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        血清肝再生磷酸酶-3鑒別診斷高、低級(jí)別漿液性卵巢癌價(jià)值

        2021-05-17 09:54:36鄒春玲王黎明沈曉萍
        關(guān)鍵詞:高級(jí)別級(jí)別卵巢癌

        鄒春玲 王黎明 沈曉萍

        1.山東省龍口市人民醫(yī)院(265701);2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院

        漿液性卵巢癌是卵巢癌最常見的惡性腫瘤類型,臨床上常將其分為高、低級(jí)別漿液性卵巢癌,二者在形態(tài)學(xué)、組織學(xué)改變以及臨床治療與預(yù)后等方面均存在較大差異[1]。低級(jí)別漿液性卵巢癌發(fā)展緩慢,預(yù)后良好;高級(jí)別漿液性卵巢癌進(jìn)展迅速侵襲性強(qiáng),預(yù)后較差[2-3]。因此,術(shù)前準(zhǔn)確鑒別對(duì)治療及預(yù)后有重要臨床意義。但在臨床診斷中,因不同級(jí)別的腫瘤可能存在組織學(xué)形態(tài)的交叉和重疊,增加了臨床實(shí)踐難度。因此,亟需尋找有效診斷漿液性卵巢癌的生物標(biāo)志物,準(zhǔn)確鑒別高、低級(jí)別漿液性卵巢癌,為臨床確定治療方案提供依據(jù)。肝再生磷酸酶-3(PRL-3)在晚期卵巢癌中的表達(dá)水平明顯高于早期卵巢癌,與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[4]?;诖耍狙芯刻接懷錚RL-3對(duì)高、低級(jí)別漿液性卵巢癌的鑒別價(jià)值,為術(shù)前鑒別兩種卵巢癌提供依據(jù)。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選取2015年3月—2019年1月本院接受手術(shù)治療的漿液性卵巢癌患者106例作為觀察組,按美國(guó)M.D.Anderson腫瘤中心提出的分級(jí)系統(tǒng)[5],將患者分為低級(jí)別45例(低級(jí)別組),高級(jí)別61例(高級(jí)別組)。另選取同期本院行常規(guī)體檢的健康女性98例為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn):①術(shù)后病理切片確認(rèn)為漿液性卵巢癌;②術(shù)前3個(gè)月未進(jìn)行放療或化療;③臨床病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他惡性腫瘤;②合并患有心臟、肝、腎等疾??;③合并自身免疫疾病。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。

        1.2 檢測(cè)方法

        采集患者晨空腹靜脈血抗凝離心,取血清-20℃保存。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)儀檢測(cè)血清PRL-3表達(dá)量??俁NA提取:從-20℃取出血清樣本,Trizol試劑(日本TaKaRa公司)提取血清總RNA,異丙醇沉淀濃縮后75%酒精洗滌,干燥后加入100μl DEPC水,變性凝膠電泳檢測(cè)總RNA完整度,紫外分光光度計(jì)檢測(cè)所得RNA濃度。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng):取所得總RNA 2μg,按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京天根生化有限公司)說明書將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,-20℃保存。qRT-PCR反應(yīng)(反應(yīng)體系20μl):取cDNA模板2μl,10μl 2×SYBR Green PCR Master Mix,上下游引物各1 μl,DEPC水6μl,每個(gè)樣本設(shè)置3個(gè)平行。根據(jù)目的基因設(shè)計(jì)相應(yīng)上下游引物,以GAPDH為內(nèi)參,序列見表1。qRT-PCR反應(yīng)條件:95℃ 30s;95℃ 10 s、60℃ 30 s,45個(gè)循環(huán),qRT-PCR儀(賽默飛世爾科技中國(guó)有限公司)反應(yīng)。根據(jù)各樣本平均Ct值,采用2-ΔΔCt法計(jì)算PRL-3相對(duì)表達(dá)量。

        表1 PRL-3及內(nèi)參基因GAPDH引物序列

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        2 結(jié)果

        2.1 一般資料比較

        高級(jí)別組、低級(jí)別組、對(duì)照組年齡、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、患糖尿病及高血壓比例均無差異(P>0.05),高級(jí)別組FIGO分期[6]為Ⅲ-Ⅳ期患者比例高于低級(jí)別組(P<0.05)。見表2。

        表2 各組一般資料比較

        2.2 血清PRL-3 mRNA表達(dá)量比較

        血清中PRL-3表達(dá)水平高級(jí)別組最高(2.61±0.72),低級(jí)別組次之(1.39±0.69),對(duì)照組最低(1.16±0.43)(P<0.001)。

        2.3 不同F(xiàn)IGO分期患者血清PRL-3表達(dá)量比較

        血清PRL-3 mRNA表達(dá)量,低級(jí)別組中Ⅰ~Ⅱ期患者(1.31±0.62)與Ⅲ~Ⅳ期患者(1.68±0.51)比較無差異(t=1.652,P=0.106),高級(jí)別組中Ⅰ~Ⅱ期患者(2.32±0.58)與Ⅲ~Ⅳ期患者(2.67±0.69)比較也無差異(t=1.501,P=0.139)。

        2.4 血清PRL-3診斷高、低級(jí)別漿液性卵巢癌價(jià)值

        以血清PRL-3水平為檢測(cè)變量繪制ROC曲線,診斷高、低級(jí)別漿液性卵巢癌的ROC曲線下面積為0.887(95%CI:0.811~0.940),截?cái)嘀禐?.95,靈敏度為90.2%,特異性為77.8%。見圖1。

        圖1 血清PRL-3診斷高、低級(jí)別漿液性卵巢癌的ROC曲線

        3 討論

        漿液性卵巢癌是臨床常見的卵巢癌,早期診斷困難,其中高級(jí)別漿液性卵巢癌預(yù)后差,低級(jí)別漿液性卵巢癌預(yù)后較好[7]。血清PRL-3是一種蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶,在卵巢癌患者中呈高表達(dá),敲除PRL-3基因發(fā)現(xiàn),其可參與卵巢癌的腫瘤發(fā)生及惡性表型的維持[8]。PRL-3可促進(jìn)癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,提高癌細(xì)胞的侵襲、遷移能力,并能作用于下游蛋白或酶來調(diào)控多條信號(hào)通路,從而影響癌細(xì)胞的增殖和凋亡[9]。研究表明,PRL-3可通過抑制PTEN表達(dá)激活PI3K-AKT信號(hào)傳導(dǎo),從而導(dǎo)致上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,而上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是癌變過程中癌細(xì)胞入侵的關(guān)鍵步驟[10]。Zhang等[11]研究發(fā)現(xiàn),PRL-3與Ⅱa類組蛋白脫乙?;?(HDAC4)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合,導(dǎo)致HDAC4與心肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2A(MEF2A)和組蛋白分離,乙?;腗EF2A進(jìn)而與性別決定相關(guān)基因簇2(SOX2)啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合,促進(jìn)SOX2表達(dá),從而誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化為腫瘤干細(xì)胞。Liu等[12]研究結(jié)果顯示,PRL-3在卵巢癌中表達(dá)水平升高,敲除PRL-3基因能抑制卵巢癌細(xì)胞株A2780生長(zhǎng),推測(cè)PRL-3可通過抑制c-fos轉(zhuǎn)錄,參與調(diào)節(jié)整合素α2的信號(hào)通路,從而參與漿液性卵巢癌的轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示,漿液性卵巢癌患者血清PRL-3表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,且高級(jí)別患者表達(dá)量高于低級(jí)別患者,表明血清PRL-3在漿液性卵巢癌中高表達(dá),且隨著癌癥進(jìn)展而不斷升高。原因可能是PRL-3可通過調(diào)控多種信號(hào)通路,影響卵巢癌細(xì)胞的增殖和凋亡,并誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞向腫瘤干細(xì)胞轉(zhuǎn)化,從而參與漿液性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。本研究高、低級(jí)別漿液性卵巢癌Ⅰ-Ⅱ期、Ⅲ-Ⅳ期患者間均未見差異,提示FIGO分期對(duì)血清PRL-3表達(dá)量影響不大。既往研究表明,PRL-3-HDAC4-MEF2A / histones-SOX2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)軸可能是抑制卵巢癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的潛在治療靶標(biāo),PRL-3在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[11]。PRL-3可成為漿液性卵巢癌的潛在生物標(biāo)志物。因此本研究探討了PRL-3對(duì)漿液性卵巢癌的診斷價(jià)值,結(jié)果顯示血清PRL-3水平診斷高、低級(jí)別漿液性卵巢癌的AUC為0.887,截?cái)嘀禐?.95,靈敏度為90.2%,特異性為77.8%,提示PRL-3水平對(duì)高、低級(jí)別漿液性卵巢癌具有一定的診斷價(jià)值。PRL-3已被證明參與了多種腫瘤發(fā)生發(fā)展的環(huán)節(jié),目前已針對(duì)PRL-3為癌癥治療靶點(diǎn)展開了廣泛研究。本研究結(jié)果顯示PRL-3在卵巢癌中特異性表達(dá)且具有一定診斷價(jià)值,提示PRL-3有望成為漿液性卵巢癌的靶向治療位點(diǎn),針對(duì)不同級(jí)別患者采用不同治療方案,以期取得更好的臨床療效。

        綜上所述,漿液性卵巢癌患者血清中PRL-3表達(dá)上調(diào),且高級(jí)別患者表達(dá)量高于低級(jí)別患者,PRL-3對(duì)高、低級(jí)別漿液性卵巢癌有一定診斷價(jià)值。但由于本研究樣本量少,結(jié)果可能具有局限性,尚需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證PRL-3在臨床診斷及治療中的應(yīng)用價(jià)值。

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