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        長(zhǎng)鏈非編碼RNA HAGLROS在食管鱗癌組織中的表達(dá)及其對(duì)食管鱗癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

        2021-05-21 06:32:48姚潔瓊任景麗胡桂明
        腫瘤基礎(chǔ)與臨床 2021年1期

        姚潔瓊,任景麗,胡桂明

        (鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科,河南 鄭州 450014)

        食管癌是具有高度侵襲性、高發(fā)病率和高致死率的消化道惡性腫瘤之一[1-2]。根據(jù)WHO數(shù)據(jù)顯示,食管癌是我國(guó)第六常見(jiàn)的惡性腫瘤,也是死亡人數(shù)第四多的腫瘤,僅2020年我國(guó)食管癌發(fā)病患者約為32.4萬(wàn),死亡人數(shù)達(dá)到30.1萬(wàn),嚴(yán)重威脅我國(guó)人民生命健康。與歐美國(guó)家好發(fā)的食管腺癌不同,我國(guó)食管癌患者的病理類(lèi)型大多數(shù)為食管鱗癌,且多數(shù)患者前期臨床癥狀不明顯,易出現(xiàn)漏診現(xiàn)象,錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī)[3-4]。然而,有關(guān)食管癌的研究迄今為止卻較為缺乏,人們對(duì)食管鱗癌的演變過(guò)程及變化機(jī)理仍不甚清楚。近年來(lái),食管癌的臨床治療研究進(jìn)展相對(duì)緩慢,目前治療方式以手術(shù)加新輔助放化療為主,許多食管鱗癌患者術(shù)后的預(yù)后沒(méi)有明顯改善,5 a生存率常常低于20%,大多數(shù)病例死于食管鱗癌細(xì)胞的復(fù)發(fā)和惡性轉(zhuǎn)移[5]。因此深入研究食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制對(duì)于提高食管鱗癌的診治率及改善患者預(yù)后具有重要的意義。

        長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)雖然不具有編碼蛋白質(zhì)的能力,但是可以以組織特異性或細(xì)胞特異性的方式作為調(diào)控分子,構(gòu)建體內(nèi)的RNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò),在細(xì)胞分化、胚胎發(fā)育、基因轉(zhuǎn)錄及腫瘤細(xì)胞的生命活動(dòng)等幾乎全細(xì)胞水平上發(fā)揮重要的作用[5-6]。LncRNA數(shù)目眾多,家族龐大,目前還有許多的lncRNA分子未被發(fā)現(xiàn)。LncRNA可以通過(guò)多種不同的分子機(jī)制來(lái)調(diào)控腫瘤相關(guān)基因及信號(hào)通路的活性,參與腫瘤進(jìn)展,研究顯示某些lncRNA可以發(fā)揮類(lèi)似原癌基因或抑癌基因的作用,控制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[7-8]。例如,乳腺腫瘤相關(guān)RNA 25 (mammary tumor associated RNA 25,MaTAR25)是一種新近發(fā)現(xiàn)的lncRNA分子。MaTAR25通過(guò)在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控Tns1基因來(lái)促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展。乳腺癌細(xì)胞MaTAR25表達(dá)缺失后,Tns1基因在mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平均下降,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)骨架重組,細(xì)胞間的黏連及微絨毛減少,從而增強(qiáng)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力,導(dǎo)致腫瘤擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移[9]。NEAT1是一種在多種腫瘤中廣泛表達(dá)的lncRNA,具有2個(gè)轉(zhuǎn)錄變異本,即NEAT1-1和NEAT1-2[10]。NEAT1可以發(fā)生高水平的m6A修飾,其m6A水平與前列腺癌患者的骨轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),與患者的預(yù)后生存負(fù)相關(guān)。經(jīng)過(guò)m6A修飾的NEAT1可以通過(guò)m6A位點(diǎn)與CYCLINL1富含R的C末端結(jié)構(gòu)域相互作用,從而激活CYCLINL1的表達(dá),誘導(dǎo)形成CYCLINL1/CDK19復(fù)合物,并通過(guò)RNA/DNA雜交將該復(fù)合物募集到RUNX2啟動(dòng)子區(qū)域,增強(qiáng)RUNX2表達(dá)。RUNX2通過(guò)RUNX2相關(guān)信號(hào)通路介導(dǎo)前列腺癌的骨轉(zhuǎn)移過(guò)程[11]。關(guān)于lncRNA在食管鱗癌中報(bào)道日益增多,lncRNA由于在食管鱗癌中的重要調(diào)控作用也受到關(guān)注。LncRNA AGPG是一個(gè)與葡萄糖代謝密切相關(guān)的lncRNA,在食管鱗癌組織及細(xì)胞中表達(dá)增高,且AGPG的表達(dá)與患者不良預(yù)后相關(guān)。機(jī)制上,AGPG通過(guò)特異性結(jié)合PFKFB3并阻斷其與APC/C復(fù)合物的相互作用,從而抑制APC/C介導(dǎo)的PFKFB3的泛素化途徑降解,增強(qiáng)其穩(wěn)定性,促進(jìn)細(xì)胞糖酵解和細(xì)胞增殖,導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、發(fā)展[12]。在食管鱗癌細(xì)胞中,lncRNA EZR-AS1一方面通過(guò)與RNA聚合酶II形成復(fù)合物,另一方面lncRNA EZR-AS1募集SMYD3到EZR啟動(dòng)子下游序列中富含GC的區(qū)域,促進(jìn)SMYD3結(jié)合EZR啟動(dòng)子,最終增強(qiáng)EZR轉(zhuǎn)錄和表達(dá),促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞的遷移和侵襲,加速食管鱗癌的發(fā)展[13]。因此,從lncRNA角度研究食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展,可能為食管鱗癌的治療提供新思路,有助于發(fā)現(xiàn)新的食管鱗癌腫瘤標(biāo)志物,開(kāi)發(fā)新的食管鱗癌治療靶標(biāo)。

        1 材料與方法

        1.1 一般資料

        1.1.1 細(xì)胞來(lái)源 食管上皮細(xì)胞Het-1A及食管鱗癌細(xì)胞EC109、KYSE30購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。

        1.1.2 臨床標(biāo)本 42對(duì)食管鱗癌組織及配對(duì)的癌旁組織收取自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院胸外科經(jīng)食管癌根治術(shù)切除后的手術(shù)標(biāo)本,經(jīng)病理證實(shí)為食管鱗癌。納入研究的食管鱗癌患者的臨床病理信息的界定,參照美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)第8版食管癌分期標(biāo)準(zhǔn)。所有納入患者在手術(shù)前未接受過(guò)放療、化療、靶向治療等與食管癌有關(guān)的治療。同一患者的正常食管組織取自腫瘤遠(yuǎn)端至少5 cm以外。本研究得到了鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn),所有患者均已簽署知情同意書(shū)。

        1.1.3 主要儀器 NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)(美國(guó)Thermo公司);反轉(zhuǎn)錄PCR儀器(美國(guó)Thermo公司);QuantStudio5實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)Thermo公司);分光光度計(jì)(美國(guó)Molecular Devices公司);倒置光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司)。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) Het1A、EC109、KYSE30細(xì)胞培養(yǎng)在含有體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清、質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%雙抗(青霉素、鏈霉素)的高糖DMEM培養(yǎng)基,放置于環(huán)境溫度為37 ℃及含有體積分?jǐn)?shù)5% CO2的培養(yǎng)箱中。

        1.2.2 細(xì)胞及組織RNA提取 采用Trizol法提取食管鱗癌組織及細(xì)胞中的RNA。RNA提取過(guò)程全程在冰上操作進(jìn)行,所用實(shí)驗(yàn)耗材如槍頭,EP管等均需無(wú)酶處理。提取組織RNA時(shí),首先取出適量組織,置于高通量組織研磨儀中研磨組織,使其充分破碎。針對(duì)食管鱗癌細(xì)胞,通常選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,胰酶消化收集細(xì)胞后用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)洗滌2次后,得到細(xì)胞沉淀,置于無(wú)酶處理過(guò)的EP管中。隨后向EP管中加入1 mL Rrizol裂解液,充分搖勻后置于冰上裂解10~20 min。隨后12 000 r/min,4 ℃離心10 min后取上清放入新的EP管中,向EP管中加入200 μL提前預(yù)冷的氯仿,充分震蕩,上下顛倒混勻數(shù)次,冰上靜置10 min。4 ℃、12 000 r/min、離心15 min,可見(jiàn)管內(nèi)溶液分層現(xiàn)象,RNA即存在于上層的無(wú)色水相中。向各個(gè)EP管中加入等體積的預(yù)冷的異丙醇,上下輕柔顛倒混勻數(shù)次,冰上靜置5 min。4 ℃,12 000 r/min,離心15 min后,可見(jiàn)EP管管底出現(xiàn)白色沉淀,即為RNA沉淀。使用1 mL的體積分?jǐn)?shù)75%無(wú)水乙醇洗滌RNA沉淀2次,7 500 r/min,5 min。最后一次洗滌完成后,棄去上清,最后微量殘余液體可用吸水濾紙除去,注意不要吸走RNA沉淀。將EP管倒扣在實(shí)驗(yàn)臺(tái),室溫15 min后晾干RNA沉淀,根據(jù)沉淀量大小加入適量的雙蒸水,待其充分溶解后,NanoDrop 2000測(cè)量RNA濃度及其純度。

        1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法采取脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,所用試劑為美國(guó)Invitrogen公司的Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑。實(shí)驗(yàn)所用的靶向HAGLROS的小干擾RNA(small-interfering RNA,siRNA)序列及其陰性對(duì)照序列由上海吉瑪公司設(shè)計(jì)合成。其序列如下:HAGLROS siRNA:GGCUAAGACUGCUGUUGAATT;對(duì)照siRNA:UUCUCCGAACGUGUCACGUdTdT。食管鱗癌細(xì)胞胰酶消化后,收集細(xì)胞,制成單細(xì)胞懸液,然后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),調(diào)整其濃度為2×105個(gè)/mL,然后接種到六孔板中,每孔2 mL,確保細(xì)胞均勻接種在六孔板中,置于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)密度,若密度達(dá)到30%~50%時(shí),即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作。取經(jīng)過(guò)無(wú)菌無(wú)酶處理的EP管若干,分別做好標(biāo)記為A管和B管。向A管和B管中各加入150 μL無(wú)血清培養(yǎng)基,然后向A管中加入10 μL Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑,充分混勻。B管中加入siRNA,輕柔混勻,室溫孵育5 min。待孵育結(jié)束后,將A管中液體加入B管中,輕柔充分混勻,室溫靜置15 min。取出六孔板,根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組加入配置好的轉(zhuǎn)染復(fù)合物,放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。48 h后觀察細(xì)胞生長(zhǎng)密度,若密度達(dá)到80%以上,則可進(jìn)行RNA提取,PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)siRNA的敲減效率。

        1.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 應(yīng)用日本Taraka反轉(zhuǎn)錄試劑盒(DRR047A)及Taraka SYBR Green I熒光定量PCR試劑盒,按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,所有的實(shí)驗(yàn)過(guò)程在冰上進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)所用的引物由尚亞公司設(shè)計(jì)合成。引物序列如下:HAGLROS-F: 5’-TGTCACCCTTAAATACCGCTCT-3’; HAGLROS-R: 5’-CTTCCTCCCACACAAATACTCC-3’;GAPDH-F: 5’-AGCCACATCGCTCAGACAC-3’;GAPDH-R: 5’-GCCCAATACGACCAAATCC-3’。

        1.2.5 細(xì)胞增殖檢測(cè) 采用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HAGLROS對(duì)于細(xì)胞增殖能力的影響。所用試劑購(gòu)自日本DOJINDO公司的CCK-8增殖試劑盒。鏡下觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞,若細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,活動(dòng)旺盛,則可進(jìn)行增殖測(cè)定實(shí)驗(yàn)。胰酶消化細(xì)胞后,加入適量完全培養(yǎng)基獲得單細(xì)胞懸液,鏡下測(cè)定并調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,96孔板中接種細(xì)胞懸液100 μL,每孔2 000個(gè)細(xì)胞左右,周?chē)目瞻卓准尤氲润w積的PBS以防止培養(yǎng)基蒸發(fā)。siHAGLROS組及對(duì)照組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均設(shè)置4個(gè)重復(fù)孔,分別在接種24 h、48 h、72 h及96 h后,取出做好標(biāo)記的對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的96孔板,采用多孔道移液器向各孔中加入10 μL CCK-8工作液,避光操作,加樣過(guò)程不要產(chǎn)生氣泡。置于培養(yǎng)箱中孵育2 h后取出,放入酶標(biāo)儀中檢測(cè)其上清液在450 nm處吸光值(OD450 nm)。根據(jù)記錄的不同時(shí)間點(diǎn)的OD450 nm,繪制不同對(duì)照組和siHAGLROS組的細(xì)胞增殖曲線并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

        1.2.6 Transwell實(shí)驗(yàn) 胰酶消化處理siRNA轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)48 h后的細(xì)胞,用無(wú)菌PBS清洗細(xì)胞沉淀1~2次,以去除培養(yǎng)基中血清的影響,加入無(wú)血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀,輕輕吹打制成單細(xì)胞懸液,吸取少量進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞濃度為2.5×106個(gè)/mL,吸取200 μL細(xì)胞懸液接種于24孔Transwell上室,下室中加入600 μL含有體積分?jǐn)?shù)15%胎牛血清的培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。24 h后從培養(yǎng)箱中取出Transwell小室,棄去小室內(nèi)培養(yǎng)基,用濕潤(rùn)的棉簽輕輕擦去小室上表面殘留的未遷移到下表面的細(xì)胞,另取一個(gè)新的24孔板,加入600 μL的質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛,將小室放入其中固定30 min,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%結(jié)晶紫染色30 min。染色完成后,用PBS清洗小室,去除多余的染色液,洗滌2~3次后倒置小室,室溫自然晾干,置于顯微鏡下隨機(jī)選取6~8個(gè)視野,拍照并計(jì)數(shù)貼壁細(xì)胞數(shù)量,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,統(tǒng)計(jì)并分析各組間細(xì)胞數(shù)目差異。

        2 結(jié)果

        2.1 HAGLROS在食管鱗癌組織中的表達(dá)及與食管鱗癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系通過(guò)RT-PCR的方法在42對(duì)食管鱗癌患者的腫瘤組織及正常食管組織中,對(duì)HAGLROS進(jìn)行mRNA水平的檢測(cè)。結(jié)果顯示:食管鱗癌組織中HAGLROS的相對(duì)表達(dá)量平2.771±1.647,而正常食管組織中HAGLROS的相對(duì)表達(dá)量為1.808±1.039; HAGLROS在食管鱗癌腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于正常食管組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.913,P=0.006)。隨后,我們分析了HAGLROS的表達(dá)與食管鱗癌患者腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度及TNM分期之間的關(guān)系。結(jié)果顯示,存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中HAGLROS的相對(duì)表達(dá)量為3.353±1.625,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中HAGLROS的相對(duì)表達(dá)量為1.996±1.363,HAGLROS的表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)存在明顯關(guān)聯(lián)(t=2.866,P=0.007);低分化患者中HAGLROS的相對(duì)表達(dá)量為3.126±1.919,中、高分化患者中HAGLROS的相對(duì)表達(dá)量為2.530±1.425,HAGLROS的表達(dá)與腫瘤的分化程度無(wú)明顯關(guān)聯(lián)(t=1.156,P=0.254);Ⅲ~Ⅳ期患者HAGLROS的相對(duì)表達(dá)量為3.623±1.542,Ⅰ~Ⅱ期患者中HAGLROS的相對(duì)表達(dá)量為1.920±1.290,HAGLROS在Ⅲ~Ⅳ期食管鱗癌患者中的表達(dá)明顯高于Ⅰ~Ⅱ期(t=3.882,P=0.001)。見(jiàn)圖1。

        圖1 不同食管組織中HARLROS的相對(duì)表達(dá)量

        A:食管鱗癌組織與正常食管組織比較;B:有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管鱗癌患者比較;C:不同分化程度食管鱗癌患者比較;D:不同分期食管鱗癌患者比較

        2.2 HAGLROS在不同食管細(xì)胞中的表達(dá)通過(guò)RT-PCR對(duì)Het1A、KYSE30及EC109細(xì)胞中HAGLROS的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,HAGLROS在KYSE30中的相對(duì)表達(dá)量最高(4.433±0.620),EC109中的表達(dá)次之(3.187±0.444),Het1A最低(1.223±0.236)。與Het1A細(xì)胞相比,HAGLROS在KYSE30與EC109細(xì)胞中的表達(dá)均明顯增加,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.384,P=0.001;t=6.767,P=0.003)。見(jiàn)圖2。

        圖2 HAGLROS在正常食管上皮細(xì)胞及食管鱗癌細(xì)胞中的表達(dá)

        2.3 HAGLROS對(duì)食管鱗癌細(xì)胞增殖的影響在KYSE30與EC109細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染小干擾RNA(siRNA)抑制HAGLROS的表達(dá)。轉(zhuǎn)染48 h后,RT-PCR檢測(cè)對(duì)照組及敲減HAGLROS組(siHAGLROS)中HAGLROS的mRNA水平。結(jié)果顯示,針對(duì)HAGLROS的siRNA能夠有效抑制其在KYSE30與EC109細(xì)胞中的表達(dá),敲減效率分別為68%與65%(P=0.001;P=0.001)。隨后,通過(guò)CCK-8法檢測(cè)敲減HAGLROS后,2種食管鱗癌細(xì)胞增殖速率的改變。結(jié)果顯示,在KYSE30細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染siHAGLROS后的72 h,siHAGLROS組的OD450為0.631±0.060,而對(duì)照組為0.840±0.064,與對(duì)照組相比,siHAGLROS組的細(xì)胞增殖速率明顯下降(t=4.756,P=0.003);在轉(zhuǎn)染后96 h,siHAGLROS組的OD450為0.941±0.062,而對(duì)照組為1.302±0.062,siHAGLROS組的細(xì)胞增殖速率同樣明顯受到抑制(t=8.203,P=0.001)。而在EC109細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染siHAGLROS后的96 h,siHAGLROS組的OD450為1.020±0.094,而對(duì)照組為1.392±0.088,細(xì)胞增殖速率明顯下降(t=5.790,P=0.001),其他時(shí)間點(diǎn)2組細(xì)胞的增殖速率均無(wú)明顯差異。見(jiàn)圖3。

        圖3 敲減HAGLROS對(duì)不同食管鱗癌細(xì)胞增殖的影響

        2.4 HAGLROS對(duì)食管鱗癌細(xì)胞遷移的影響在KYSE30與EC109細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siHAGLROS,48 h后將各組細(xì)胞置于Transwell小室的上室中,檢測(cè)食管鱗癌細(xì)胞遷移能力的改變。將細(xì)胞在Transwell小室培養(yǎng)24 h后,檢測(cè)各組細(xì)胞遷移至下室的數(shù)量。結(jié)果顯示,在KYSE30細(xì)胞中,siHAGLROS組的細(xì)胞數(shù)量為105.300±17.040,而對(duì)照組的細(xì)胞數(shù)量為179.700±21.220,表明抑制HAGLROS的表達(dá),能夠有效抑制腫瘤細(xì)胞遷移至下室的細(xì)胞數(shù)量(t=4.731,P=0.009)。在EC109細(xì)胞中,對(duì)照組的細(xì)胞數(shù)量為139.300±14.740,siHAGLROS組的細(xì)胞數(shù)量為68.670±8.622,Transwell下室中的siHAGLROS組細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比同樣明顯降低(t=7.167,P=0.002)。見(jiàn)圖4。

        圖4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲減HAGLROS后對(duì)KYSE30細(xì)胞(A)和EC109細(xì)胞(B)遷移能力的影響。

        3 討論

        HAGLROS是一條全長(zhǎng)約699 bp的lncRNA,定位于人類(lèi)2號(hào)染色體q31.1位置,主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中。HAGLROS最初是在胃癌中被報(bào)道其功能, HAGLROS在胃癌組織中表達(dá)增加并與胃癌患者的不良預(yù)后相關(guān),同時(shí)能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖與遷移及侵襲。HAGLROS能夠通過(guò)吸附miR-100-5p,促進(jìn)mTOR的表達(dá),抑制細(xì)胞自噬;此外其還能夠通過(guò)直接結(jié)合mTOR,促進(jìn)mTOR信號(hào)通路活性,促進(jìn)胃癌的惡性進(jìn)程[14]。在結(jié)直腸癌細(xì)胞中,敲減HAGLROS能夠明顯促進(jìn)細(xì)胞凋亡并且抑制細(xì)胞自噬,并且通過(guò)PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路抑制腫瘤的發(fā)生[15]。HAGLROS在膽管癌細(xì)胞中同樣發(fā)揮促癌作用,HAGLROS能夠增強(qiáng)脂代謝相關(guān)蛋白的表達(dá),調(diào)控脂類(lèi)代謝重編程并激活mTOR信號(hào)通路,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移[16]。由此可見(jiàn), HAGLROS在多種腫瘤中具有重要的促癌作用,并且這一效應(yīng)與mTOR信號(hào)通路介導(dǎo)的細(xì)胞自噬密切相關(guān)。此外,Liu等[17]發(fā)現(xiàn)HAGLROS在肺炎急性期患者的血漿中表達(dá)上升,在肺成纖維細(xì)胞中敲減HAGLROS的表達(dá),能夠通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡與自噬從而減輕脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞的損害,表明HAGLROS在炎癥的發(fā)病過(guò)程中同樣起到關(guān)鍵的作用。

        然而,關(guān)于HAGLROS在食管鱗癌中的表達(dá)水平及生物學(xué)功能仍未有相關(guān)報(bào)道。我們的研究結(jié)果首次證明,HAGLROS在食管鱗癌組織中表達(dá)明顯增加,并且具有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌患者中HAGLROS的表達(dá)相較于沒(méi)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者明顯上升;而晚期食管鱗癌患者中HAGLROS的表達(dá)也比早期食管鱗癌患者中高,以上結(jié)果表明,HAGLROS可能在預(yù)測(cè)食管鱗癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期中具有重要的價(jià)值。我們通過(guò)在食管鱗癌中敲減HAGLROS的表達(dá),發(fā)現(xiàn)食管鱗癌細(xì)胞的增殖能力及遷移能力均有所下降,提示HAGLROS可能對(duì)食管鱗癌細(xì)胞的惡性表型起到促進(jìn)作用。

        綜上所述,我們的研究結(jié)果對(duì)于闡明HAGLROS在食管鱗癌中的表達(dá)模式及生物學(xué)功能具有深遠(yuǎn)的意義。鑒于HAGLROS對(duì)食管鱗癌細(xì)胞增殖及遷移的重要影響,后續(xù)對(duì)于HAGLROS在食管鱗癌中促癌作用的分子機(jī)制研究,將更有助于未來(lái)開(kāi)展針對(duì)HAGLROS的靶向治療。

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