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        不同分化程度胃癌患者血清ANXA7、E-cadherin水平變化及聯(lián)合監(jiān)測臨床意義探討

        2021-05-19 03:52:30呂松林王喆李坤朋
        關(guān)鍵詞:胃病良性分化

        呂松林,王喆,李坤朋

        (河南省南陽市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,河南 南陽 473000)

        2015 年中國癌癥數(shù)據(jù)報(bào)告顯示, 我國每年胃癌新發(fā)與死亡病例分別為67.9 萬、49.8 萬例,而從全球范圍講,近一半新發(fā)胃癌患者和死亡病例在我國,成為危害中國居民健康主要疾病之一[1,2]。盡管現(xiàn)階段診療技術(shù)有很大進(jìn)步,但早期胃癌缺乏特異性表現(xiàn),檢出率仍較低,確診時大多患者已進(jìn)入中晚期,預(yù)后效果較差,因此研究胃癌相關(guān)內(nèi)容意義重大。目前放化療是治療中晚期胃癌重要手段,但有效率偏低,基本原因在于癌細(xì)胞凋亡率較低,且不能有效控制細(xì)胞增殖[3,4]。膜聯(lián)蛋白A7(Annexin A7,ANXA7)系膜聯(lián)蛋白A 家族一員,具有多種生理功能,可參與細(xì)胞膜離子通道調(diào)控、細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)活動、細(xì)胞信號調(diào)控、細(xì)胞膜受體構(gòu)象、細(xì)胞胞飲和胞吐及細(xì)胞分裂、增殖、分化、凋亡等[5,6]。E 鈣蛋白(E-cadherin)是一種鈣離子依賴性細(xì)胞黏附蛋白,對細(xì)胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞形態(tài)維持、緊密連接等至關(guān)重要[7]。研究發(fā)現(xiàn),不同種類惡性腫瘤中,ANXA7、E-cadherin 表達(dá)存在異常,可能與惡性腫瘤有關(guān)[8,9]。目前胃癌患者及不同分化程度胃癌AN XA7、E-cadherin 表達(dá)尚不明確, 是否與癌細(xì)胞增殖、凋亡有關(guān)及是否擁有潛在價值仍有待探討。鑒于此本研究選取200 例胃癌患者,探討不同分化程度胃癌患者血清ANXA7、E-cadherin 水平變化及聯(lián)合監(jiān)測臨床意義,報(bào)告如下。

        1 資料和方法

        1.1 一般資料 選取 2018 年 2 月-2019 年 3 月我院收治的200 例胃癌患者作為胃癌組,選取同期非胃癌健康體檢者200 例(對照組)及良性胃部疾病200 例(良性胃病組),各組性別、年齡等資料均衡可比(P>0.05)。

        1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn) ⑴納入標(biāo)準(zhǔn):胃癌組均根據(jù)《胃癌病理分型和診斷標(biāo)準(zhǔn)的建議》[10]診斷;自愿簽署知情同意書; 未合并全身其他已知惡性腫瘤;無暈血癥。⑵排除標(biāo)準(zhǔn):聽力、語言交流存在障礙者;認(rèn)知、精神異常者;合并膿毒癥等急性感染類疾病者;再生障礙性貧血者。

        1.3 方法

        1.3.1 主要試劑、儀器 ANXA7 試劑盒(上??蒲性噭S);E-cadherin 試劑盒(上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司);loading Buffer(杭州弗德生物科技有限公司);ANXA7 一抗、 二抗 (艾美捷科技有限公司);E-cadherin 一抗、二抗(上海瑞齊生物科技);Proteinase K 工作液 (上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司);流式細(xì)胞儀(美國BD 公司);酶標(biāo)儀(美國伯騰儀器有限公司BioTek)。

        表1 各組一般資料比較

        1.3.2 血清ANXA7、E-cadherin 檢測 肘部常規(guī)消毒后采集靜脈血,以酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清ANXA7、E-cadherin 水平。

        1.3.3 western blot 檢測胃癌組織 ANXA7、E-cadherin 勻漿器制作胃癌組織勻漿,收集懸液,離心,取上清,BCA 法測蛋白濃度,加入 loading Buffer,電泳,轉(zhuǎn)模,封閉,加入 ANXA7、E-cadherin 一抗、二抗,洗膜,ECL 顯影,Quantity One-4.6.2 軟件定量分析,以目的條帶與β-action 比值作為ANXA7、E-cadherin 蛋白表達(dá)水平。

        1.3.4 TUNEL 法檢測胃癌細(xì)胞凋亡 不同分化程度胃癌組織,用Proteinase K 工作液、透化液處理,PBS 漂洗5min×2 次,設(shè)置陰性對照和陽性對照,滴加 TUNEL 反應(yīng)液 50μl,保濕避光,孵育(60min、37℃),PBS 漂洗 5min×3 次,滴加 PI 染液 5min,重復(fù)PBS 漂洗3 次,每張切片觀察5 個視野,每個視野計(jì)數(shù)100 個細(xì)胞中的凋亡細(xì)胞數(shù),取其平均值為凋亡指數(shù),根據(jù)(凋亡細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù))×100%進(jìn)行計(jì)算。

        1.4 觀察指標(biāo) ⑴比較各組血清ANXA7、E-cadherin 水平。⑵繪制胃癌患者 ANXA7、E-cadherin接收者操作特征曲線 (ROC),分析 ANXA7、E-cadherin、ANXA7+E-cadherin 診斷價值。⑶比較不同分化程度胃癌患者血清及胃癌組織ANXA7、E-cadherin 水平。⑷采用 Spearman 分析 ANXA7、E-cadherin 與分化相關(guān)性。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù),計(jì)量資料以(±s)表示,多組間比較以單因素方差進(jìn)行分析,兩兩比較以LSD-t 檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料用 n(%)表示、χ2檢驗(yàn)。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 各組血清 ANXA7、E-cadherin 胃癌組血清ANXA7、E-cadherin 均較對照組、 良性胃病組高(P<0.05); 對照組與良性胃病組血清 ANXA7、E-cadherin 比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

        表2 各組血清 ANXA7、E-cadherin比較(±s)

        表2 各組血清 ANXA7、E-cadherin比較(±s)

        組別胃癌組對照組良性胃病組例數(shù) ANXA7(ng/L)200 200 F P 76.25±8.54 60.21±5.19 61.03±3.97 423.427 0.000 E-cadherin(ng/ml)33.71±5.98 24.66±6.91 23.95±7.28 130.150 0.000

        2.2 ROC 曲線 以胃癌組為陽性樣本,以對照組和良性胃病組為陰性樣本進(jìn)行ROC 分析,結(jié)果顯示,ANXA7 ROC 曲線下面積為 0.861,以 70.09 ng/L 作為臨界值,對胃癌診斷敏感性為65.00%,特異性為95.00%,E-cadherin ROC 曲線下面積為 0.749,以29.87ng/ml 作為臨界值,對胃癌診斷敏感性為84.00%,特異性為65.00%。見圖1。

        圖1 ROC曲線

        2.3 不同分化程度血清ANXA7、E-cadherin 不同分化程度胃癌患者血清及胃癌組織ANXA7、E-cadherin 比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,高、中、低分化血清及胃癌組織ANXA7、E-cadherin 依次升高(P<0.05)。見表4。

        表3 ROC分析結(jié)果

        表4 不同分化程度胃癌患者ANXA7、E-cadherin比較(±s)

        表4 不同分化程度胃癌患者ANXA7、E-cadherin比較(±s)

        血清ANXA7(ng/L)胃癌組織分化程度 例數(shù)E-cadherin(ng/ml)ANXA7 E-cadherin高分化中分化低分化105 64 31 F P 69.22±6.05 78.77±10.63 94.88±12.64 102.488 0.000 28.88±5.89 37.16±6.08 44.79±6.11 97.717 0.000 0.81±0.25 1.20±0.24 1.55±0.26 123.465 0.000 0.73±0.18 1.06±0.23 1.39±0.25 132.851 0.000

        2.4 ANXA7、E-cadherin 與分化、 凋亡相關(guān)性分析ANXA7、E-cadherin 與胃癌分化程度、凋亡指數(shù)均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表5。

        表5 ANXA7、E-cadherin與分化相關(guān)性分析

        3 討論

        近年來研究發(fā)現(xiàn),胃癌患者中很多異?;?、蛋白、 細(xì)胞因子等通過各種途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲、生長、轉(zhuǎn)移,與胃癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),因此研究這些基因、蛋白、細(xì)胞因子,將其應(yīng)用于臨床,可能有助于評估胃癌預(yù)后,并可能為胃癌治療提供生物學(xué)治療靶點(diǎn),提高癌細(xì)胞殺傷率,最大程度擴(kuò)大患者受益[11]。

        膜聯(lián)蛋白家族在動植物中均廣泛分布,包含5個家族(A、B、C、D、E),均擁有磷酸化位點(diǎn)、蛋白調(diào)節(jié)區(qū)域即獨(dú)特功能N 端結(jié)構(gòu)域、鈣結(jié)合位點(diǎn),而N端結(jié)構(gòu)域長度和序列不同是家族成員間主要差異,決定了不同生物學(xué)活性和功能,其中ANXA7 定位于人體染色體10q21,有促進(jìn)細(xì)胞分泌、調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和周期、參與信號傳導(dǎo)等多方面功能[12]。動物學(xué)實(shí)驗(yàn)表明,上調(diào)ANXA7 可促進(jìn)肝癌細(xì)胞遷移[13]。Huang Y 等[14]發(fā)現(xiàn),無論是通過 RNA 干擾(RNAi)技術(shù)在基因水平下調(diào)ANXA7 還是在蛋白質(zhì)水平上使用針對ANXA7 抗體, 抑制ANXA7 表達(dá)均可誘導(dǎo)凋亡并降低肝癌細(xì)胞侵襲和遷移能力。Yuan HF 等[15]研究指出,ANXA7 在胃癌中陽性表達(dá)率為65.3%,且陽性患者生存率明顯低于陰性患者??梢夾NXA7 與惡性腫瘤生物學(xué)行為有關(guān),可能是影響患者預(yù)后因素。本研究對此進(jìn)行探討發(fā)現(xiàn),胃癌組血清ANXA7、E-cadherin 均較對照組、良性胃病組高(P<0.05),而對照組與良性胃病組血清ANXA7、E-cadherin 比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),表明ANXA7 與胃癌有關(guān)。且高、中、低分化血清及胃癌組織 ANXA7 依次升高(P<0.05),提示 ANXA7可能與胃癌分化程度有關(guān)。進(jìn)一步進(jìn)行Spearman分析發(fā)現(xiàn),ANXA7 與胃癌分化程度呈負(fù)相關(guān) (P<0.05),直接佐證了以上結(jié)果,說明高表達(dá)ANXA7是胃癌低分化獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

        E-cadherin 主要存在于細(xì)胞外基質(zhì)或細(xì)胞表面中[16]。Stewart CJ 等[17]研究通過觀察 12 例宮頸癌患者發(fā)現(xiàn),50%宮頸癌患者在疾病早期E-cadherin即呈陽性表達(dá)。Liu M 等[18]研究指出,E-cadherin 陽性表達(dá)可視為上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)標(biāo)志物,而 EMT 賦予了細(xì)胞轉(zhuǎn)移和入侵能力。亦有研究指出,未分化/去分化子宮內(nèi)膜癌E-cadherin 明顯高于高級子宮內(nèi)膜樣腺癌和透明細(xì)胞腺癌[19]??梢奅-cadherin 與惡性腫瘤微環(huán)境變化、分化程度有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn),胃癌組血清E-cadherin 均較對照組高 (P<0.05), 提示 E-cadherin 與胃癌有關(guān)。且高、中、低分化血清及胃癌組織 E-cadherin 依次升高(P<0.05),說明 E-cadherin可能與胃癌分化程度凋亡有關(guān)。進(jìn)一步進(jìn)行Spearman 分析發(fā)現(xiàn),E-cadherin 與胃癌分化程度呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),驗(yàn)證了以上結(jié)果,表明E-cadherin 高表達(dá)亦是胃癌低分化獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

        分化程度可反映腫瘤細(xì)胞惡性程度。通常對臨床分期相同惡性腫瘤患者,分化程度越高,預(yù)后越好[20]。從治療角度講,分化程度可指導(dǎo)臨床選取對應(yīng)治療手段,因此腫瘤細(xì)胞分化程度是癌癥診斷和治療中一個重要參考數(shù)據(jù)。根據(jù)以往研究,腫瘤細(xì)胞分化程度與細(xì)胞凋亡、增殖具有相關(guān)性[21]。而本研究結(jié)果證實(shí),ANXA7、E-cadherin 均與胃癌分化程度有關(guān),可為臨床評估胃癌分化程度、預(yù)后判斷、治療方法選取提供參考。此外本研究還發(fā)現(xiàn),ANXA7 ROC 曲線下面積為0.847,以>67.63 ng/L 作為臨界值,對胃癌診斷敏感性為75.50%,特異性為81.00%,E-cadherin ROC 曲線下面積為 0.827,以>30.05 ng/ml 作為臨界值,對胃癌診斷敏感性為68.00%,特異性為87.00%;ANXA7+E-cadherin ROC 曲線下面積為0.921,以兩者均陽性為陽性標(biāo)準(zhǔn),對胃癌診斷敏感性為81.00%,特異性為88.00 %。提示ANXA7、E-cadherin 用于胃癌診斷亦具有較高參考價值,且ANXA7 聯(lián)合E-cadherin 診斷特異度較高。

        綜上所述,胃癌患者血清ANXA7、E-cadherin高表達(dá),可用于胃癌診斷,且與胃癌分化程度均呈負(fù)相關(guān)。

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