胡 骕，張 順，黃順騁，羅冬冬，趙海林，李 丹，彭 彪（通訊作者）

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院神經(jīng)外科 廣東 廣州 510000）

在顱腦腫瘤中神經(jīng)膠質(zhì)瘤約占46%的比例，因神經(jīng)膠質(zhì)瘤的細(xì)胞侵襲性、增值性均較強(qiáng)，生長呈浸潤性，極易對正常腦組織實(shí)施侵犯，生長較為迅速，極難全部切除，術(shù)后存在較高的復(fù)發(fā)率，死亡率高、生存時(shí)間短、預(yù)后極差[1]?，F(xiàn)階段雖聯(lián)合手術(shù)、放化療取得了一定進(jìn)展，但效果仍不甚理想。診療膠質(zhì)瘤的難點(diǎn)在于目前缺乏早期有效的診斷、治療靶點(diǎn)。近幾年，探尋膠質(zhì)瘤預(yù)后相關(guān)標(biāo)志物、治療有效靶點(diǎn)的研究工作成為熱點(diǎn)。miRNA 在真核生物中廣泛存在，為內(nèi)源性非編碼的小RNA，常結(jié)合靶基因mRNA 對靶基因的表達(dá)實(shí)施調(diào)控。最近幾年，相關(guān)研究指出，表達(dá)異常的miRNA 會(huì)對抑癌或促癌基因功能產(chǎn)生影響，進(jìn)而對其形成和進(jìn)展發(fā)揮抑制或促進(jìn)作用。有關(guān)資料證實(shí)[2]，miR-21l 可對口腔癌、黑色素瘤、肝癌等發(fā)生、發(fā)展起到抑制作用。但尚未明確膠質(zhì)瘤中miR-21l 的表達(dá)及其評估預(yù)后的價(jià)值[3]。本文經(jīng)對膠質(zhì)瘤不同級(jí)別組織、正常腦組織中miR-21l 的表達(dá)實(shí)施檢測，對其病理特征展開分析，并明確其評估預(yù)后的價(jià)值，詳細(xì)如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

2016 年1 月—2020 年5 月，在我院就診的神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者中選取70 例，其中男42 例，女28 例，年齡27 ～77 歲，平均57 歲，其中11 例I 級(jí)，15 例Ⅱ級(jí)，26 例Ⅲ級(jí)，18 例Ⅳ級(jí)。另取因顱腦重型損傷行減壓術(shù)患者的正常腦組織20 例。院倫理委員審核批準(zhǔn)。術(shù)前患者或家屬均知曉，并簽署了同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：70 例患者術(shù)后均具備5 年完整的隨訪資料；患者均以手術(shù)將腫瘤組織切除，術(shù)前未接受放化療；腫瘤組織切除后將其標(biāo)本置于-80℃液氮中儲(chǔ)存，便于RNA 的分離提取[3]。

1.2 檢測miR-211

借助Trizol 法完成正常腦組織、膠質(zhì)瘤組織內(nèi)的RNA 的提取，后以紫外分光光度計(jì)測定其濃度、純度，在260 nm、280 nm 波長處時(shí)測定其吸光度比值，并將OD260／OD280 值計(jì)算出來，保證OD 值在1.8 ～2.1 間。以qRT—PCR 對miR-211 對兩種標(biāo)本中的表達(dá)水平實(shí)施檢測，內(nèi)參為RNU6B。樣品操作重復(fù)最少3 次[4]。

1.3 隨訪

術(shù)后每3 個(gè)月，以電話、入院、門診復(fù)查等方式對患者實(shí)施隨訪，并同步更新隨訪資料。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2.結(jié)果

2.1 microRNA-211 表達(dá)

檢測qRT.PCR 結(jié)果顯示，microRNA-211 在膠質(zhì)瘤組織內(nèi)表達(dá)水平為（0.40±0.25），相較與正常腦組織,顯著為低（P＜0.05）。膠質(zhì)瘤WHO 分級(jí)增高，而miR-211 表達(dá)水平降低，表明miR-211 表達(dá)水平和WHO 分級(jí)趨勢為負(fù)相關(guān)性。

2.2 分析病理特征

在膠質(zhì)瘤的病理組織全部樣本中miR-211 表達(dá)平均水平為0.40±0.25,以此為截點(diǎn)分70 例患者為兩組，28例高表達(dá)、42 例低表達(dá)。對其表達(dá)水平與病理特征間關(guān)系分析顯示，高組織學(xué)分級(jí)、KPS 評分密切關(guān)系到低表達(dá)miR-211 的水平，而腫瘤直徑、位置、患者性別、年齡等與其無關(guān)。見表1。

表1 膠質(zhì)瘤腦組織病理特征分析（例，%）

2.3 預(yù)后

經(jīng)分析K a p l a n.M e i e r 的結(jié)果顯示，對比生存率，m i R-211 高表達(dá)組較低表達(dá)組高（P＜0.05）。為進(jìn)一步明確膠質(zhì)瘤患者中miR-211 表達(dá)評估預(yù)后的價(jià)值，本文分析了單因素，結(jié)果可見，高組織學(xué)分級(jí)、KPS 評分＜80 分、miR-211 低表達(dá)為預(yù)后的不良指標(biāo)，見表2。

表2 腦膠質(zhì)瘤患者分析單因素COX 分析

為進(jìn)一步明確miR-211表達(dá)是否為預(yù)后獨(dú)立的因素，經(jīng)分析多因素比例可見，高組織學(xué)分級(jí)、KPS 平評分＜80 分、miR-211 低表達(dá)均為影響預(yù)后獨(dú)立的危險(xiǎn)因素，見表3。

表3 腦膠質(zhì)瘤患者分析多因素COX 分析

3.討論

在神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤中腦膠質(zhì)瘤最常見，其具備較高的惡性程度、預(yù)后較差、易復(fù)發(fā)。手術(shù)切除、放化療為治療該癥主要的手段，其預(yù)后較差，其中高級(jí)別膠質(zhì)母細(xì)胞瘤較為特別，12 ～15 個(gè)月為其生存時(shí)間?，F(xiàn)階段，臨床尚無膠質(zhì)瘤預(yù)后預(yù)測生物學(xué)有效的標(biāo)志物。大量資料雖指出[5]，多種因素與其預(yù)后有關(guān)，如K P S 評分、W H O 分級(jí)等，但因患者異質(zhì)性作用影響其評估的精準(zhǔn)性。所以，對發(fā)生膠質(zhì)瘤及其發(fā)展機(jī)制展開深入研究，尋求一種可準(zhǔn)確預(yù)測其預(yù)后的標(biāo)準(zhǔn)物，進(jìn)而早期診斷、治療該癥，并對其預(yù)后展開評估十分關(guān)鍵。

最近幾年，有資料指出[6]，轉(zhuǎn)錄后的miRNA 水平對目標(biāo)靶基因表達(dá)實(shí)施調(diào)節(jié)，對腫瘤細(xì)胞各項(xiàng)生理過程產(chǎn)生影響，如增殖、遷移、分化、凋亡等，進(jìn)而發(fā)揮其抑制或促進(jìn)的效果。部分文獻(xiàn)指出[7]，腫瘤組織中miRNAs表達(dá)的水平直接關(guān)系到患者生存率，可將其作為指標(biāo)預(yù)后的評價(jià)。本文主要調(diào)查了膠質(zhì)瘤患者病理特征、預(yù)后與miR-211 表達(dá)間關(guān)系。

本文結(jié)果可見，miR-211 表達(dá)水平分析，膠質(zhì)瘤組織較正常腦組織低，對其表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤病理特征關(guān)系展開分析顯示，KPS 評分、WHO 分級(jí)與其表達(dá)水平間關(guān)系密切，而腫瘤的直徑、位置、患者性別、年齡等與之無關(guān)。最后經(jīng)隨訪結(jié)果可見，對比5 年生存率，高表達(dá)組較低表達(dá)組高，表明腫瘤組織內(nèi)miR-211 低表達(dá)可作為獨(dú)立因素，用于患者預(yù)后的評價(jià)。

綜上所述，在膠質(zhì)瘤組織中miR-211 為低表達(dá)，其表達(dá)水平直接關(guān)系到患者預(yù)后，可作為獨(dú)立危險(xiǎn)因素，用于預(yù)后的預(yù)測。