李延卿，張 岱，張旭冉，顧亞嬌，任偉宏

(1.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南鄭州 450000；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院脾胃肝膽科，河南鄭州 450000)

胃癌多見于老年群體，其發(fā)生、發(fā)展是多因素、多步驟、多階段和多基因改變的過程，幽門螺旋桿菌感染(helicobacter pylori，Hp)感染參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展[1-2]。胃癌并發(fā)Hp感染會(huì)增加治療難度，給患者預(yù)后帶來嚴(yán)重不利影響[3]。因此，抗Hp治療越來越受臨床重視。新近研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中扮演重要角色，其表達(dá)增加可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展[4]。核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)所調(diào)控的基因在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中均有參與，也會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[5]。此外，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，隨著Hp感染的加重，熱休克蛋白60(heat shock protein 60，HSP60)表達(dá)水平明顯升高[6]。鑒于此，本研究首次綜合分析老年胃癌患者TGF-β1、NF-κB、HSP60水平與Hp感染的相關(guān)性，旨在為胃癌的臨床治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年2月至2019年8月我院92例老年胃癌患者作為研究對(duì)象，其中男58例，女34例；年齡60～83(71.57±5.71)歲；腫瘤直徑2～9(5.42±1.70)cm；分化程度：高分化10例，中分化25例，低分化57例；浸潤(rùn)深度：黏膜下層33例，漿膜層59例；TNM分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期28例，Ⅲ期30例，Ⅳ期25例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者70例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例；Hp感染患者77例，未感染患者15例。分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移判定均參照相關(guān)臨床標(biāo)準(zhǔn)[7]進(jìn)行。Hp感染根據(jù)13C檢測(cè)結(jié)果判定[8]。

1.2 選例標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：符合胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，經(jīng)病理診斷確診；首次確診；自主行為能力良好；無溝通交流障礙；年齡≥60歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他原發(fā)性惡性腫瘤者；伴有其他嚴(yán)重消化系統(tǒng)疾病者；嚴(yán)重心腦血管疾病患者；肺、肝、腎功能嚴(yán)重障礙者；血液系統(tǒng)疾病患者；檢測(cè)前行放、化療治療者。

1.3 方法實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)方法：入組當(dāng)天采集所有患者外周靜脈血標(biāo)本5 mL，以3 500 r/min轉(zhuǎn)速離心處理5 min后取血清，置于-70 ℃冷凍室內(nèi)待檢。由專業(yè)檢測(cè)人員采用上海永創(chuàng)醫(yī)療器械有限公司的酶標(biāo)儀[批準(zhǔn)文號(hào)：滬食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2013第2400984號(hào)]，以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平，試劑盒購(gòu)自深圳市亞輝龍生物科技有限公司[批準(zhǔn)文號(hào)：粵食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2009第2400353號(hào)]，檢測(cè)操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

Hp感染程度評(píng)估方法：根據(jù)Hp的半定量分析法進(jìn)行評(píng)估，采集胃黏膜組織標(biāo)本，采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%中性甲醛固定液固定，室溫下靜置6 h后常規(guī)行石蠟包埋、切片(厚度3 μm)，采用樹膠封固后進(jìn)行染色處理，采用400倍高倍鏡觀察Hp感染程度。無：組織切片染色后未見Hp；Ⅰ級(jí)：可見少量Hp，Hp分布<標(biāo)本全長(zhǎng)的1/3；Ⅱ級(jí)：Hp分布在標(biāo)本全長(zhǎng)的1/3～2/3之間；Ⅲ級(jí)：Hp分布>標(biāo)本全長(zhǎng)的2/3[10]。

2 結(jié)果

2.1 不同臨床病理特征患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平比較老年胃癌患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平與腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。見表1。

表1 不同臨床病理特征患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平比較

2.2 不同感染程度Hp感染患者與未感染患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平比較不同Hp感染程度患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平均高于未感染患者(P均<0.05)，且隨Hp感染程度的增加，血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平也隨之升高。見表2。

表2 不同感染程度Hp感染與未感染患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平比較

2.3 血清TGF-β1、NF-κB、HSP60與老年胃癌患者Hp感染的關(guān)系Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，隨著血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平升高，老年胃癌患者Hp感染風(fēng)險(xiǎn)逐漸升高(P均<0.05)。見表3。

表3 血清TGF-β1、NF-κB、HSP60與老年胃癌患者Hp感染的關(guān)系

2.4 血清TGF-β1、NF-κB、HSP60對(duì)老年胃癌患者Hp感染的預(yù)測(cè)價(jià)值繪制TGF-β1、NF-κB、HSP60預(yù)測(cè)老年胃癌患者Hp感染的ROC曲線顯示，TGF-β1預(yù)測(cè)的曲線下面積(area under the curve，AUC)為0.805，95%CI為0.709～0.880，截?cái)嘀?24.22 ng/mL，對(duì)應(yīng)預(yù)測(cè)敏感性、特異性分別為67.53%、86.67%；NF-κB預(yù)測(cè)的AUC為0.761，95%CI為0.661～0.844，截?cái)嘀?31.46 u/L，對(duì)應(yīng)預(yù)測(cè)敏感性、特異性分別為59.74%、93.33%；HSP60預(yù)測(cè)的AUC為0.816，95%CI為0.722～0.890，截?cái)嘀?108.5 pg/mL，對(duì)應(yīng)預(yù)測(cè)敏感性、特異性分別為85.71%、73.33%；各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)的AUC為0.870，95%CI為0.784～0.931，最佳預(yù)測(cè)敏感性、特異性分別為71.43%、86.67%。見圖1、2。

圖1 各指標(biāo)單一指標(biāo)預(yù)測(cè)價(jià)值

圖2 各指標(biāo)聯(lián)合指標(biāo)預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

胃癌是我國(guó)發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，且隨著我國(guó)人口老齡化加劇，老年胃癌患者人數(shù)逐漸增加[11-12]。由于胃癌尚無特異性診斷與治療措施，尋找與胃癌密切相關(guān)的因子，對(duì)胃癌的早期診治、改善治療效果至關(guān)重要。

本研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1老年胃癌患者血清TGF-β1水平與腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在正相關(guān)關(guān)系，推測(cè)血清TGF-β1水平升高可促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展。李蓯[13]研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者血清中TGF-β1的表達(dá)明顯高于正常人。馬可等[14]文獻(xiàn)報(bào)道，胃癌患者腫瘤組織及外周血中TGF-β1水平均顯著高于健康群體，且與患者TNM分期、分化程度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在一定關(guān)系。TGF-β1是TGF-β 4個(gè)亞型中含量最高的一種，在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中，TGF-β1起著“雙刃劍”作用，在腫瘤發(fā)生早期主要發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用，但當(dāng)腫瘤病灶形成后，其表達(dá)增加可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[15]。相關(guān)研究[16]指出，胃癌患者Hp感染與TGF-β1具有相關(guān)性，可能通過TGF-β1而作用于TGF-β/Smads信號(hào)通路參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展。本研究還發(fā)現(xiàn)老年胃癌患者血清NF-κB、HSP60水平與腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，提示血清NF-κB、HSP60也可能參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展。NF-κB信號(hào)通路是調(diào)控炎癥反應(yīng)的重要信號(hào)通路，NF-κB可與免疫球蛋白κ輕鏈基因增強(qiáng)子κB序列特異性結(jié)合，也能對(duì)轉(zhuǎn)錄活性核蛋白因子進(jìn)行調(diào)節(jié)，其調(diào)控的基因在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中均有參與，也會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[17-18]。此外，Hp感染后，會(huì)損傷內(nèi)皮細(xì)胞，誘發(fā)惡性腫瘤發(fā)生，而NF-κB參與內(nèi)皮細(xì)胞損傷，Hp感染可通過NF-κB信號(hào)通路影響細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)錄、信號(hào)傳導(dǎo)，最終導(dǎo)致胃癌發(fā)生[19]。HSP60是HSP家族主要成員，具有促進(jìn)慢性炎癥、惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的作用[20]。Hp感染可刺激HSP60合成、釋放，HSP60表達(dá)增加可刺激機(jī)體炎癥反應(yīng)、腫瘤細(xì)胞活性增強(qiáng)，最終促進(jìn)胃癌的形成過程[21]。HSP60在淺表性胃炎、消化性潰瘍、萎縮性胃炎、不典型增生、胃癌組織中的表達(dá)陽性率呈逐漸增高趨勢(shì)，HSP60過度表達(dá)參與胃癌的整個(gè)形成過程[22]。因此，NF-κB、HSP60水平升高與胃癌患者臨床病理特征關(guān)系密切。

本研究通過Logistic回歸分析及相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平升高與老年胃癌患者Hp感染的發(fā)生密切，提示血清TGF-β1、NF-κB、HSP60的過度表達(dá)均與老年胃癌患者Hp感染發(fā)生密切相關(guān)?？赡苁荋p感染引起胃部炎性反應(yīng)及抑癌基因失活，導(dǎo)致各指標(biāo)表達(dá)水平增加。因此我們推測(cè)可通過血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平預(yù)測(cè)老年胃癌患者Hp感染發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，目前臨床鮮有此方面研究，我們首次通過ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，血清TGF-β1、NF-κB、HSP60在預(yù)測(cè)老年胃癌患者Hp感染中均具有一定價(jià)值，尤其是各指標(biāo)聯(lián)合能有效改善預(yù)測(cè)效能，可提高預(yù)測(cè)老年胃癌患者Hp感染的準(zhǔn)確性，有助于治療工作的開展。

綜上所述，老年胃癌患者血清TGF-β1、NF-κB、HSP60表達(dá)水平與患者腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征關(guān)系密切，且隨著血清TGF-β1、NF-κB、HSP60水平升高，老年胃癌患者Hp感染風(fēng)險(xiǎn)逐漸升高，檢測(cè)各指標(biāo)水平有助于預(yù)測(cè)Hp感染風(fēng)險(xiǎn)，從而指導(dǎo)醫(yī)生對(duì)Hp感染進(jìn)行預(yù)防和治療，具有較高臨床應(yīng)用價(jià)值。本研究創(chuàng)新之處在于明確了老年胃癌患者TGF-β1、NF-κB、HSP60表達(dá)與Hp感染的相關(guān)性，推測(cè)通過對(duì)Hp感染患者TGF-β1、NF-κB、HSP60表達(dá)進(jìn)行調(diào)控可能是胃癌防治新方向，有待未來研究中進(jìn)一步深入探討。