姜碧薇 王 甜 周玉香* 李 斐

(1.寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，銀川 2750021；2.寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院，銀川 2750021)

纖維素酶是由葡聚糖內(nèi)切酶、葡聚糖外切酶和β-葡聚糖苷酶組成的，能夠?qū)⒗w維素降解為葡萄糖的一類酶的總稱[1]。飼糧中添加纖維素酶能夠有效破解植物細(xì)胞壁，提高秸稈的降解率和營(yíng)養(yǎng)成分含量[2-3]，從而提高反芻動(dòng)物的生長(zhǎng)性能和屠宰性能[4-5]。益生菌是一種對(duì)宿主有益的活性微生物，適宜的添加量不僅能夠抑制宿主腸道的病原微生物增殖，還可以維持胃腸道的菌群平衡，提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能[6]。復(fù)合益生菌劑適應(yīng)瘤胃的復(fù)雜性，能夠彌補(bǔ)單一菌劑的局限性，因此更適合于反芻動(dòng)物使用。目前，復(fù)合益生菌發(fā)酵粗飼料的處理方法是秸稈飼用化與開發(fā)利用研究熱點(diǎn)。研究顯示釀酒酵母+枯草芽孢桿菌+乳酸菌組合具有良好的協(xié)同促進(jìn)作用[7]。

蕎麥秸稈屬蓼科雙子葉植物[8]，是寧夏南部及中部干旱區(qū)常見的作物秸稈，具有較高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，可應(yīng)用于反芻動(dòng)物養(yǎng)殖[9]。苜蓿是牧草之王，不僅蛋白質(zhì)含量高，且品質(zhì)優(yōu)。對(duì)粗飼料進(jìn)行加工處理是提高其飼用品質(zhì)的有效方法。本試驗(yàn)在課題組成員王萌[10]篩選出組合效應(yīng)值較高的蕎麥秸稈和苜蓿干草適宜比例(20∶80)的基礎(chǔ)上，采用纖維素酶和復(fù)合益生菌(由乳酸菌、酵母菌、枯草芽孢桿菌等組成)混合處理寧夏地區(qū)常見的2種粗飼料蕎麥秸稈和苜蓿干草，在飼糧精粗比為30∶70的條件下，研究酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊生長(zhǎng)性能、屠宰性能、肉品質(zhì)、瘤胃細(xì)菌多樣性和碳水化合物活性酶類(carbohydrate-active enzymes，CAZy)的影響，以期為秸稈飼料資源的開發(fā)利用及其在灘羊生產(chǎn)實(shí)踐中的科學(xué)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 酶菌混合處理蕎麥秸稈與苜蓿干草的制備

取適量蕎麥秸稈和苜蓿干草，用粉碎機(jī)粉碎至3～5 cm備用。按照配制比例準(zhǔn)確稱取纖維素酶(活性≥10 000 U/g；添加量為0.1%)、復(fù)合益生菌[主要成分為酵母菌(活菌數(shù)≥1.0×108CFU/g)、乳酸菌(活菌數(shù)≥1.0×107CFU/g)和枯草芽孢桿菌(活菌數(shù)≥5.0×107CFU/g)，添加量為2 kg/t]和麥麩(按照待處理粗飼料的1%稱取)后，加入適量的水，充分?jǐn)嚢?，混合均勻后采取噴淋的方式，邊噴灑邊攪拌，使水溶液與待處理粗飼料充分混合并將含水量調(diào)至70%左右，最后利用青貯裹包機(jī)直接打捆包膜密封保存30 d。蕎麥秸稈和苜蓿干草處理前后分別測(cè)定其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量，其中干物質(zhì)含量參照GB/T 6435—2006《飼料水分的測(cè)定方法》測(cè)定，粗蛋白質(zhì)(CP)含量參照GB/T 6435—2006《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》測(cè)定，中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)含量參照Van Soest等[11]的方法進(jìn)行測(cè)定，粗灰分含量參照GB/T 6435—2006《飼料中粗灰分的測(cè)定方法》測(cè)定，鈣(Ca)含量采用高錳酸鉀法測(cè)定，磷(P)含量采用鉬黃比色法測(cè)定。處理前后蕎麥秸稈和苜蓿干草營(yíng)養(yǎng)成分含量見表1。

表1 處理前后蕎麥秸稈和苜蓿干草營(yíng)養(yǎng)成分含量(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.2 飼養(yǎng)試驗(yàn)

飼養(yǎng)試驗(yàn)于2019年7月至2019年9月在寧夏農(nóng)墾賀蘭山牛羊產(chǎn)業(yè)集團(tuán)有限公司進(jìn)行。選擇體重[(31.99±2.10) kg]相近、健康狀況良好、斷奶后的3月齡灘羊(公羊)20只，隨機(jī)分為2組(對(duì)照組和試驗(yàn)組)，每組10只。對(duì)照組飼糧以未經(jīng)處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草(二者比例為20∶80)作為粗飼料，試驗(yàn)組飼糧以酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草(二者比例為20∶80)作為粗飼料，2組飼糧精料相同，精粗比均為30∶70。試驗(yàn)飼糧參照農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 816—2004《肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》和生產(chǎn)實(shí)踐配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表2。

表2 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

參試羊在試驗(yàn)前進(jìn)行驅(qū)蟲和防疫，定期對(duì)圈舍進(jìn)行消毒與清掃。預(yù)試期15 d，正試期60 d，每日分早晚(06：30和18：00)等量飼喂，自由飲水。

1.3 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)性能的測(cè)定

從正試期開始，每日準(zhǔn)確記錄羊只的給料量與剩料量，計(jì)算干物質(zhì)采食量。在試驗(yàn)開始當(dāng)天早晨空腹稱取參試羊的體重作為初始體重，在試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天稱取參試羊的體重作為結(jié)束體重。計(jì)算每只羊60 d的總增重、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.3.2 屠宰性能指標(biāo)的測(cè)定

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，每組選擇5只體重接近平均體重的羊只禁食24 h、禁水2 h后屠宰，進(jìn)行屠宰性能相關(guān)指標(biāo)測(cè)定。

宰前活重：屠宰前禁食24 h、禁水2 h后所稱取的重量。

胴體重：屠宰放血后，剝?nèi)ッ?，去頭、蹄、內(nèi)臟后整個(gè)軀體(保留腎臟及其周圍脂肪)靜置30 min后稱取的重量。

凈肉重和骨重：胴體在溫?zé)崆闆r下去除腎臟及其周圍脂肪，骨頭被精細(xì)剔除后余下的重量為凈肉重，剔除骨頭的重量為骨重。

胴體脂肪重：在溫?zé)崆闆r下將胴體的脂肪與肌肉精細(xì)剔除后，稱取脂肪的重量。

尾部脂肪重：在溫?zé)崆闆r下將脂肪精細(xì)剔除后，稱取尾部脂肪的重量。

屠宰率：胴體重占宰前活重的百分比。

骨肉比：胴體骨重與凈肉重的比率。

眼肌面積：測(cè)量胴體第12～13肋骨脊柱上方背最長(zhǎng)肌的橫切面積。

GR值：用游標(biāo)卡尺準(zhǔn)確量取胴體第12～13助骨間，距背脊中線11 cm處的組織厚度。

1.3.3 肉品質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)成分含量的測(cè)定

屠宰后取肩、股、背部肉樣，用嫩度測(cè)定儀(RH-N50，廣州潤(rùn)湖儀器有限公司)、系水力測(cè)定儀(RH-1000，廣州潤(rùn)湖儀器有限公司)進(jìn)行肉品質(zhì)指標(biāo)測(cè)定，具體操作參考侯鵬霞[12]的測(cè)定方法。羊肉營(yíng)養(yǎng)成分含量參考AOAC(1990)[13]中的方法測(cè)定。

1.3.4 瘤胃液的采集、DNA提取及建庫測(cè)序

于屠宰當(dāng)天清晨空腹采集瘤胃液，每組選擇3只參試羊，采用負(fù)壓采集器，經(jīng)導(dǎo)管通過口腔食道，深入到瘤胃中部，采集瘤胃液約100 mL，每個(gè)瘤胃液樣品通過4層薄紗布過濾，液氮冷凍保存。將瘤胃液樣品送至廣州基迪奧生物科技有限公司進(jìn)行V3+V4區(qū)擴(kuò)增并進(jìn)行Illumina HiSeq平臺(tái)基因組測(cè)序。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

生長(zhǎng)性能、屠宰性能、肉品質(zhì)、羊肉營(yíng)養(yǎng)成分含量和瘤胃細(xì)菌多樣性數(shù)據(jù)用Excel 2007記錄并作簡(jiǎn)單處理后，采用SAS 8.2軟件進(jìn)行方差分析，利用LSD法進(jìn)行多重比較，以P<0.05作為差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)，P<0.01作為差異極顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)。宏基因組數(shù)據(jù)基于dbCAN數(shù)據(jù)庫采用譜隱馬爾可夫模型，分析CAZy基因相似性?；谠紃eads數(shù)，采用DESeq2 (V1.10.1)進(jìn)行差異分析，繪制CAZy基因豐度差異散點(diǎn)圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，試驗(yàn)組總增重和平均日增重極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，分別比對(duì)照組提高了40.33%和40.32%；試驗(yàn)組料重比極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，比對(duì)照組降低了28.43%；其余各項(xiàng)生長(zhǎng)性能指標(biāo)試驗(yàn)組與對(duì)照組之間差異不顯著(P>0.05)。上述結(jié)果說明用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，提高了灘羊的增重。

表3 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊生長(zhǎng)性能的影響

2.2 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊屠宰性能的影響

由表4可知，試驗(yàn)組與對(duì)照組之間各項(xiàng)屠宰性能指標(biāo)均無顯著差異(P>0.05)，但試驗(yàn)組的胴體重、屠宰率和凈肉重分別比對(duì)照組提高了2.56%、2.23%和3.22%。上述結(jié)果說明用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，有提高灘羊胴體重、屠宰率和凈肉重的趨勢(shì)。

表4 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊屠宰性能的影響

2.3 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊肉品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分含量的影響

由表5可知，試驗(yàn)組與對(duì)照組羊肉各部位pH介于6.67～6.91，試驗(yàn)組失水率、剪切力和滴水損失分別比對(duì)照組降低了7.25%、1.79%和15.13%，熟肉率以及肉色紅度(a*)、黃度(b*)和亮度(L*)值分別比對(duì)照組提高了5.64%、3.63%、5.12%和0.71%，但試驗(yàn)組與對(duì)照組相比各項(xiàng)肉品質(zhì)指標(biāo)均無顯著差異(P>0.05)。上述結(jié)果說明用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，具有改善灘羊肉色和肉品質(zhì)的趨勢(shì)。

表5 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊肉品質(zhì)的影響

由表6可知，試驗(yàn)組與對(duì)照組羊肉各營(yíng)養(yǎng)成分含量均無顯著差異(P>0.05)，但試驗(yàn)組粗脂肪含量比對(duì)照組降低了9.25%，粗蛋白質(zhì)含量比對(duì)照組提高了4.31%。上述結(jié)果說明用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，有降低灘羊肉脂肪含量、提高灘羊肉蛋白質(zhì)含量的趨勢(shì)。

表6 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊肉營(yíng)養(yǎng)成分含量的影響

2.4 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌多樣性的影響

2.4.1 對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌操作分類單元(OTU)數(shù)目的影響

對(duì)照組的3個(gè)平行樣本共獲得reads 114 683 920個(gè)，試驗(yàn)組3個(gè)平行樣本共獲得reads 138 106 628個(gè)。由表7可知，對(duì)照組與試驗(yàn)組覆蓋度均大于0.98，能夠準(zhǔn)確反映灘羊瘤胃內(nèi)的細(xì)菌組成情況；試驗(yàn)組OTU數(shù)目比對(duì)照組降低了3.76%，但差異不顯著(P>0.05)。上述結(jié)果說明用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌OTU數(shù)目的影響不大。

表7 瘤胃細(xì)菌OTU數(shù)目

2.4.2 對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌Alpha多樣性的影響

由表8可知，試驗(yàn)組的Chao指數(shù)和ACE指數(shù)極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)也低于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)。上述結(jié)果說明用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，降低了其瘤胃細(xì)菌的Chao指數(shù)和ACE指數(shù)，對(duì)瘤胃細(xì)菌的Alpha多樣性有一定影響。

表8 16S rDNA檢測(cè)Alpha多樣性

2.4.3 對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌Beta多樣性的影響

圖1為所測(cè)樣本瘤胃微生物群落的主坐標(biāo)分析(PCoA)。由圖1可知，主坐標(biāo)成分1(PCo1)和主坐標(biāo)成分2(PCo2)對(duì)樣本間變異的貢獻(xiàn)度分別為70.44%和14.45%，能夠充分解釋樣本間的變異；PCoA顯示，同組內(nèi)樣本距離較近，說明同組內(nèi)物種多樣性差異較小，對(duì)照組與試驗(yàn)組之間樣本距離較遠(yuǎn)，說明對(duì)照組與試驗(yàn)組之間瘤胃細(xì)菌多樣性有所差異。

圖1 瘤胃細(xì)菌OTU數(shù)目主坐標(biāo)分析

2.4.4 對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌優(yōu)勢(shì)群及差異物種的影響

由表9可知，在門水平上，對(duì)照組與試驗(yàn)組的優(yōu)勢(shì)菌門均為變形菌門、厚壁菌門、擬桿菌門和Kiritimatiellaeota，其總量占總菌門的95%以上。其中，試驗(yàn)組厚壁菌門的豐度顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，擬桿菌門和Kiritimatiellaeota的豐度極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，變形菌門的豐度與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。上述結(jié)果說明用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，降低了其瘤胃細(xì)菌內(nèi)擬桿菌門和Kiritimatiellaeota的數(shù)量，提高了厚壁菌門的數(shù)量。

表9 全樣本優(yōu)勢(shì)菌門豐度

由表10可知，在屬水平上，對(duì)照組與試驗(yàn)組的優(yōu)勢(shì)菌屬為叢毛單胞菌屬(Comamonas)、普雷沃氏菌屬1(Prevotella_1)、不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)、賴氨酸芽孢桿菌屬(Lysinibacillus)、庫特氏菌屬(Kurthia)、克里斯滕森菌科R-7群(Christensenellaceae_R-7_group)、理研菌科RC9腸道群(Rikenellaceae_RC9_gut_group)、魯梅爾芽孢桿菌屬(Solibacillus)和瘤胃球菌科NK4A214群(Ruminococcaceae_NK4A214_group)。其中，試驗(yàn)組Prevotella_1、Kurthia、Christensenellaceae_R-7_group和Solibacillus的豐度極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，Comamonas、Acinetobacter、Lysinibacillus、Rikenellaceae_RC9_gut_group和Ruminococcaceae_NK4A214_group的豐度與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。上述結(jié)果說明用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，提高了其瘤胃內(nèi)Prevotella_1、Kurthia、Christensenellaceae_R-7_group和Solibacillus的數(shù)量。

表10 全樣本優(yōu)勢(shì)菌屬豐度

2.5 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊瘤胃內(nèi)CAZy的影響

本試驗(yàn)中，對(duì)照組3個(gè)平行樣本共獲得基因5 569 976個(gè)，試驗(yàn)組3個(gè)平行樣共獲得基因5 921 304個(gè)。與CAZy數(shù)據(jù)庫對(duì)比可得各樣品CAZy注釋圖(圖2)。由圖2可知，在A層級(jí)中，試驗(yàn)組與對(duì)照組CAZy的基因數(shù)量由高到低排序均為糖苷水解酶(GH)>糖基轉(zhuǎn)移酶(GT)>碳水化合物結(jié)合模塊(CBM)>糖類酯解酶(CE)>多糖裂解酶(PL)>輔助氧化還原酶(AA)。該結(jié)果表明，用酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草作為粗飼料飼喂灘羊，其瘤胃內(nèi)降解植物纖維素的CAZy主要是GH、GT和CBM。在B層級(jí)中，豐度排名前5的見表11。由表11可知，試驗(yàn)組與對(duì)照組CAZy較高豐度家族基因reads數(shù)目排名一致，且均無顯著差異(P>0.05)?；贒ESeq2差異分析，繪制基因散點(diǎn)圖(圖3)，圖中紅色表示豐度顯著上調(diào)的基因(P<0.05)，綠色表示豐度顯著下調(diào)的基因(P<0.05)，灰色表示豐度無顯著變化基因(P>0.05)。由圖3可知，用酶菌混合處理后的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，可引起灘羊瘤胃部分基因豐度上調(diào)或下調(diào)。由表12可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組豐度上調(diào)的有CBM83、CBM60等12個(gè)基因(P<0.05)，豐度下調(diào)的有AA1、GH126和AA12共3個(gè)基因(P<0.05)。

表12 對(duì)照組與試驗(yàn)組CAZy豐度DEseq2差異分析表

AA：輔助氧化還原酶 auxiliary oxidoreductase；GH：糖苷水解酶 glycoside hydrolase；GT：糖基轉(zhuǎn)移酶glycosyltransferase；PL：多糖裂解酶 polysaceharide lyase；CE：糖類酯解酶 carbohydrate esterase；CBM：碳水化合物結(jié)合模塊carbohydrate binding module。

表11 CAZy較高豐度家族基因reads數(shù)目(B層級(jí))

圖3 對(duì)照組與試驗(yàn)組CAZy豐度的DESeq2差異分析圖

3 討 論

3.1 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊生長(zhǎng)性能的影響

用纖維素酶處理粗飼料后飼喂反芻動(dòng)物，能夠有效地提高反芻動(dòng)物的生長(zhǎng)性能。張芹等[14]研究發(fā)現(xiàn)，外源酶促進(jìn)了反芻動(dòng)物對(duì)飼料的消化和利用，提高了日增重和產(chǎn)奶量，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。益生菌發(fā)酵飼料對(duì)于羔羊補(bǔ)飼和成年羊育肥的作用效果十分顯著[15]。有研究學(xué)者給羔羊飼喂布氏乳桿菌11A44發(fā)酵的野豌豆飼料，結(jié)果表明，羔羊的日增重為184 g，顯著高于對(duì)照組，生張性能得到了明顯的改善[16]，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。本試驗(yàn)用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，顯著提高了灘羊的總增重、平均日增重，降低了料重比，說明該處理方法促進(jìn)了灘羊?qū)︼暭Z中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，提高了灘羊的生長(zhǎng)性能。

3.2 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊屠宰性能的影響

屠宰性能可以反映出動(dòng)物的生長(zhǎng)情況。屠宰率、凈肉重和胴體重等指標(biāo)與動(dòng)物產(chǎn)肉力的好壞直接相關(guān)，并影響經(jīng)濟(jì)效益。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組與對(duì)照組的各項(xiàng)屠宰性能指標(biāo)差異均不顯著，但試驗(yàn)組胴體重、屠宰率和凈肉重與對(duì)照組相比均有上升趨勢(shì)，這與Kim等[17]的試驗(yàn)報(bào)道相似。Zobell等[18]報(bào)道，纖維素酶制劑對(duì)育肥牛的眼肌面積無顯著影響，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

3.3 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊肉品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分含量的影響

羊肉pH決定了肉品質(zhì)的優(yōu)劣。本試驗(yàn)中對(duì)照組與試驗(yàn)組羊肉pH介于6.67～6.91，均屬于正常范圍。熟肉率與烹煮損失有密切關(guān)系，數(shù)值越高則烹煮損失越小。試驗(yàn)組的熟肉率比對(duì)照組有所增加，說明用酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，有改善灘羊肉品質(zhì)的作用。有報(bào)道稱，芽孢桿菌可以提高育肥豬的胴體品質(zhì)[19]，本試驗(yàn)結(jié)果與此一致。試驗(yàn)組的肉色與對(duì)照組相比有提高的趨勢(shì)，說明酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草能夠改善灘羊的肉色。

肌肉的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量可以直觀反映肉品質(zhì)。有研究報(bào)道，灘羊肉的水分含量為77%左右[20]，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。肌肉中的脂肪可以有效改善灘羊肉的風(fēng)味并滿足人們對(duì)肉質(zhì)口感的要求，但羊肉脂肪含量過高則會(huì)使人體攝入過多的膽固醇，提高心血管的發(fā)病概率。本試驗(yàn)中試驗(yàn)組與對(duì)照組羊肉的粗脂肪含量均在正常范圍內(nèi)，但試驗(yàn)組粗脂肪含量低于對(duì)照組，說明用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，有降低灘羊肉粗脂肪含量的趨勢(shì)，有助于減少人體膽固醇的攝入量。據(jù)王思飛[21]報(bào)道，7月齡灘羊的羊肉中粗蛋白質(zhì)含量為16.05%，低于本試驗(yàn)結(jié)果，分析原因可能與參試羊年齡有關(guān)，本試驗(yàn)選擇的羊只為3月齡斷奶羔羊，其生長(zhǎng)以肌肉生長(zhǎng)為主。

3.4 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌多樣性的影響

16S rDNA高通量測(cè)序技術(shù)可用作分析不同菌種中序列的多樣性和鑒定菌種的類別[22]，是不用分離培養(yǎng)微生物而進(jìn)行鑒定的一種方法，被廣泛利用。Kong等[23]研究了不同粗飼料對(duì)奶牛瘤胃細(xì)菌多樣性及結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，厚壁菌門和擬桿菌門占整個(gè)細(xì)菌門水平的比例較大，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。在門水平上，厚壁菌門是反芻動(dòng)物瘤胃纖維降解菌中十分重要的菌群；在屬水平上，普雷沃氏菌屬是瘤胃數(shù)量最多的一類細(xì)菌[24]，能夠促進(jìn)瘤胃纖維物質(zhì)的降解，是瘤胃中的優(yōu)勢(shì)菌群[25]，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。試驗(yàn)組厚壁菌門的豐度顯著高于對(duì)照組，Prevotella_1的豐度顯著高于對(duì)照組，說明用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，提高了灘羊瘤胃內(nèi)部分纖維降解菌的數(shù)量，促進(jìn)了灘羊瘤胃對(duì)粗飼料的消化和吸收；此外，試驗(yàn)組的Chao指數(shù)和ACE指數(shù)極顯著低于對(duì)照組，用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌多樣性也產(chǎn)生了一定影響。

3.5 酶菌混合處理蕎麥秸稈和苜蓿干草對(duì)灘羊瘤胃CAZy的影響

CAZy數(shù)據(jù)庫是專門研究CAZy的數(shù)據(jù)庫。反芻動(dòng)物可通過瘤胃內(nèi)的部分微生物分泌的降解酶對(duì)其進(jìn)行降解并為機(jī)體供能。因此，許多學(xué)者通過研究瘤胃液的木質(zhì)纖維素降解機(jī)制挖掘未知的CAZy[26]。CAZy共分為6大功能類，其中GH、CE和PL能夠協(xié)同作用降解木質(zhì)纖維素物質(zhì)[27-28]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照組與試驗(yàn)組GH家族基因豐度均最高，其次是GT和CBM，PL和CE豐度較低，這與胡丹丹[29]的研究結(jié)果一致。Lynd等[30]研究表明，CBM是纖維素酶的重要組成部分，同時(shí)具有催化作用，能促進(jìn)酶與纖維物質(zhì)結(jié)合，從而促進(jìn)纖維物質(zhì)的降解。目前CBM包含84個(gè)家族成員。有研究通過CAZy預(yù)測(cè)功能表明，CBM6是纖維素降解酶，能夠促進(jìn)纖維素的降解[31]，本試驗(yàn)中，CBM6基因豐度較高，說明該處理方式提高了灘羊瘤胃內(nèi)部分纖維降解酶的活性，提示灘羊?qū)w維素降解作用較好。CBM50具有與細(xì)胞壁降解的相關(guān)基因[32]，且從CAZy數(shù)據(jù)庫中發(fā)現(xiàn)與擬桿菌門有關(guān)。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組擬桿菌門的豐度顯著低于對(duì)照組，但CBM50基因reads數(shù)目與對(duì)照組無顯著差異，分析原因可能是灘羊瘤胃內(nèi)其他細(xì)菌數(shù)量也與CBM50基因有關(guān)。試驗(yàn)組部分基因的豐度與對(duì)照組相比有顯著上調(diào)或下調(diào)情況，但這些基因都不是豐度較高的基因，這可能與灘羊飼喂酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草有關(guān)，但具體作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

① 用酶菌混合處理后的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，可以提高灘羊的平均日增重，降低料重比，提高灘羊的生長(zhǎng)性能。

② 用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，有提高灘羊胴體重、屠宰率和凈肉重的趨勢(shì)，同時(shí)有改善灘羊肉色和肉品質(zhì)的趨勢(shì)。

③ 用酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊，提高了灘羊瘤胃內(nèi)部分纖維降解菌和部分碳水化合物功能酶的基因數(shù)量，促進(jìn)了灘羊瘤胃對(duì)粗飼料的消化和吸收，并對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌多樣性產(chǎn)生了一定影響。

④ 本試驗(yàn)條件下，酶菌混合處理的蕎麥秸稈和苜蓿干草飼喂灘羊效果較佳，有利于灘羊瘤胃分解纖維素的優(yōu)勢(shì)菌群的形成，益于灘羊養(yǎng)殖，可推廣使用。