皮檢驗手段對胃癌及其他惡性腫瘤新生淋巴管進行研究[10]。

以上研究結(jié)果顯示淋巴管在胃癌組織的中心區(qū)域與邊緣區(qū)域呈現(xiàn)出不同的表現(xiàn)形態(tài)及密度水平。較腫瘤中心內(nèi)淋巴管細小，扁平的形態(tài)不同的是，腫瘤邊緣區(qū)域的淋巴管呈增大、擴張狀態(tài)，而且數(shù)量較多。筆者認為，增殖的腫瘤細胞及瘤內(nèi)持續(xù)的高壓導(dǎo)致了瘤內(nèi)淋巴管萎縮塌陷或者癌細胞對淋巴管的侵犯使得瘤內(nèi)淋巴管僅剩下內(nèi)皮細胞，從而喪失了其免疫功能，而腫瘤邊緣區(qū)域的淋巴則促進了腫瘤細胞的傳播轉(zhuǎn)移。

本研究結(jié)果表明，胃癌患者腫瘤邊緣的淋巴管能夠促進腫瘤轉(zhuǎn)移，進而加快腫瘤的進展速度。而腫瘤中心的LVD與胃癌的臨床病理并無關(guān)聯(lián)性。此外，本研究結(jié)果還顯示，胃癌患者的腫瘤中央部位及邊緣部位的MVD與胃癌臨床病理各參數(shù)之間均無關(guān)聯(lián)性。因此說明胃癌患者的微血管密度對胃癌的轉(zhuǎn)移和進展不具有影響力。

綜上所述，胃癌患者腫瘤邊緣的淋巴管生成可能為腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移和傳播提供了途徑，加速了胃癌的進展，因此采用D2-40法研究可能胃癌與淋巴管生成的關(guān)系對胃癌的風(fēng)險轉(zhuǎn)移評估具有一定的臨床參考價值。