吳 蓉 施冬梅 張偉芳

珠海市中心血站(珠海 519000)

臨床上溶血性輸血不良反應(yīng)最重要原因之一是ABO鑒定錯誤[1]。供血者血型鑒定正確是確保臨床輸血安全的基礎(chǔ)。隨著血型檢測標準化要求的不斷提高，國內(nèi)采供血機構(gòu)普遍利用全自動血型分析儀自動化程度高、高效率、節(jié)省人力并可以保存原始數(shù)據(jù)等優(yōu)點，對無償獻血者樣本進行批量檢測從而有力的保證了臨床用血的需求。但在實際工作中會遇到一些特殊的樣本，如結(jié)果低于判定規(guī)則時儀器不能正確判定[2]，出現(xiàn)ABO血型正反不一致，此時極易發(fā)出錯誤報告。無償獻血者血型鑒定的準確性[3]特別是ABO血型正反不一致的疑難血型的鑒定是臨床輸血安全的關(guān)鍵問題。本研究通過分析2019年6月1日—2020年11月30日本血站的無償獻血者樣本血型鑒定結(jié)果，以探討無償獻血者ABO血型正反定型結(jié)果不一致原因分析。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年6月1日—2020年11月30日在珠海市中心血站捐獻的44 808例無償獻血者血液樣本為研究對象。所有無償獻血者均符合衛(wèi)生部《獻血者健康檢查標準》要求，并簽署知情通知書。嚴格按照實驗室現(xiàn)行的SOP操作要求進行ABO血型正定型和反定型檢測。

1.2 主要儀器與試劑

主要檢測儀器:Metis150全自動血型分析儀由深圳市愛康生物科技有限公司提供。低溫離心機由賽默飛世爾科技有限公司提供。主要試劑：抗A、抗A1、抗B、抗H、抗D(IgM)檢測試劑由上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供；ABO反定型紅細胞試劑由長春博德生物技術(shù)有限公司提供；不規(guī)則抗體篩查紅細胞試劑和微柱凝膠卡均由達亞美有限責(zé)任公司提供；抗AB檢測試劑由江蘇中濟萬泰生物醫(yī)藥有限公司提供；BASO放散液和凝聚胺試劑均由珠海貝索生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 初篩方法 使用Metis150全自動血型分型儀自動完成加樣，孵育，離心，震蕩，讀板，ABO血型結(jié)果判讀。如果ABO血型正反定型結(jié)果一致，則為檢測最終判讀結(jié)果。如出現(xiàn)ABO血型正反定型結(jié)果不一致，則采用鹽水介質(zhì)試管法復(fù)檢，復(fù)檢結(jié)果正反定型一致，則為最終判讀結(jié)果。試管法仍然顯示正反血型結(jié)果不一致的疑難血型樣本則送血型參比實驗室進一步確認。

1.3.2 血型參比實驗室確認 嚴格按照各試劑說明書操作要求進行：①試管法或微柱凝膠血型卡法增加被檢紅細胞分別與抗A1、抗AB、抗H試劑反應(yīng)；②直接抗人球蛋白試驗確定被檢紅細胞致敏狀態(tài)；③不規(guī)則抗體篩查及特異性鑒定；④冷凝集自身抗體特異性和抗體效價測定；⑤吸收放散試驗確定紅細胞的血型抗原及其強度。

2 結(jié) 果

2.1 一般結(jié)果

44 808例樣本出現(xiàn)ABO血型正反定型結(jié)果不一致134例，發(fā)生率為0.30%。其中因嚴重脂血、弱凝集導(dǎo)致儀器判讀錯誤4例(2.98%)；因吸取紅細胞或血漿異常加樣量不準確25例(18.66%)；經(jīng)鹽水介質(zhì)試管法復(fù)檢確認65例(48.51%)；血型參比實驗室確認40例(29.85%)。經(jīng)參比實驗室確認導(dǎo)致ABO正反定型不一致的原因是抗體缺失或者減少、不規(guī)則抗體、亞型、抗原減少、冷凝集素分別為22例(16.42%)、8例(5.97%)、6例(4.48%)、2例(1.49%)、2例(1.49%)。見表1。

表1 134例ABO血型初篩正反不一致的原因

2.2 ABO血型初篩正反不一致樣本處理方法

根據(jù)ABO血型初篩正反不一致的不同原因，在初篩實驗室通過人工判讀、糾正試劑或血漿量、手工試管法復(fù)核確定ABO血型各4例、25例、65例。血型參比實驗室通過延長反應(yīng)時間或改變反應(yīng)溫度確定因抗體缺失或減少22例、冷凝集素2例；增加抗A1、抗AB、抗H血清和吸收放散試驗確定亞型6例、抗原減少2例；洗滌自身紅細胞吸收放散后定型、吸收后血清反定型確定不規(guī)則抗體8例。見表2。

表2ABO血型初篩正反不一致樣本處理方法

2.3 40例血型參比實驗ABO血型血清學(xué)檢測結(jié)果

40例血型參比實驗ABO血型血清學(xué)確認結(jié)果為O型21例(52.50%)、A型8例(20%)、B型7例(17.5%)、AB型4例(10.00%)。見表3。

表340例血型參比實驗ABO血型血清學(xué)檢測結(jié)果

3 討 論

出現(xiàn)ABO血型正反不一致的原因有技術(shù)性的問題或紅細胞和血清本身的問題[4]。目前鑒定血型的方法有經(jīng)典試管法、微量板法、微柱凝膠血型卡法等血清學(xué)方法[5]。分子生物學(xué)方法因?qū)嶒灄l件要求高，在國內(nèi)采供血機構(gòu)尚未普及。試管法是鑒定ABO血型的經(jīng)典方法[6]，其操作便捷、準確度可靠、但操作過程不易自動化、檢結(jié)果不易保存等缺點限制了其在采供血機構(gòu)應(yīng)用。本研究采用U形微量板法初篩檢測44 808例無償獻血者血液樣本，ABO血型正反不一致發(fā)生率為0.30%，顯著低于侯瑞琴[7]曾報道26 923例住院患者發(fā)生率1.6%，其差異可能與研究對象不同相關(guān)。無償獻血人群一般為18～55周歲的健康人群，基本可以排除因年齡、疾病(白血病、肝臟疾病、結(jié)核病等)以及臨床治療因素對血型鑒定的影響[8]。本研究自2019年6月開始使用全自動血性分析儀，在使用初期多發(fā)生因樣本管放置高度錯誤導(dǎo)致加樣量不準確，或者樣本中有凝塊，或者弱凝集時細胞扣太小儀器判讀錯等現(xiàn)象從而導(dǎo)致ABO血型正反不一致，這種情況一般通過經(jīng)典的試管法復(fù)查可以鑒定血型。經(jīng)過實驗室不斷糾正實驗前、實驗中的不規(guī)范操作，后期ABO血型正反不一致發(fā)生率明顯下降。對儀器、試劑、樣本及操作過程等關(guān)鍵質(zhì)量控制點有效監(jiān)控是減少ABO血型正反不一致發(fā)生的重要措施。故平常工作中應(yīng)高度警惕試驗操作原因：①注意樣本抗凝是否充分，樣本有無被污染，有無嚴重脂血溶血等情況；②試劑是否在有效期內(nèi)使用，試劑的保存溫度是否正確；③儀器是否進行正常的保養(yǎng)和維護，加樣針感應(yīng)位置是否恰當(dāng)，加樣針是否定期進行疏通；④儀器判讀是否正確，溶血是否誤判為陰性,細胞扣減小、弱凝集或混合凝集是否漏檢；⑤是否嚴格遵循雙人核對。上述原因均可在初篩實驗室糾正并正確鑒定ABO血型。

對于因被檢紅細胞或血清自身原因影響的疑難血型鑒定，如抗體缺失或者減少、抗原減少、不規(guī)則抗體、亞型、冷凝集素等，需要血型參比實驗室補充一些特殊試驗鑒定ABO血型。本研究中血型參比實驗室確認結(jié)果中O型21例(52.50%)>A型8例(20%)>B型7例(17.5%)>AB型4例(10.00%)，這與血型分布特征相符合[9]。本研究40例疑難血型樣本中最主要原因是抗體減弱(22例，55%)：通過增加血清量、延長反應(yīng)時間、放置4 ℃冰箱一段時間、多次離心等方法確定。其次為不規(guī)則抗體陽性(8例,20%)。存在不規(guī)則抗體陽性的血液制品嚴重影響到輸血安全，這也是臨床退血的最主要的原因[10]。另外因抗原減弱(2例，5%)、亞型(6例，15%)、冷凝集素(2例，5%)。這些特殊無償獻血者，血站采取屏蔽限制獻血并詳細告知ABO血型檢測結(jié)果。其中6例亞型無償獻血者單獨建立健康檔案存入稀有血型數(shù)據(jù)庫，專供臨床亞型同型輸血，以減少輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。

綜上所述，全自動化血型儀在完成常規(guī)大量的血型檢測工作有一定的優(yōu)勢，它實現(xiàn)了從樣本條碼掃描、加樣、檢測到結(jié)果判讀及數(shù)據(jù)保存的完全自動化處理，不僅極大提高了檢測的工作效率，也減少了人為因素對檢測結(jié)果的干擾[11]。但是遇到ABO血型正反定型結(jié)果不一致的時候，還是需要實驗室工作人員認真分析原因,再適當(dāng)增加補充試驗進一步確認血型。其中減少不規(guī)則抗體對試驗結(jié)果的影響，防止弱亞型的漏檢尤為重要。