朱春玲，魏素梅，侯遠(yuǎn)沛，劉成永

（徐州市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 徐州 221004）

非結(jié)核分枝桿菌廣泛分布于水、 土壤和空氣中，容易導(dǎo)致免疫功能低下患者的感染[1]。從1990年-2010 年全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告顯示非結(jié)核分枝桿菌的分離率逐年上升[2]。非結(jié)核分枝桿菌的感染存在地域差異，總體上呈現(xiàn)出南方高于北方，沿海高于內(nèi)陸，溫暖地區(qū)高于寒冷地區(qū)等特點(diǎn)[3]。徐州地區(qū)介于沿海與內(nèi)陸之間，非結(jié)核分枝桿菌的菌種分布及耐藥情況未有詳盡的報(bào)道，分析本院近3 年非結(jié)核分枝桿菌感染及藥敏情況，為臨床診治提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 標(biāo)本來源 92 例標(biāo)本來源于 2016 年 1 月-2018 年12 月本院門診和病房患者,男57 例,女35例，年齡 18~95 歲,平均年齡 54.85±21.21 歲。其中痰液60 例，肺泡灌洗液18 例，菌株13 例，膿液1例。

1.2 試劑和方法 分枝桿菌菌種鑒定試劑由亞能生物技術(shù)(深圳)有限公司提供，采用PCR-反向點(diǎn)雜交酶顯色法。先將痰液、肺泡灌洗液和膿液用消化液消化后，加入特定的引物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物和醋酸纖維膜上的分枝桿菌探針雜交,通過酶顯色反應(yīng),鑒定為何種分枝桿菌。藥敏實(shí)驗(yàn)采用《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》中的比例法進(jìn)行[2],所用的 8 種藥物分別為:異煙肼(INH)、利福平(RFP)、氧氟沙星(OFX)、乙胺丁醇(EMB)、丙硫異煙胺(TH13 21)、卡那霉素(KAN)、阿米卡星(AMK)、環(huán) 絲氨 酸（CS）,培養(yǎng)基為珠海貝索生物有限公司提供。

1.3 儀器選擇 PCR 擴(kuò)增儀為天隆生物科技有限公司提供，型號(hào)為TI988；恒溫雜交儀為亞能生物技術(shù)(深圳)有限公司提供，型號(hào)為YN-H16。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 PEMS 3.1 醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，兩組均數(shù)的比較采用t 檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

徐州市2018 年非結(jié)核分桿菌的感染率與2017、2016 年相比雖有所增高，但差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （χ2=2.39,1.92;P=0.12,0.16），92 例非結(jié)核分桿菌不同年份的構(gòu)成比,見表1。

表1 92 例非結(jié)核分桿菌不同年份的構(gòu)成比

92 例患者中男性57 例，女性35 例，性別相比統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（χ2=10.52,P=0.00）；60 歲以上患者48 例，60 歲以下患者44 例，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.35,P=0.56）。

92 例非結(jié)核分枝桿菌采用基因芯片法鑒定出的菌種構(gòu)成比為： 胞內(nèi)分枝桿菌64.13%（59/92），堪薩斯分枝桿菌18.48%（17/92），膿腫分枝桿菌5.43%（5/92），龜分枝桿菌 4.35%（4/92），戈登分枝桿菌 3.26%（3/92），鳥分枝桿菌 3.26%（3/92），淺黃分枝桿菌 1.09%（1/92）。

92 例非結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平的耐藥率為89.13%（82/92）、異煙肼為 97.82%（90/92）、氧氟沙星為 84.78%（78/92）、乙胺丁醇為 90.22%（83/92）、丙硫異煙胺84.78%（78/92）、卡那霉素77.17%（71/92）、 阿米卡星為 60.87%（56/92）、 環(huán)絲氨酸為79.34%（73/92）。92 例非結(jié)核分枝桿菌對(duì) 8 種抗結(jié)核藥的耐藥情況，見表2。

3 討論

非結(jié)核分枝桿菌與結(jié)核分枝桿菌在形態(tài)上難以區(qū)分，臨床癥狀和影像學(xué)表現(xiàn)極為相似，治療方案卻有所不同。以往菌種鑒定大多采用傳統(tǒng)的羅氏培養(yǎng)法，耗時(shí)長(zhǎng)，作為“金標(biāo)準(zhǔn)”的直接同源基因或序列比較法操作繁瑣，設(shè)備昂貴，一般實(shí)驗(yàn)室難以開展[4]，為滿足臨床快速診斷的需要，本院引進(jìn)深圳亞能生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的分枝桿菌菌種鑒定試劑，該試劑采用PCR-反向點(diǎn)雜交酶顯色法,在一張纖維素膜上一次可鑒定出結(jié)核分枝桿菌和22 種非結(jié)核分枝桿菌菌種類型，快速方便[5]，為臨床診斷和治療提供科學(xué)依據(jù)。

據(jù)報(bào)道全球非結(jié)核分枝桿菌的感染率呈上升趨勢(shì)[6]，2018 年徐州市非結(jié)核分枝桿菌的感染率與前兩年相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但有所增高；男性患者的感染率顯著高于女性,與北京市的報(bào)道相同[7]，60 歲以上老年患者與60 歲以下的中青年患者相比非結(jié)核分枝桿菌的總感染率差異不明顯,而張匯征等人的研究認(rèn)為，對(duì)于不同種類的非結(jié)核分枝桿菌,感染者的年齡分布和性別比例都有所不同[8]。

徐州市非結(jié)核分枝桿菌以胞內(nèi)分枝桿菌和堪薩斯分枝桿菌感染為主,與北京市和甘肅省的報(bào)道類似[7,9]，與重慶和貴州的報(bào)道略有不同[10-11]，與自貢市的感染情況差異較大[12]，提示非結(jié)核分枝桿菌存在一定的地區(qū)差異,因此各個(gè)地區(qū)應(yīng)該建立本地的菌種譜,為本地區(qū)非結(jié)核分枝桿菌患者的防治提供參考。

表2 92 例非結(jié)核分枝桿菌對(duì)8 種抗結(jié)核藥的耐藥情況[n(%)]

非結(jié)核分枝桿菌在自然界分布廣泛,容易導(dǎo)致免疫力低下患者的機(jī)會(huì)感染[13]，其毒性和致病性低于結(jié)核分枝桿菌,對(duì)一線抗結(jié)核藥物具有高度原始耐藥性,本組資料提示徐州市的非結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平和異煙肼具有較高的耐藥性,與臨近的宿遷市報(bào)道類似,與蘇州市的的藥敏結(jié)果存在一定的差異，尤其是丙硫異煙胺和阿米卡星的差異較大[14,15]，因此各個(gè)地區(qū)應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果合理用藥,有利于患者早日康復(fù)。

總之，非結(jié)核分枝桿菌對(duì)一線抗結(jié)核藥物具有高度耐藥性,在患者治療前采用基因檢測(cè)法可快速準(zhǔn)確的鑒定出分枝桿菌的類型,根據(jù)藥敏結(jié)果精準(zhǔn)治療，既節(jié)約治療費(fèi)用，又利于患者的康復(fù)。