肖懿慧，舒 娟，袁祖貽，劉睿辰

(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，陜西西安 710061)

血脂異常是動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病最重要的危險(xiǎn)因素[1]。載脂蛋白E(ApoE)是多種脂蛋白的重要結(jié)構(gòu)及功能蛋白質(zhì)，其基因多態(tài)性決定血脂水平[2]，是高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化性血管病的易感候選基因，可通過多種途徑參與機(jī)體脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)，從而影響機(jī)體血脂水平[3]。ApoE基因可形成6種基因型、3種基因表型[4]，不同ApoE基因型患者的血脂水平不同，并且與動(dòng)脈粥樣硬化、心腦血管疾病、阿爾茨海默病等多種疾病存在密切聯(lián)系[5]。近年來，ApoE 基因多態(tài)性與冠心病發(fā)病的關(guān)系成為了臨床研究的熱點(diǎn)。目前認(rèn)為ApoE4攜帶者的冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加[6]，但ApoE基因多態(tài)性與冠心病類型之間的關(guān)系未見報(bào)道。本研究探索陜西地區(qū)心血管疾病人群ApoE基因多態(tài)性的分布情況，并初步研究ApoE基因多態(tài)性和冠心病類型、血脂水平的相關(guān)性，為冠心病的預(yù)防和治療提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象選取2019年1月至2019年12月于西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院的心血管疾病患者11 533例，男性6 561例，女性4 982例，平均年齡(51.2±12.4)歲。所有入選者均為陜西地區(qū)(出生于陜西且在陜西境內(nèi)居住時(shí)間距離本次入組超過10年以上者)漢族人，并于入院24 h內(nèi)接受ApoE基因多態(tài)性檢測的心血管疾病患者。其中冠心病患者3 884例，非冠心病患者7 659例。冠心病組病例全部符合1979年WHO修訂的冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)出院診斷分為穩(wěn)定型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛、急性心肌梗死和缺血性心肌病。

1.2 儀器與試劑ApoE基因多態(tài)性檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)購自武漢友芝醫(yī)療科技有限公司，血液基因組DNA提取試劑盒購自天根生化科技有限公司，熒光定量PCR儀購自安捷倫科技有限公司, 全自動(dòng)生化分析儀為美國貝克曼庫爾特(型號(hào)為AU5800)產(chǎn)品。

1.3 ApoE 基因多態(tài)性檢測所有研究對(duì)象在入院24 h內(nèi)采血，取血前禁食12 h以上，取靜脈血2 mL，加入EDTA-K2抗凝，采用血液基因組DNA提取試劑盒提取DNA，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4 血脂水平檢測所有研究對(duì)象在入院24 h內(nèi)采血，取血前禁食12 h以上，取靜脈血2 mL經(jīng)3 000 r/min離心10 min后，取上清于全自動(dòng)生化分析儀檢測總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)水平。所有樣品均立即送檢。

1.5 基因型判定ApoE基因組分為3個(gè)基因表型組：長壽型基因E2型組(E2/E2、E2/E3)、野生型基因E3型組(E2/E4、E3/E3)、危險(xiǎn)型基因E4型組(E3/E4、E4/E4)。

2 結(jié) 果

2.1 ApoE基因多態(tài)性分布ApoE各基因型E2/E2、E2/E3、E3/E3、E2/E4、E4/E4和E3/E4比例分別為0.69%、11.66%、70.31%、1.17%、0.83%和15.34%，基因型組合中長壽型(E2/E2和E2/E3)、野生型(E3/E3和E2/E4)和危險(xiǎn)型(E3/E4和E4/E4)分別占比為12.35%、71.48%和16.17%，其中野生型基因E3型組比例最高。

2.2 冠心病和非冠心病心血管疾病患者ApoE基因型分布冠心病組患者中以野生型基因E3型分布頻率最高，為2 776例(71.47%)；其次是危險(xiǎn)型基因E4型，為625例(16.09%)；長壽型基因E2型相對(duì)較少，為483例(12.44%)。冠心病組和非冠心病組心血管疾病患者的3種基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

表1 冠心病和非冠心病組心血管疾病患者ApoE基因的分布情況

2.3 冠心病組患者ApoE基因型與血脂水平的關(guān)系與長壽型基因E2型組相比，野生型基因E3型組、危險(xiǎn)型基因E4型組的TC和LDL-C水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；與野生型基因E3型組相比，長壽型基因E2型組、危險(xiǎn)型基因E4型組的TG水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表2)。

2.4 冠心病不同類型與ApoE基因型的關(guān)系A(chǔ)poE基因型與冠心病類型具有相關(guān)性(P<0.001)；其基因型分布在缺血性心肌病與穩(wěn)定型、不穩(wěn)定型心絞痛組中差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.008)，與急性心肌梗死患者相比分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P>0.008，表3、表4)。

表2 冠心病患者ApoE基因型與血脂的關(guān)系

表3 冠心病類型與ApoE基因型的關(guān)系

表4 冠心病各類型相互間與ApoE基因型的關(guān)系

3 討 論

ApoE主要在肝臟和腦組織中合成，參與脂蛋白的轉(zhuǎn)化和代謝、脂肪的水解和免疫調(diào)節(jié)等。ApoE基因作為受體和受體相關(guān)蛋白的配體，對(duì)調(diào)節(jié)脂蛋白的代謝起重要作用[7]。人類ApoE基因定位于第19號(hào)染色體上，包含4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子，含有3種等位基因(E2、E3、E4)，可形成6種基因型：3種純合子(E2/2、E3/3、E4/4)和3種雜合子(E2/3、E2/4、E3/4)[8]。其表型可分為長壽型基因E2型(E2/E2、E2/E3)、野生型基因E3型(E2/E4、E3/E3)和危險(xiǎn)型基因E4型(E3/E4、E4/E4)[9]。本研究中，陜西地區(qū)漢族心血管疾病患者ApoE基因型分布為E3型最多，占71.48%；E4型次之，為16.17%；E2型最少，為12.35%。這與武漢地區(qū)和沈陽地區(qū)的研究結(jié)果[10-11]大致相似，但E2型分布與沈陽地區(qū)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；E3和E4型分布與武漢地區(qū)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這可能與入選樣本量、入選人群、疾病種類有關(guān)，也可能說明ApoE基因型分布確實(shí)存在地域性差異。

有文獻(xiàn)報(bào)道，與健康人群相比，冠心病人群中E4型等位基因的分布頻率明顯升高，且E4型等位基因攜帶者患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)增加40%[12-13]。本研究分析了冠心病組與非冠心病組心血管疾病患者的ApoE基因分布差異，發(fā)現(xiàn)二者在ApoE基因分布上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這個(gè)結(jié)果與既往文獻(xiàn)報(bào)道不一致，可能原因?yàn)锳poE基因分布與多種因素相關(guān)，如動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、血脂水平、腦血管疾病等，而本研究的對(duì)照組雖然無冠心病，但存在其他危險(xiǎn)因素及心血管疾病，這可能也說明ApoE基因型不能像高血脂一樣作為冠心病的危險(xiǎn)因素。

有研究表明，E2等位基因可導(dǎo)致LDL水平下降，而E4等位基因則有明顯升高LDL的作用[9]。本研究中，與E2型組相比，E3、E4型組TC、LDL-C明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；與E3型組相比，E2型、E4型組TG升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這不同于孫謙等[3]報(bào)道的ApoE的3組表型中TG、TC、LDL-C和HDL-C水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但與DAS等[14]報(bào)道的TC水平在各表型組中依次為E4>E3>E2的結(jié)果相一致。這些不同的結(jié)論提示ApoE基因多態(tài)性與血脂水平具有相關(guān)性，但二者之間明確的關(guān)聯(lián)性目前仍不完全明確，這可能與不同的ApoE等位基因介導(dǎo)VLDL、LDL和HDL降解的速率不同，還需要更大樣本量和設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)呐R床研究證實(shí)其關(guān)系。

有報(bào)道主要關(guān)注ApoE基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性[15-17]，本研究重點(diǎn)分析了ApoE基因多態(tài)性與冠心病類型的相關(guān)性(P<0.001)。本研究結(jié)果顯示ApoE基因型與冠心病類型具有明顯相關(guān)性，其分布在缺血性心肌病與穩(wěn)定型心絞痛和不穩(wěn)定型心絞痛中差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.008 3)，但與急性心肌梗死相比分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.0083)，這個(gè)新發(fā)現(xiàn)可能提示，ApoE基因多態(tài)性不僅與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)，也與心肌損害和重構(gòu)具有相關(guān)性。

綜上所述，ApoE基因多態(tài)性與血脂水平和冠心病具有相關(guān)性，但與不同類型冠心病的關(guān)系尚不明確，需要更大樣本量的臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行研究，為更有效防治冠心病提供相關(guān)依據(jù)。