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        不同產(chǎn)地不同采集期滇桂艾納香中總黃酮及原兒茶酸的含量測定

        2021-05-22 08:58:36周江煜侯小濤韋宏官戴航
        廣西中醫(yī)藥 2021年2期
        關(guān)鍵詞:艾納香原兒茶酸藥材

        周江煜,侯小濤,3,韋宏官,戴航

        (1.廣西中醫(yī)藥大學(xué),廣西南寧530200;2.廣西萬壽堂藥業(yè)有限公司,廣西南寧530219;3.廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西南寧530200)

        滇桂艾納香為菊科植物假東風(fēng)草Blumea riparia(Bl.)DC.的干燥全草,主要產(chǎn)于廣西西南部和云南東南部[1],為廣西壯瑤族民間草藥。其味淡,性平,具有活血化瘀、止血調(diào)經(jīng)的功效[2-4],在廣西尤其是百色地區(qū)有較長的使用歷史,有較好的開發(fā)利用前景。滇桂艾納香的主要化學(xué)成分有黃酮類、原兒茶酸、原兒茶醛、綠原酸、咖啡酸等[5-8]。本研究分別采用紫外分光光度法和高效液相色譜法對不同產(chǎn)地不同收集期滇桂艾納香的總黃酮及原兒茶酸含量進(jìn)行分析,為滇桂艾納香的采收和進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

        1 實(shí)驗(yàn)材料

        1.1 藥材滇桂艾納香藥材采自廣西百色和河池,由廣西中醫(yī)藥大學(xué)郭敏副教授鑒定為菊科植物滇桂艾納香Blumea riparia(Bl.)DC.的干燥全草。

        1.2 儀器島津UV-2550紫外分光光度計(jì);Agilent 1100高效液相色譜儀,包括G1311A系列四元梯度泵,Agilent VWD檢測器,手動(dòng)進(jìn)樣器,柱溫箱,Agilent 1100色譜工作站;SB 2200型超聲波清洗儀(上海);賽多利斯BP211D電子天平(德國)。

        1.3 試劑蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號(hào):100080-200306,供含量測定用);原兒茶酸對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號(hào):110809-200503,供含量測定用)。亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、甲醇、乙醇均為分析純。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 總黃酮的含量測定

        2.1.1 對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品23.16 mg,加60%乙醇配制為100 ml溶液,置水浴中微熱使溶解,放冷,制得濃度為0.115 8 mg/ml的蘆丁對照品溶液。

        2.1.2 供試品溶液的制備將滇桂艾納香藥材干燥、粉粹,過3號(hào)篩,準(zhǔn)確稱取粉末各約0.5 g至錐形瓶中,加50%乙醇50 ml,稱定重量。超聲提取45 min,冷卻,補(bǔ)重,搖勻,過濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。

        2.1.3 測定波長的選擇取蘆丁對照品溶液0.5 ml,置于10 ml容量瓶中,用30%乙醇補(bǔ)充至5 ml,加入0.3 ml的5%NaNO2溶 液,放 置5 min;加 入0.3 ml的10%Al(NO3)3溶液,放置6 min;加入2.0 ml的4%NaOH溶液,混勻后用30%乙醇稀釋至刻度,靜置10 min。在紫外分光光度計(jì)下進(jìn)行全波長掃描,在510 nm處有最大吸收值,因此確定總黃酮的測定波長為510 nm。

        2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取蘆丁對照品溶液0.0 ml、1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml,分別置于10 ml量瓶中,各加30%乙醇使成5.0 ml,精密加入0.3 ml亞硝酸鈉溶液(1→20),搖勻,放置6 min;再加入0.3 ml硝酸鋁溶液(1→10),搖勻,放置6 min;加入氫氧化鈉溶液4.0 ml,再加水至刻度,搖勻,放置15 min。在510 nm波長處測定吸收度,以吸收度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:Y=0.012 3X-0.001 2(r=0.999 9),表明線性關(guān)系良好。

        2.1.5 精密度試驗(yàn)取10月份那坡縣采收的滇桂艾納香藥材,按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液,再按“2.1.3”項(xiàng)下方法處理,于510 nm處連續(xù)5次測定吸光度,代入公式計(jì)算總黃酮含量,結(jié)果RSD為1.8%(n=5),表明該法精密度良好。

        2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批藥材6份,按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液,再按“2.1.3”項(xiàng)下方法分別測定吸光度,代入公式計(jì)算總黃酮含量,結(jié)果RSD=1.9%(n=6),表明方法的重復(fù)性良好。

        2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批藥材,按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液,再按“2.1.3”項(xiàng)下方法,在3 h內(nèi)每隔30 min測定吸光度,代入公式計(jì)算總黃酮含量,結(jié)果RSD=1.2%(n=6),表明樣品在3 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

        2.1.8 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的滇桂艾納香藥材,加入一定量對照品,按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液,再按“2.1.3”項(xiàng)下方法處理后測定吸光度,計(jì)算加樣回收率,結(jié)果總黃酮的平均回收率為101.8%,RSD=1.4%(n=6),表明加樣回收良好,結(jié)果見表1。

        表1 總黃酮加樣回收試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

        2.1.9 總黃酮含量測定取不同產(chǎn)地不同采集期的滇桂艾納香藥材,分別按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液。精確吸取0.5 ml樣品溶液,按“2.1.3”項(xiàng)下方法依次進(jìn)行測定。將測得的吸光度代入回歸方程計(jì)算出總黃酮含量,結(jié)果見表2。

        表2 不同產(chǎn)地不同采集期滇桂艾納香藥材總黃酮的含量測定結(jié)果 (mg/g)

        2.2原兒茶酸的含量測定參考文獻(xiàn)[9-11]的方法進(jìn)行測定。

        2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取原兒茶酸對照品12.51 mg,加甲醇配制成50 ml原兒茶酸對照品溶液,濃度為0.250 2 mg/ml。

        2.2.2 供試品溶液的制備將滇桂艾納香藥材干燥、粉粹,過3號(hào)篩,取粉末各約0.5 g至錐形瓶中,加50%的乙醇50 ml,稱定重量。超聲提取45 min,冷卻,補(bǔ)足重量,搖勻,過濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。

        2.2.3 色譜條件色譜柱:Agilent Hypersil ODS Cl8柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇-水-冰醋酸(10∶89∶1);檢測波長:256 nm;柱溫:室溫;經(jīng)測試,樣品峰分離度>1.5,原兒茶酸理論塔板數(shù)>3 000。

        2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取12.51 mg原兒茶酸對照品,加甲醇配制成50 ml的對照品貯備液。精密量取上述對照品貯備液1.0 ml,3.0 ml,5.0 ml,10 ml,25 ml,加甲醇分別配制成25 ml對照品溶液(濃度分別為10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、250μg/ml),在“2.2.3”項(xiàng)下的色譜條件下,分別進(jìn)樣5μl進(jìn)行測定。以原兒茶酸對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X),峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:Y=5.849 9×103X+48.393 0(r=0.999 4)。結(jié)果表明:進(jìn)樣量在0.05~1.30μg范圍內(nèi),原兒茶酸進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

        2.2.5 精密度試驗(yàn)取10月份那坡縣采收的滇桂艾納香藥材,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液后進(jìn)行測定,重復(fù)進(jìn)樣5次,記錄原兒茶酸峰面積比值,結(jié)果原兒茶酸的RSD值為1.8%(n=5),表明儀器的精密度良好。

        2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批滇桂艾納香藥材5份,精密稱定,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液后進(jìn)樣分析,結(jié)果原兒茶酸RSD=1.8%(n=5);表明方法的重復(fù)性較好。

        2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批滇桂艾納香藥材樣品溶液,在放置0 h,2 h,5 h,8 h,10 h,12 h后分別進(jìn)樣分析,結(jié)果原兒茶酸的RSD為1.9%(n=6),表明樣品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.2.8 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的滇桂艾納香藥材樣品,加入一定量對照品,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液后進(jìn)樣分析,測得原兒茶酸的平均回收率為98.5%,RSD=2.1%(n=6),表明加樣回收良好,結(jié)果見表3。

        表3 原兒茶酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

        2.2.9 含量測定取不同產(chǎn)地不同采集期的滇桂艾納香,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液。分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各5μl,注入高效液相色譜儀,按“2.2.3”項(xiàng)下方法色譜條件進(jìn)行測定,以峰面積代入回歸方程計(jì)算出原兒茶酸含量,結(jié)果見表4。

        表4 不同產(chǎn)地不同采集期滇桂艾納香中原兒茶酸的含量測定結(jié)果 (μg/g)

        3 討論

        本實(shí)驗(yàn)對廣西8個(gè)不同產(chǎn)地不同采集期滇桂艾納香總黃酮、原兒茶酸進(jìn)行含量測定,并進(jìn)行了方法學(xué)考察。對比表2、表4中的數(shù)據(jù),滇桂艾納香不同產(chǎn)地總黃酮、原兒茶酸的含量在不同月份差異較大:10月份百色那坡縣采收的滇桂艾納香總黃酮的含量最高,11月百色田林縣采收的滇桂艾納香原兒茶酸含量最高。

        綜合考慮藥材中總黃酮、原兒茶酸的含量,以那坡縣和田林縣10月、11月份滇桂艾納香中含量最高。其他生長月份雖然有某種有效成分含量較高,但其他有效成分含量卻偏低。因此,滇桂艾納香藥材的最佳產(chǎn)地為百色那坡縣和田林縣,最佳采收期為10月、11月。本文的研究可為進(jìn)一步開發(fā)利用滇桂艾納香提供依據(jù)。

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