鐘達(dá)源，李蘭，馬若夢(mèng)，蔣成婷，鄧奕輝

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208)

根據(jù)世界衛(wèi)生組織的報(bào)告，中風(fēng)是全球第二大死亡原因[1]。僅在2016年，就有約550萬(wàn)人死于中風(fēng)[2]。根據(jù)中國(guó)最新的人口普查結(jié)果，中國(guó)的中風(fēng)發(fā)生率約為1.6%，其中缺血性中風(fēng)(IS)占21.4%[3]。循證醫(yī)學(xué)研究表明，大部分缺血性中風(fēng)是由于血凝塊阻塞腦血管而引起的[4]，血漿纖維蛋白原升高是腦血管疾病的重要致病因素[5], 其含量升高會(huì)引起血漿黏度上升,增加紅細(xì)胞和血小板聚集性,提高全血黏度,促使血栓形成，從而導(dǎo)致缺血性事件的發(fā)生。研究表明，在缺血性腦血管病患者及其高危人群中，凝血酶活性普遍增強(qiáng)[6]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在大腦中動(dòng)脈閉塞大鼠模型的缺血中心區(qū)域，凝血酶的活性顯著增加，凝血酶原基因表達(dá)上調(diào)[7]。體外實(shí)驗(yàn)顯示，凝血酶的非蛋白水解活性可以激活小膠質(zhì)細(xì)胞[8]，增強(qiáng)小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬作用，從而對(duì)神經(jīng)元造成損傷[9]。中醫(yī)學(xué)并無(wú)缺血性中風(fēng)這一病名，根據(jù)其癥狀表現(xiàn)，將其歸屬于 “中風(fēng)”，其發(fā)病多責(zé)之于“虛、風(fēng)、火、痰、瘀”[10]。后世醫(yī)家更強(qiáng)調(diào)“瘀”的作用[11]。丹參是雙子葉唇形科植物丹參的干燥根和根莖,具有活血化瘀的功效。丹參酮ⅡA是從丹參的根中分離出的二萜醌,對(duì)IS的治療具有確切療效。董玉寶[12]的研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮ⅡA聯(lián)合尼莫托普治療創(chuàng)傷性腦梗死的臨床療效明顯提高。有Meta分析結(jié)果表明，丹參酮ⅡA治療可改善IS急性期的神經(jīng)功能缺損評(píng)分和患者的日常生活活動(dòng)[13]。何曉靜等[14]發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA可以延長(zhǎng)斷頭后小鼠的生存時(shí)間，增加斷頭后的喘息次數(shù)，改善中風(fēng)小鼠的神經(jīng)行為,增加小鼠腦缺血再灌注損傷后腦組織中SOD酶的活性，并降低MDA含量。這種保護(hù)作用可能是由于丹參酮ⅡA降低了受損組織的ROS因子含量，從而減少了受損組織的氧化應(yīng)激損傷，并最終減輕了腦缺血后的炎癥損傷[15]。這表明丹參酮ⅡA具有抗炎、抗氧化和抗凋亡作用，對(duì)IS具有神經(jīng)保護(hù)作用。目前，針對(duì)丹參酮ⅡA治療IS的研究逐漸深入，但尚無(wú)針對(duì)其起效的具體分子作用機(jī)制的研究。因此本文基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法，對(duì)丹參酮ⅡA治療IS的分子靶點(diǎn)及通路進(jìn)行預(yù)測(cè)，并通過(guò)分子對(duì)接進(jìn)行了驗(yàn)證。

1 材料和方法

1.1 材料

PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/#query=Loxanol%20V)[16]，PharmMapper數(shù)據(jù)庫(kù)(http://lilab-ecust.cn/pharmmapper/index.html)[17]，UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.uniprot.org/)[18]，GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/Search/Keyword?queryString=coronavirus)[19]，Protein-Ligand Interaction Profiler數(shù)據(jù)庫(kù)(https://plip.biotec.tu-dresden.de/plip-web/plip/index)[20],Cytoscape3.6.1軟件[21]，OpenBabel-2.4.1軟件[22]，Ledock軟件[23]，Pymol軟件[24]。

1.2 丹參酮ⅡA靶點(diǎn)的收集與處理

通過(guò)PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)查找丹參酮ⅡA的3D結(jié)構(gòu)，并導(dǎo)入到PharmMapper數(shù)據(jù)庫(kù)中以預(yù)測(cè)其分子靶點(diǎn)。將預(yù)測(cè)得到的丹參酮ⅡA靶點(diǎn)名由UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)中的UniProtKB搜索功能進(jìn)行注釋，并且通過(guò)String數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建了蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)(PPI)。通過(guò)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)搜索3 350個(gè)IS疾病目標(biāo)，并將PPI網(wǎng)絡(luò)中包含的丹參酮ⅡA靶點(diǎn)與IS疾病靶點(diǎn)進(jìn)行相交取共同子集，從而獲得丹參酮ⅡA治療IS的靶點(diǎn)。

1.3 丹參酮ⅡA治療IS關(guān)鍵靶點(diǎn)的GO和KEGG富集分析

將丹參酮ⅡA治療IS的關(guān)鍵靶點(diǎn)通過(guò)R軟件的clusterProfiler[25]程序包進(jìn)行了GO和KEGG富集分析，篩選有關(guān)通路，剔除無(wú)關(guān)通路；根據(jù)靶點(diǎn)在通路上的富集定位，整合所有通路，構(gòu)建丹參治療糖尿病神經(jīng)病變靶點(diǎn)通路圖。

1.4 丹參酮ⅡA與16個(gè)關(guān)鍵疾病靶點(diǎn)的分子對(duì)接

從PDB數(shù)據(jù)庫(kù)下載了關(guān)鍵蛋白質(zhì)的pdb結(jié)構(gòu)文件，并通過(guò)Ledock軟件對(duì)其進(jìn)行脫配體加氫處理。然后通過(guò)PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)下載丹參酮ⅡA的sdf格式文件，并通過(guò)OpenBabel-2.4.1轉(zhuǎn)換為mol文件。用Ledock軟件計(jì)算丹參酮ⅡA與16個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)的分子對(duì)接能，并通過(guò)Pymol軟件和Protein-Ligand Interaction Profiler數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行可視化。

2 結(jié)果

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理研究流程圖

從PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)獲取化合物的3D結(jié)構(gòu)，將其導(dǎo)入PharmMapper數(shù)據(jù)庫(kù)以預(yù)測(cè)化合物的靶點(diǎn)。然后從UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得基因注釋信息，并將靶點(diǎn)信息導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù)中以構(gòu)建靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)。從GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)下載IS靶點(diǎn)數(shù)據(jù)，在與藥物靶點(diǎn)相交后獲得藥物治療IS的靶點(diǎn)。用Cytoscape軟件構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)后，可以通過(guò)網(wǎng)絡(luò)分析功能進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治鲆院Y選關(guān)鍵靶點(diǎn)。通過(guò)R軟件的clusterProfiler軟件包分析丹參酮ⅡA治療IS的關(guān)鍵靶點(diǎn)，并進(jìn)行GO和KEGG富集分析。再通過(guò)Ledock軟件進(jìn)行丹參酮ⅡA與關(guān)鍵靶點(diǎn)的分子對(duì)接，最后通過(guò)Pymol軟件和Protein-Ligand Interaction Profiler數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行可視化分析，流程見(jiàn)圖1。

圖1 網(wǎng)絡(luò)藥理研究流程圖

2.2 丹參酮ⅡA靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

通過(guò)PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)搜索丹參酮ⅡA的3D結(jié)構(gòu)，并將其導(dǎo)入PharmMapper數(shù)據(jù)庫(kù)以預(yù)測(cè)其分子對(duì)接目標(biāo)。以Normfit>0.6作為篩選條件，篩選出82個(gè)丹參酮ⅡA靶點(diǎn)，并將其導(dǎo)入到String數(shù)據(jù)庫(kù)中構(gòu)建PPI。以combined score>0.7作為優(yōu)化PPI網(wǎng)絡(luò)的條件，獲得了70種靶蛋白之間的相關(guān)網(wǎng)絡(luò)，如圖2所示。

圖2 丹參酮ⅡA靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)

2.3 丹參酮ⅡA-靶點(diǎn)-IS網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將PPI網(wǎng)絡(luò)中包含的70個(gè)靶點(diǎn)與3 350個(gè)IS疾病靶點(diǎn)相交取共同子集,得到丹參酮ⅡA治療IS靶點(diǎn)55個(gè)?；谝陨辖Y(jié)果，構(gòu)建“丹參酮ⅡA-靶點(diǎn)-IS”關(guān)系網(wǎng)絡(luò)，如圖3所示。該網(wǎng)絡(luò)包含72個(gè)節(jié)點(diǎn)和303個(gè)邊，平均度數(shù)為4.21。以Degree>10作為篩選條件，獲得了丹參酮ⅡA治療IS的16個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，包括MAPK1、MAPK8、EGFR、SRC、HSP90AA1、ESR1、ALB、MAPK14、CASP3、AR、RXRA、PGR、CTNNA1、CDK2、NOS3和KDR，如表1所示。

2.4 GO富集分析

用R軟件的clusterProfiler[25]程序包對(duì)丹參酮ⅡA治療IS的16個(gè)關(guān)鍵目標(biāo)進(jìn)行GO富集分析，獲得了87個(gè)相關(guān)的GO條目。通過(guò)P<0.001的篩選，得到26條主要參與丹參酮ⅡA治療IS的GO項(xiàng)目。主要包括核受體活性、配體激活的轉(zhuǎn)錄因子活性、類固醇激素受體活性、MAP激酶活性、支架蛋白結(jié)合、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、ATPase結(jié)合、β-catenin結(jié)合、類固醇結(jié)合、MAP激酶激酶活性和其他生物學(xué)功能。見(jiàn)表2。

圖3 丹參酮ⅡA-靶點(diǎn)-IS關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖

表1 丹參酮ⅡA治療IS的關(guān)鍵靶點(diǎn)

2.5 KEGG富集分析

通過(guò)R軟件的clusterProfiler[25]程序包進(jìn)行KEGG富集分析，結(jié)果顯示丹參酮ⅡA治療IS主要涉及 9條KEGG信號(hào)通路。主要包括內(nèi)分泌抗性、FoxO信號(hào)通路、EGFR酪氨酸激酶抑制劑抵抗、MAPK信號(hào)通路、ErbB信號(hào)通路、Rap1信號(hào)通路、Ras信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路和鉑類藥物抗性。見(jiàn)表3。

表2 丹參酮ⅡA在IS治療中GO富集分析結(jié)果

表3 丹參酮ⅡA治療IS的KEGG富集分析結(jié)果

2.6 丹參酮ⅡA與靶蛋白的分子對(duì)接得分及結(jié)構(gòu)

丹參酮ⅡA與16種靶蛋白分子對(duì)接。從PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)下載了tanshinoneⅡA的sdf格式文件，然后通過(guò)OpenBabel-2.4.1轉(zhuǎn)換為mol文件。從Pdb數(shù)據(jù)庫(kù)下載目標(biāo)蛋白的pdb結(jié)構(gòu)文件，并通過(guò)Ledock軟件進(jìn)行去除配體和加氫處理后進(jìn)行分子對(duì)接。結(jié)果顯示，丹參酮ⅡA與PGR、CDK2、MAPK1、KDR和EGFR的分子對(duì)接分?jǐn)?shù)均小于-5 kcal/mol，這表明丹參酮ⅡA與這些靶點(diǎn)的對(duì)接結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定，如表4。通過(guò)Pymol軟件可視化對(duì)接結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)如圖4～8所示。

丹參酮ⅡA與PGR的親和能為-5.29 kcal/mol，低于-5 kcal/mol，表明丹參酮ⅡA對(duì)PGR具有很強(qiáng)的親和力。丹參酮ⅡA占據(jù)了由PGR蛋白中LEU-797、LEU-763、PHE-778、LEU-718和LEU-887殘基形成的活性腔。丹參酮ⅡA分子與LEU-797、LEU-763、LEU-718和LEU-887的殘基形成疏水鍵。此外，丹參酮ⅡA和PHE-778殘基形成π堆積，如圖4所示。

表4 丹參酮ⅡA與16種靶蛋白的分子對(duì)接分?jǐn)?shù)表

圖4 丹參酮ⅡA和PGR的分子對(duì)接結(jié)構(gòu)圖

丹參酮ⅡA和CDK2親和能為-5.16 kcal/mol，低于-5 kcal/mol，表明丹參酮ⅡA對(duì)CDK2具有很強(qiáng)的親和力。丹參酮ⅡA占據(jù)了CDK2蛋白中LYS-89、ILE-10、VAL-18、VAL-64、PHE-80和LEU-887殘基組成的活性腔。丹參酮ⅡA分子與LYS-89形成氫鍵。丹參酮ⅡA與殘基,如ILE-10、VAL-18、VAL-64、PHE-80和LEU-887形成多個(gè)疏水鍵。如圖5所示。

丹參酮ⅡA與MAPK1親和能為-5.04 kcal/mol，低于-5 kcal/mol，表明丹參酮ⅡA與MAPK1有很強(qiáng)的親和力。丹參酮ⅡA占據(jù)了MAPK1蛋白中由MET-108、LEU-156和ILE-31殘基組成的活性腔。丹參酮ⅡA分子與MET-108形成氫鍵。丹參酮ⅡA與殘基(如LEU-156和ILE-31)形成疏水鍵。如圖6所示。

丹參酮ⅡA與KDR的親和能為-5.02 kcal/mol，低于-5 kcal/mol，表明丹參酮ⅡA對(duì)KDR具有很強(qiáng)的親和力。丹參酮ⅡA占據(jù)了KDR蛋白中的殘基(如PHE-916、PHE-105、CYS-917、VAL-914、ALA-864、LEU-1033和LEU-838)形成的活性腔。丹參酮ⅡA分子與CYS-917形成氫鍵。丹參酮ⅡA與殘基,如PHE-916、PHE-105、VAL-914、ALA-864、LEU-1033和LEU-838形成疏水鍵。如圖7所示。

圖5 丹參酮ⅡA和CDK2的分子對(duì)接結(jié)構(gòu)圖

圖6 丹參酮ⅡA和MAPK1的分子對(duì)接結(jié)構(gòu)圖

圖7 丹參酮ⅡA和KDR的分子對(duì)接結(jié)構(gòu)圖

丹參酮ⅡA與EGFR的親和能為-5 kcal/mol，表明丹參酮ⅡA對(duì)EGFR具有很強(qiáng)的親和力。丹參酮ⅡA占據(jù)了EGFR蛋白中LEU-844、MET-793和LEU-718殘基形成的活性腔。丹參酮ⅡA分子與MET-793形成氫鍵。丹參酮ⅡA與殘基(如LEU-844和LEU-718)形成疏水鍵。如圖8所示。

圖8 丹參酮ⅡA和EGFR的分子對(duì)接結(jié)構(gòu)圖

3 討論

缺血性中風(fēng)(IS)是造成死亡、后天性殘疾的常見(jiàn)原因[26]。其發(fā)病機(jī)理主要是由于動(dòng)脈硬化導(dǎo)致的血液流動(dòng)變緩，血液成分改變和血液黏度增加。因此治療的關(guān)鍵是盡快改善缺血區(qū)域的血液循環(huán)，消除繼發(fā)性水腫，恢復(fù)腦細(xì)胞的正常代謝和神經(jīng)功能。目前針對(duì)該病的治療主要是通過(guò)動(dòng)靜脈溶栓、非支架式機(jī)械取栓術(shù)和支架式機(jī)械取栓術(shù)的治療[27]。其中靜脈藥物溶栓治療時(shí)間較嚴(yán)格(急性腦血管閉塞3～4.5 h)，大動(dòng)脈閉塞再通率低，治療效果較差。而繼發(fā)于急性腦血管閉塞的腦梗死主要是由腦動(dòng)脈狹窄的大量血栓形成所致。即使溶栓后血管再次暢通，但仍會(huì)發(fā)生再次阻塞的問(wèn)題[28]。不僅如此，長(zhǎng)期應(yīng)用溶栓藥容易誘發(fā)顱內(nèi)出血。其中靜脈內(nèi)溶栓導(dǎo)致顱內(nèi)出血的發(fā)生率約為6.4%，而動(dòng)脈溶栓的發(fā)生率則接近10%。這使得病情轉(zhuǎn)向惡化，因此治療效果不是特別理想[29-30]。為此有必要尋找更為有效的藥物對(duì)其進(jìn)行治療，中藥丹參及其提取物已廣泛用于心腦血管疾病的治療[31]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，丹參中所含的丹參酮可以有效抵抗中樞神經(jīng)系統(tǒng)的缺血性損傷，并保護(hù)缺血區(qū)域的神經(jīng)元，減少由缺血再灌注引起的延遲性神經(jīng)元凋亡，減少水腫，縮小腦梗塞范圍，并改善腦缺血引起的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。有研究發(fā)現(xiàn)[32],作為丹參的主要活性成分之一的丹參酮ⅡA對(duì)大鼠短暫性局灶性腦缺血具有顯著的保護(hù)作用，對(duì)永久性局灶性腦缺血同樣具有良好的保護(hù)作用[33]。盡管已有大量研究證實(shí)丹參酮ⅡA對(duì)IS的治療作用，但I(xiàn)S是一個(gè)復(fù)雜的疾病，其病變涉及多個(gè)臟腑、多種病機(jī)途徑及多條信號(hào)通路。目前雖然已經(jīng)有大量研究肯定了丹參酮ⅡA對(duì)IS的治療作用，但丹參酮ⅡA中包含靶點(diǎn)眾多，要想明確丹參酮ⅡA治療IS的機(jī)制就顯得困難重重，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是通過(guò)分析大數(shù)據(jù)來(lái)進(jìn)行藥物研究的新模式[34-35]，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，可以預(yù)測(cè)丹參酮ⅡA治療IS的靶點(diǎn)以及機(jī)制，從而指導(dǎo)丹參酮ⅡA治療IS的研究方向。

網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治鼋Y(jié)果表明，蛋白PGR、CDK2、MAPK1、KDR、EGFR、ALB、ESR1、CASP3、HSP90AA1、MAPK8、NOS3、RXRA、AR、CTNNA1、MAPK14及SRC關(guān)聯(lián)度較高，表明這些蛋白是丹參酮ⅡA治療IS的關(guān)鍵靶點(diǎn)。GO富集分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)中藥丹參酮ⅡA治療IS涉及多個(gè)生物功能，主要參與核受體活性、配體激活的轉(zhuǎn)錄因子活性、類固醇激素受體活性、MAP激酶活性、支架蛋白結(jié)合、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、ATPase結(jié)合、β-catenin結(jié)合、類固醇結(jié)合和MAP激酶激酶活性。核受體是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在各種生命活動(dòng)中起調(diào)節(jié)作用。大多數(shù)核受體是配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子，可以被外源性物質(zhì)和內(nèi)源性化合物識(shí)別并激活。不僅如此與配體結(jié)合的核受體可還以調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)和活性從而影響藥物的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效過(guò)程[36]。有研究表明[37-38],核受體在中藥的代謝和中藥的相互作用中起著重要的調(diào)節(jié)作用。絲裂原激活的蛋白激酶(MAPK)在應(yīng)激反應(yīng)(例如炎癥和細(xì)胞凋亡)中起重要作用。凋亡是導(dǎo)致神經(jīng)元死亡的主要方法之一[39]，這對(duì)于人體清除受損細(xì)胞并維持生命具有重要意義。在缺血性腦損傷期間，神經(jīng)元壞死和細(xì)胞凋亡同時(shí)發(fā)生。壞死主要發(fā)生在中央缺血區(qū)域，而凋亡主要發(fā)生在半明半暗帶區(qū)域。半明半暗帶是梗塞周圍的腦組織，它的一部分功能受損，但可修復(fù)。丹參酮ⅡA可以保護(hù)該區(qū)域的神經(jīng)元并減少腦梗塞區(qū)域。選擇性神經(jīng)元死亡通常發(fā)生于缺血性損傷后3～4 d。這種現(xiàn)象稱為延遲神經(jīng)元死亡(DND)。DND與細(xì)胞凋亡的發(fā)生密切相關(guān)[40]。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多參與細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)，其中Bcl-2基因家族在細(xì)胞凋亡的線粒體途徑中起著重要的調(diào)節(jié)作用。該家族包括促進(jìn)凋亡的蛋白質(zhì)和抑制凋亡的蛋白質(zhì)。Caspase-3被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡最關(guān)鍵的凋亡蛋白酶。Caspase-3的激活最終將導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。如果可以通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡基因的表達(dá)或減少細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)來(lái)抑制細(xì)胞凋亡過(guò)程，則有可能減少腦缺血期間神經(jīng)元死亡的數(shù)量。而丹參酮ⅡA可以顯著減少梗塞區(qū)域周圍神經(jīng)元的凋亡數(shù)量、抑制Caspase-3的活性并增加Bcl-2的表達(dá)[41]，這表明丹參酮ⅡA可以通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡來(lái)保護(hù)神經(jīng)元免于缺血和缺氧。

KEGG富集分析結(jié)果表明，丹參酮ⅡA治療IS主要涉及內(nèi)分泌抵抗、FoxO信號(hào)傳導(dǎo)、EGFR酪氨酸激酶抑制劑抵抗、MAPK信號(hào)傳導(dǎo)、ErbB信號(hào)傳導(dǎo)、Rap1信號(hào)傳導(dǎo)、Ras信號(hào)傳導(dǎo)、HIF-1信號(hào)通路和鉑類藥物耐藥性。最新研究還發(fā)現(xiàn)Ras信號(hào)通路[42]、FoxO信號(hào)通路[43]和MAPK信號(hào)通路[44]與IS的發(fā)病機(jī)理密切相關(guān)。許多研究表明，有絲分裂原激活的蛋白激酶信號(hào)通路(MAPKs)參與細(xì)胞內(nèi)炎癥和細(xì)胞存活的調(diào)節(jié)[45]，而由細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)介導(dǎo)的信號(hào)通路調(diào)節(jié)Bax/Bcl-2/Bcl-xL的表達(dá)在腦缺血再灌注損傷引起的細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用[46]。進(jìn)一步的研究表明，聚乙二醇納米丹參酮ⅡA與陽(yáng)離子化牛血清白蛋白聯(lián)合使用可以顯著降低ERK1/2基因的表達(dá)水平和相應(yīng)的蛋白表達(dá)[47]，這表明丹參酮ⅡA的抗凋亡作用是與MAPK信號(hào)通路的調(diào)節(jié)有關(guān)，而這也從反面驗(yàn)證了本研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。表明本研究結(jié)果可為丹參酮ⅡA治療IS的后續(xù)研究提供重要依據(jù)，而這也將對(duì)未來(lái)論證中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論的科學(xué)性提供有價(jià)值的參考。但因網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法的局限性，此研究的部分結(jié)果可能欠缺嚴(yán)謹(jǐn)，仍需進(jìn)一步的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以及臨床研究進(jìn)行驗(yàn)證。