李姣清， 黃勛和， 余史婷， 翁茁先，2， 張寶菁， 李威娜

（1.廣東省山區(qū)特色農(nóng)業(yè)資源保護(hù)與精準(zhǔn)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省五華三黃雞科技創(chuàng)新中心，嘉應(yīng)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，廣東梅州514015；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410128）

抗生素在一定濃度下能抑制和殺死細(xì)菌類微生物，抑制腸道有害菌繁殖，降低發(fā)病率，但不規(guī)范的使用也會(huì)導(dǎo)致病原微生物產(chǎn)生耐藥性，引發(fā)腸道菌群失衡，且其經(jīng)過消化吸收后會(huì)隨血液分布到機(jī)體的各個(gè)器官組織，使機(jī)體的免疫能力下降，影響其健康生長(zhǎng)（方磊涵，2018；郭鵬等，2017）。 抗生素長(zhǎng)期使用還會(huì)讓其中的有害成分沉積在畜禽體內(nèi)，嚴(yán)重危害到人體健康，世界各國分別在不同時(shí)期限制或禁止抗生素在動(dòng)物飼料中的應(yīng)用。 因此，尋找安全有效的抗生素替代品成為目前迫在眉睫的問題。 中草藥存在于大自然中，是我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)預(yù)防疾病所用的藥物，既能抗病保健，提高生產(chǎn)性能，同時(shí)又具有低毒副作用、不易產(chǎn)生耐藥性、無藥物殘留等優(yōu)點(diǎn)，是一種理想的取代抗生素的綠色飼料添加劑（魏恒，2018；王清峰，2018）。 因此本試驗(yàn)擬篩選出合適的中草藥復(fù)方制劑作為飼料添加劑，探索其對(duì)三黃雞育雛階段血液生化指標(biāo)和免疫功能的影響，確定中草藥添加劑的最佳配伍組合和最佳劑量，為其作為有效的抗生素替代品應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)提供理論依據(jù)和實(shí)踐參考。

1 材料與方法

1.1 中草藥制劑的制備 試驗(yàn)用復(fù)方中草藥以抗菌消炎、理氣消食、益脾健胃及增強(qiáng)免疫為組方原則配制。 中草藥添加劑主要成分為黃芪、人參、土炒白術(shù)、當(dāng)歸、陳皮、山楂、甘草、柴胡、熟地、玄參、生地等，購于梅州市中醫(yī)院醫(yī)院。 采用水煎法提取中草藥有效成分，稱取藥材10.0 g，加10 倍量蒸餾水浸泡30 min， 加熱至沸騰文火保持30 min，用六層紗布過濾，藥渣再加8 倍量蒸餾水，加熱至沸騰文火保持30 min，六層紗布過濾，合并2次濾液， 濾液經(jīng)80 ℃恒溫水浴濃縮至原生藥量1.0 g/mL，115 ℃高壓滅菌20 min，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組及管理 健康的1 日齡五華三黃雞（150 羽），由廣東客家黃畜牧有限公司提供?；A(chǔ)日糧適應(yīng)性飼喂至7 d 后隨機(jī)分成5 組，每組3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10 羽。 試驗(yàn)期共42 d。Ⅰ組為空白對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；Ⅱ組為抗生素組，在基礎(chǔ)日糧中按阿莫西林粉劑使用說明添加0.06%的量， 阿莫西林可溶性粉購自河南健恒動(dòng)物藥業(yè)有限公司； Ⅲ、 Ⅳ、 Ⅴ組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.7、1.0、1.3 g/kg 中草藥制劑。舍內(nèi)籠養(yǎng)，自由采食、飲水，自然通風(fēng)光照，防疫程序按常規(guī)進(jìn)行，1 日齡馬立克疫苗，7 日齡新城疫滴鼻，21 日齡肌肉注射新城疫油乳劑滅活苗。 基礎(chǔ)日糧組成分0 ～ 21 d和22 ～ 42 d 兩階段，參照我國肉雞標(biāo)準(zhǔn)（李連任，2013）配制，基礎(chǔ)日糧組成見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 樣品采集及指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定 試驗(yàn)期間每天早上8:30對(duì)試驗(yàn)雞進(jìn)行空腹稱重，記錄增重情況。

1.3.2 血液生化指標(biāo)的測(cè)定 三黃雞42 日齡時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取3 只雞，于翅靜脈采血，離心后吸取上層血清于4 ℃保存， 通過全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行血液指標(biāo)檢測(cè)。

1.3.3 免疫器官指數(shù)的測(cè)定 三黃雞42 日齡時(shí)，每個(gè)重復(fù)選取3 只接近該重復(fù)平均體重的三黃雞屠宰，分離脾臟、胸腺、法氏囊，用濾紙吸干血水后稱鮮重，計(jì)算其免疫器官指數(shù)：

免疫器官指數(shù)=免疫器官質(zhì)量 （g）/活體質(zhì)量（kg）。

1.3.4 血清中球蛋白的測(cè)定 三黃雞42 日齡時(shí)，每重復(fù)組選取3 只接近該重復(fù)平均體重的三黃雞雞，通過翅靜脈采血2 mL 于離心管中，并分離血清，置-20 ℃保存，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)定血清中免疫球蛋白A （IgA） 、 免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM ） 含量，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4 數(shù)據(jù)處理 本試驗(yàn)所有數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 22.0 進(jìn)行單因素方差分析和Duncan’s 法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤“表示，以P < 0.05 為差異顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 中草藥飼料添加劑對(duì)三黃雞體重的影響由表2 可知， 中草藥Ⅳ組三黃雞平均日增重較對(duì)照組比提高了11.94%，差異顯著（P < 0.05），同時(shí)也明顯優(yōu)于抗生素處理（P < 0.05）；中草藥處理Ⅳ組的三黃雞成活率高于對(duì)照組， 但與抗生素組相比差異不明顯（P > 0.05），由此可知，基礎(chǔ)日糧中添加適當(dāng)比例的復(fù)方中草藥制劑在三黃雞生長(zhǎng)上可以達(dá)到和抗生素同樣的促生長(zhǎng)效果。

2.2 中草藥飼料添加劑對(duì)三黃雞血液生化指標(biāo)的影響 由表3 可知， 中草藥飼料添加劑可以有效增加三黃雞血液中總蛋白和白蛋白的含量，其中試驗(yàn)Ⅳ組較對(duì)照組和抗生素組相比血清中總蛋白分別增加15.3%、13.5%，差異顯著（P < 0.05）；試驗(yàn)Ⅳ組血清白蛋白含量與對(duì)照組比顯著提高17.6%（P ＜0.05）； 在膽固醇和甘油三酯方面，試驗(yàn)Ⅳ組顯著低于其他處理組（P < 0.05）；此外試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，反映肝功能的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶含量差異不明顯（P ＞0.05）。

表2 中草藥飼料添加劑對(duì)三黃雞體重的影響

表3 中草藥飼料添加劑對(duì)三黃雞血液生化指標(biāo)的影響

2.3 中草藥飼料添加劑對(duì)三黃雞免疫器官指數(shù)的影響 由表4 可知， 在三黃雞的基礎(chǔ)日糧中添加不同比例的復(fù)方中草藥制劑可影響其免疫器官的發(fā)育， 其中復(fù)方中草藥添加Ⅳ組的胸腺和法氏囊發(fā)育指數(shù)與對(duì)照組和抗生素相比顯著提高（P <0.05）；試驗(yàn)Ⅳ組脾臟發(fā)育指數(shù)和法氏囊發(fā)育指數(shù)與對(duì)照組相比， 分別提高了11.31%、12.77%（P <0.05）；試驗(yàn)結(jié)果顯示，抗生素對(duì)胸腺、脾臟、法氏囊的發(fā)育稍有抑制作用， 但與對(duì)照組相比差異不明顯（P > 0.05）。

表4 中草藥飼料添加劑對(duì)三黃雞免疫器官指數(shù)的影響

2.4 中草藥飼料添加劑對(duì)三黃雞血液非特異性抗體水平的影響 由表5 可知， 復(fù)方中草藥添加Ⅳ組血液中IgG 含量顯著高于對(duì)照組和抗生素組，分別提高了11.03%、16.05%；復(fù)方中草藥添加Ⅳ組血液中IgM 含量較對(duì)照組和抗生素組分別提高了17.39%、18.42%； 但血液中IgA 含量在試驗(yàn)期間各組含量變化無明顯差異（P > 0.05）。 由此可見， 本試驗(yàn)的復(fù)方中草藥制劑可以有效提高三黃雞的非特異免疫能力。

表5 中草藥飼料添加劑對(duì)三黃雞血液中非特異性抗體水平的影響 g/L

3 討論

3.1 復(fù)方中草藥對(duì)三黃雞生長(zhǎng)性能的影響 中草藥含有糖類、皂苷類、生物堿、揮發(fā)性物質(zhì)和有機(jī)酸等多種生物活性成分， 在畜禽生產(chǎn)中應(yīng)用不僅可以預(yù)防和治療疾病、 增強(qiáng)機(jī)體免疫力和抗病力，還可以補(bǔ)充動(dòng)物所需營養(yǎng)物質(zhì)、提高食欲、促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)。本試驗(yàn)中，復(fù)方中草制劑組方中的黃芪具有補(bǔ)氣固表的功效，人參可以補(bǔ)脾益肺，土炒白術(shù)能健脾益氣，陳皮可理氣健脾，柴胡可解熱抗炎；玄參能解毒散結(jié)，生地和甘草可清熱解毒，山楂歸脾、胃和肝經(jīng)，具有消食散瘀、行氣散結(jié)和補(bǔ)脾消積的功效， 上述的中草藥配伍為“補(bǔ)中益氣湯”，達(dá)到“與陰求陽”的功效。 李姣清等（2020）試驗(yàn)研究結(jié)果表明， 復(fù)方中草藥添加到黃羽雞基礎(chǔ)日糧中與對(duì)照組相比可以顯著增加黃羽肉雞體重，降低料重比；錫建中等（2015）試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方中草藥添加到肉雛雞飼料中可以顯著促進(jìn)雞的生長(zhǎng)。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，在三黃雞日糧中添加不同濃度的上述復(fù)方中草藥制劑可顯著提高雞生長(zhǎng)性能，降低死亡率。

3.2 復(fù)方中草藥對(duì)三黃雞血清生化指標(biāo)和肝功能的影響 血液是動(dòng)物機(jī)體內(nèi)環(huán)境的重要組成部分，其各項(xiàng)指標(biāo)與機(jī)體健康狀況密切相關(guān)，血液各種化合物含量如果發(fā)生異常變化就會(huì)導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)相應(yīng)的病癥。雷曉軍等（2010）試驗(yàn)結(jié)果表明，添加了復(fù)方中草藥制劑的日糧能提高肉仔雞血清總蛋白和白蛋白的含量， 表明肉雞對(duì)物質(zhì)消化吸收的能力增強(qiáng)；于翠平等（2014）報(bào)道，添加中草藥飼料添加劑的日糧可極顯著降低肉雞的膽固醇以及甘油三酯的含量， 從而有利于維持機(jī)體脂類的正常代謝。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，基礎(chǔ)日糧中添加復(fù)方中草藥制劑能不同程度地提高三黃雞血清中總蛋白和白蛋白的含量，降低膽固醇和甘油三酯含量，從而說明該復(fù)方中草藥制劑可有效促進(jìn)三黃雞的生長(zhǎng)。 肝臟是動(dòng)物的重要器官，不僅對(duì)動(dòng)物的消化、代謝、排泄和血液循環(huán)有著密切的關(guān)系，而且是動(dòng)物重要的解毒器官，谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶通常是作為衡量肝功能的有效指標(biāo)， 當(dāng)毒物或藥物性肝損害時(shí)， 轉(zhuǎn)氨酶活力往往顯著增高。 本試驗(yàn)顯示， 雞血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的含量與對(duì)照組相比均無明顯差異（P ＞0.05） ，說明在日糧中添加本試驗(yàn)的復(fù)方中草藥制劑對(duì)雞肝功能無不良影響。

3.3 復(fù)方中草藥制劑對(duì)三黃雞免疫功能的影響胸腺、脾臟、法氏囊是雞重要的免疫器官，其器官發(fā)育狀態(tài)可在一定程度上反映機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱，免疫器官相對(duì)質(zhì)量的增加，說明機(jī)體細(xì)胞的免疫功能增強(qiáng)。方磊涵等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，中草藥的復(fù)方多糖對(duì)肉仔雞的免疫器官發(fā)育指數(shù)有明顯的提高；石念進(jìn)等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，中草藥復(fù)方（黃芪、黨參、茯苓等組成）組雞的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)顯著高于對(duì)照組， 較好地促進(jìn)了雛雞的免疫器官發(fā)育，有力地增強(qiáng)其免疫力。 本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加不同濃度的復(fù)方中草藥制劑能夠提高三黃雞各免疫器官的相對(duì)質(zhì)量，以試驗(yàn)Ⅳ組（1.0 g/kg復(fù)方中草藥制劑）的效果最好。

免疫球蛋白是機(jī)體所產(chǎn)生的具有抗體活性的一類蛋白， 能與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。 賈玉剛等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，中草藥飼料添加劑可以顯著提高藏雞血液中IgG 和IgM 的含量， 起到較好的免疫增強(qiáng)作用；Cheng 等（2011）研究表明，飼喂黃芪麻杏石甘湯可以顯著提高被支氣管炎病毒感染的肉雞血液中l(wèi)gA 的水平，提高機(jī)體的抗病力。本試驗(yàn)結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，飼料中添加復(fù)方中草藥制劑可以顯著提高三黃雞血液中IgG 和IgM含量， 這表明本試驗(yàn)中的中草藥復(fù)方制劑具有增強(qiáng)機(jī)體免疫能力的功效。

4 小結(jié)

飼料中添加復(fù)方中草藥添加劑可以促進(jìn)三黃雞增質(zhì)量，降低集約化舍飼的死亡率，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，達(dá)到或接近抗生素的添加效果，具有良好的替抗前景。