肖凌云，慕珂珂，魏曉杰

（中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九八八醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 鄭州450007）

小兒支氣管肺炎是臨床兒科常見的呼吸道疾病，其病癥具有高發(fā)病率和高死亡率的特征，會(huì)嚴(yán)重影響到患兒身體健康正常發(fā)育。小兒支氣管肺炎的致病因素多與患兒自身器官尚未發(fā)育完善和免疫功能低下感染細(xì)菌、支原體等所導(dǎo)致，病情發(fā)展嚴(yán)重時(shí)會(huì)對(duì)患兒的生命安全造成嚴(yán)重威脅[1]。普通支氣管肺炎的病情較輕,在發(fā)展成重癥支氣管肺炎病情會(huì)快速進(jìn)展，累及到多個(gè)臟器，治療的療效會(huì)欠佳。對(duì)小兒支氣管肺炎的患兒在早期進(jìn)行診斷進(jìn)行及時(shí)的合理治療對(duì)患者的預(yù)后有著重要意義。根據(jù)對(duì)小兒支氣管肺炎的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究，目前認(rèn)為除了外來病原體的直接侵害與患者的機(jī)體免疫所相關(guān)，患兒自身的免疫系統(tǒng)、免疫功能所發(fā)育尚未健全才是小兒支氣管肺炎發(fā)展的重要原因[2]。對(duì)機(jī)體細(xì)胞免疫水平進(jìn)行分析判斷的重要指標(biāo)就是對(duì)淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè),對(duì)當(dāng)前機(jī)體的免疫狀態(tài)、功能可進(jìn)行準(zhǔn)確反映[3]。對(duì)淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)采用流式細(xì)胞術(shù)，其具有敏感、特異、高通量、單細(xì)胞分析、多參數(shù)等優(yōu)點(diǎn)。本研究對(duì)T 淋巴細(xì)胞亞群與NK 細(xì)胞在小兒支氣管肺炎中的變化及意義進(jìn)行探討，選取了2015 年2 月-2019 年8月我院收治的80 例支氣管肺炎患者的病例進(jìn)行回顧性研究分析，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2015 年 2 月-2019 年 8 月我院收治的80 例支氣管肺炎患兒作為研究對(duì)象，分別為普通肺炎組與ICU 重癥肺炎組。普通肺炎組53 例患兒，男 32 例，女 21 例，年齡為 1～8 歲，平均年齡為 4.63±2.75 歲，支氣管肺炎病程為 1～7 天，平均病程為4.73±2.64 天，臨床表現(xiàn)：發(fā)熱48 例、咳嗽 50 例、啰音 45 例、氣喘 47 例、肺部 X 線陰影51 例 。重癥肺炎組 27 例患兒,男 16 例，女 11 例，年齡為 1～8 歲，平均年齡為 4.82±2.51 歲，支氣管肺炎病程為 1～15 天，平均病程為 5.16±3.01 天，臨床表現(xiàn)：發(fā)熱 26 例、咳嗽 25 例、啰音 25 例、氣喘24 例、肺部X 線陰影27 例；一般資料經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)算結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ⑴所有均病患符合《實(shí)用兒科學(xué)》中對(duì)小兒支氣管肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。⑵均為近兩周無感染史患兒。⑶均經(jīng)胸部X 線檢查確診。⑷家屬均簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ⑴于1 個(gè)月內(nèi)存在免疫藥物治療史。⑵合并患有較為嚴(yán)重肝腎系統(tǒng)、 心力衰竭障礙、先天性免疫系統(tǒng)障礙的患兒。⑶合并患有其他器質(zhì)性病變及嚴(yán)重應(yīng)激狀態(tài)。

1.3 方法 兩組患者均于入院后空腹采用真空抗凝管外周抽取靜脈血。每例患者抽取的血液標(biāo)本對(duì)應(yīng)兩支流式專用管，編號(hào)A、B。將試劑CD3/CD8/CD45/CD4 20μL，與抗凝全血混勻 50μL；將 CD3／CD1 6+56／CD45／CD19 20μL 加入 B 試管中，與抗凝全血混勻50μL，均置于螺旋振蕩器上再次進(jìn)行充分混勻。放置于室溫（20～25℃）避光處反應(yīng)15 分鐘。將1X FACS 溶血素加入每根試劑管0.45ml，混勻后放置室溫避光處反應(yīng)15min, 進(jìn)行離心分離。將生理鹽水0.5ml 加入試管中混勻，放入流式細(xì)胞檢測(cè)儀即可檢測(cè)出患者NK 細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞。

1.4 觀察指標(biāo) ⑴對(duì)兩組患者進(jìn)行外周血T 淋巴細(xì)胞亞群變化檢測(cè)。⑵對(duì)兩組患者進(jìn)行外周血NK細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞變化檢測(cè)。⑶對(duì)兩組患者臨床不適癥狀發(fā)生持續(xù)時(shí)間進(jìn)行比較。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法：本試驗(yàn)采取統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS21.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其中計(jì)數(shù)資料用（%）表示，技數(shù)+資料采用 χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采取“（±s）”表示，血糖值為計(jì)量資料，用t 檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平為0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般資料比較 對(duì)普通肺炎組與重癥肺炎組年齡、性別、病程一般資料進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組患者一般資料比較（±s）[n(%)]

表1 兩組患者一般資料比較（±s）[n(%)]

組別 n 病程（天） 年齡(歲)性別男女臨床表現(xiàn)發(fā)熱 咳嗽 氣喘 啰音 肺部X 線陰影普通肺炎組重癥肺炎組t P 53 27- -16 19 0.009 0.923 25 22 4.73±2.64 5.16±3.01 0.656 0.513 4.63±2.75 4.82±2.51 0.712 0.478 48 26 0.847 0.358 50 25 0.093 0.760 47 25 0.304 0.581 45 24 0.239 0.625 51 27 1.045 0.307

2.2 比較兩組患者T 淋巴細(xì)胞亞群比較 普通肺炎組與重癥肺炎組CD8+無顯著性變化，比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），普通肺炎組 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+表達(dá)水平均明顯高于重癥肺炎組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s，%)

表2 兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s，%)

組別普通肺炎組重癥肺炎組n 53 27 t P--CD3+68.47±5.21 54.31±7.68 9.746＜0.001 CD4+ CD8+37.55±2.13 32.36±3.41 8.356＜0.001 26.37±3.58 25.81±4.72 0.592 0.555 CD4+/CD8+1.49±0.27 1.25±0.41 3.138 0.002

2.3 兩組患者NK 細(xì)胞與B 細(xì)胞比較 普通肺炎組NK 細(xì)胞CD16+CD56+表達(dá)水平明顯高于重癥肺炎組, 普通肺炎組B 細(xì)胞CD19+表達(dá)水平明顯低于重癥肺炎組,比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表3。

表3 兩組患者NK細(xì)胞與B細(xì)胞比較(±s，%)

表3 兩組患者NK細(xì)胞與B細(xì)胞比較(±s，%)

組別普通肺炎組重癥肺炎組CD16+CD56+53 27 n t P--14.47±5.31 8.31±7.28 4.314＜0.001 CD19+16.35±4.81 21.74±3.55 5.145＜0.001

2.4 兩組患者臨床癥狀持續(xù)時(shí)間比較 普通肺炎組患者臨床癥狀出現(xiàn)咳嗽、發(fā)熱、啰音、氣喘、肺部X 線陰影的持續(xù)時(shí)間均明顯低于重癥肺炎組患者，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

3 討論

在支氣管肺炎據(jù)病情可分為普通型及重癥型兩大類別,而重癥型肺炎是兒童最主要的死亡原因之一[5]。近年以來，臨床在抗感染治療上已取得了較大進(jìn)步,但是重癥型支氣管肺炎依舊是呼吸系統(tǒng)感染臨床治療的挑戰(zhàn)。對(duì)支氣管肺炎患兒進(jìn)行早期診斷對(duì)癥治療是對(duì)支氣管肺炎的高病死亡率進(jìn)行有效降低的關(guān)鍵,對(duì)患者預(yù)后判斷有著重要的價(jià)值[6]。據(jù)研究，支氣管重癥肺炎患者的發(fā)生與病情發(fā)展的過程中不僅有病原菌的感染參與,更與患者自身的炎癥因子過度表達(dá)有一定的關(guān)聯(lián)性，患者自身機(jī)體大量炎癥因子的釋放會(huì)引發(fā)全身性的炎癥反應(yīng)綜合征[7-9]。支氣管肺炎患者機(jī)體急性反應(yīng)是內(nèi)源性致熱源和重要的炎癥介質(zhì),均主要是由一些細(xì)胞因子進(jìn)行，其細(xì)胞因子均可由T 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生，會(huì)起到增強(qiáng)患者自身機(jī)體破壞炎癥的效用[10]。

表4 兩組患者臨床癥狀持續(xù)時(shí)間比較（±s，d）

表4 兩組患者臨床癥狀持續(xù)時(shí)間比較（±s，d）

組別 n 咳嗽 發(fā)熱 啰音 氣喘 肺部X 線陰影普通肺炎組重癥肺炎組53 27 t P- -5.27±0.73 8.64±0.54 21.189＜0.001 3.41±0.67 5.36±0.51 13.275＜0.001 6.41±0.74 7.18±0.62 4.637＜0.001 5.39±0.72 6.88±0.91 7.992＜0.001 7.42±1.33 9.02±1.61 4.734＜0.001

據(jù)研究，支氣管肺炎的發(fā)病機(jī)制除了病原體對(duì)患兒自身機(jī)體的直接侵害還和患兒的機(jī)體免疫功能所相關(guān)[11]。外周血淋巴細(xì)胞亞群與年齡有一定的關(guān)聯(lián)，特別是嬰幼兒，小兒尚未發(fā)育完全的免疫系統(tǒng)也是其容易發(fā)生呼吸道疾病感染的重要因，而支氣管肺炎是由多種病原體和其他因素所綜合導(dǎo)致的肺部炎癥[12]。在隨著人們對(duì)支氣管肺炎的病理、生理機(jī)制發(fā)病過程不斷研究中，發(fā)現(xiàn)患者會(huì)存在細(xì)胞免疫功能的異常現(xiàn)象,在其中會(huì)對(duì)T 淋巴細(xì)胞亞群有較多的檢測(cè)報(bào)道。T 細(xì)胞在胸腺中發(fā)育成熟的淋巴細(xì)胞會(huì)進(jìn)入到外周血中，對(duì)機(jī)體免疫功能進(jìn)行參與并調(diào)節(jié)，淋巴細(xì)胞其具體可分為B 淋巴細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞、NK 細(xì)胞。機(jī)體的免疫平衡狀態(tài)是依賴于各淋巴細(xì)胞亞群間的相互制約、協(xié)調(diào)，形成適度的免疫應(yīng)答[13-15]。在機(jī)體受到病毒、細(xì)菌等感染侵害時(shí)，會(huì)導(dǎo)致免疫機(jī)制出現(xiàn)失調(diào)現(xiàn)象，淋巴細(xì)胞亞群會(huì)表現(xiàn)出異常的數(shù)量，機(jī)體免疫絮亂現(xiàn)象出現(xiàn)，會(huì)降低免疫功能從而引發(fā)一系列疾病。

CD3+細(xì)胞均為外周血成熟的 T 淋巴細(xì)胞，CD4+、CD8+不同的亞群則是據(jù) CD4、CD8不同的表達(dá)情況來區(qū)分，各群均具有特殊的免疫功能。在本研究中,采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)了支氣管重癥肺炎患兒與普通支氣管肺炎組的T 淋巴細(xì)胞亞群和B 淋巴細(xì)胞亞群及NK 細(xì)胞計(jì)數(shù)。在進(jìn)行比較時(shí)，重癥肺炎組患兒T 淋巴細(xì)胞及NK 細(xì)胞的計(jì)數(shù)均低于普通肺炎組，而B 淋巴細(xì)胞均會(huì)高于普通肺炎組。表明支氣管肺炎重癥患者的細(xì)胞免疫功能出現(xiàn)降低，B 淋巴細(xì)胞更高則表明肺炎重癥患者的細(xì)胞免疫降低與患者的疾病發(fā)展嚴(yán)重程度所相關(guān),而B 淋巴細(xì)胞會(huì)與機(jī)體一起提高抗感染的機(jī)制,代償性會(huì)升高[16]。當(dāng)支氣管肺炎發(fā)生時(shí)，T 淋巴細(xì)胞亞群會(huì)異常分布，B 細(xì)胞分泌、 表達(dá)的血清免疫球蛋白會(huì)隨T 細(xì)胞進(jìn)行調(diào)節(jié), 當(dāng) T 細(xì)胞 CD3+、CD4+功能減少低下時(shí)，會(huì)減少協(xié)助B 細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力[17]。而T 淋巴細(xì)胞 CD3+、CD8+在增加時(shí)會(huì)對(duì) T 細(xì)胞、B 細(xì)胞和其余免疫細(xì)胞的增值和分化。支氣管重癥肺炎患者的T 淋巴細(xì)胞出現(xiàn)大量凋亡降低總數(shù)時(shí)，由亞群的變化會(huì)帶來免疫功能的絮亂,導(dǎo)致患者感染的因素會(huì)抑制機(jī)體的細(xì)胞免疫功能[18]。出現(xiàn)免疫抑制會(huì)使患者容易出現(xiàn)并發(fā)感染的癥狀,對(duì)感染難以控制，從而導(dǎo)致病情出現(xiàn)惡化的現(xiàn)象[19]。對(duì)患者T 細(xì)胞的持續(xù)降低進(jìn)行關(guān)注則可對(duì)患者疾病發(fā)展程度進(jìn)行有效評(píng)估,例如患者T 淋巴細(xì)胞CD4+水平出現(xiàn)降低且在經(jīng)過1 周的積極治療后持續(xù)下降，無上升趨勢(shì)則表明患者可能會(huì)預(yù)后不良。與本研究中重癥肺炎組患者的T 淋巴細(xì)胞亞群水平均低于對(duì)照組結(jié)果相同。NK 細(xì)胞為的主要表達(dá)為CD15+、CD16+分子，是天然免疫細(xì)胞系統(tǒng)中的重要細(xì)胞，對(duì)病毒與細(xì)菌的感染進(jìn)行主要控制，對(duì)體內(nèi)環(huán)境進(jìn)行穩(wěn)定調(diào)節(jié)，從而產(chǎn)生細(xì)胞因子，殺傷腫瘤細(xì)胞，建立獲得性免疫與先天性免疫的聯(lián)系[20]?？蓪?duì)病原體和已感染細(xì)胞進(jìn)行直接殺傷，在機(jī)體免疫的調(diào)控中發(fā)揮重要作用，對(duì)其表達(dá)分子水平進(jìn)行有效測(cè)定可對(duì)機(jī)體的免疫活性細(xì)胞功能狀態(tài)進(jìn)行準(zhǔn)確反映。

綜上所述，T 淋巴細(xì)胞亞群與NK 細(xì)胞可作為對(duì)重癥肺炎患者的評(píng)價(jià)重要指標(biāo)，免疫水平的改變代表機(jī)體免疫免疫功能的改變，可對(duì)病情程度進(jìn)行反映，對(duì)疾病的預(yù)后轉(zhuǎn)歸有效判斷，對(duì)臨床治療有著指導(dǎo)效用，對(duì)免疫制劑治療的使用提供一定的理論依據(jù)，有利于縮短患者病程對(duì)疾病進(jìn)行更好的控制。