郝春磊， 張 黎

（寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，寧夏 銀川 750021）

乒乓菊是菊科、菊屬草本花卉，有黃、綠、白、紅等多種顏色，常作為鮮切花使用。乒乓菊造型獨(dú)特，使用范圍廣泛，保鮮時(shí)間較長(zhǎng)，花期可達(dá)20 d 以上，深受大眾喜愛(ài)[1]。隨著切花乒乓菊種苗需求量的快速增長(zhǎng)，一些品種因反復(fù)扦插繁殖導(dǎo)致品種退化，而組織培養(yǎng)是解決此問(wèn)題的重要手段。但瓶?jī)?nèi)生根存在污染不易控制、成本高、周期長(zhǎng)、移栽成活率低等問(wèn)題，而瓶外生根是瓶?jī)?nèi)快速繁殖與瓶外扦插技術(shù)相結(jié)合的繁殖方法，既可降低生產(chǎn)成本，又能縮短育苗周期，提高生產(chǎn)效率。

本試驗(yàn)開(kāi)展切花乒乓菊組織培養(yǎng)技術(shù)與瓶外生根研究，探討影響切花乒乓菊莖尖組織離體培養(yǎng)的因素及不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)切花乒乓菊脫毒苗瓶外生根的影響，旨在優(yōu)化切花乒乓菊莖尖脫毒及苗瓶外生根技術(shù)，以期降低組織培養(yǎng)成本，簡(jiǎn)化操作程序，為實(shí)現(xiàn)切花乒乓菊工廠化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料源自銀川市阿瓦隆生產(chǎn)日光溫室的6 種切花乒乓菊，見(jiàn)表1。

表1 不同品種乒乓菊切花生長(zhǎng)性狀

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體最佳滅菌時(shí)間篩選 試驗(yàn)材料為切花乒乓菊6 個(gè)品種采后 30 d 生長(zhǎng)的長(zhǎng) 8～10 cm 腳芽。選取嫩芽2 cm 左右，去掉外邊葉片后，在自來(lái)水下沖洗 3～4 次，無(wú)菌水沖洗 1～2 次。用濾紙吸干后，在超凈工作臺(tái)上用 75%酒精處理30 s，用無(wú)菌水沖洗 2～3 次后，用 0.1%升汞溶液滅菌（4、6、8、10、12 min）,再用無(wú)菌水沖洗 5～6 次，置于消毒燒杯中備用。無(wú)菌操作下將莖尖接種于MS 培養(yǎng)基上，每個(gè)處理接種 15 瓶，每瓶1 個(gè)外植體，重復(fù)3 次。15 d 后記錄外植體的成活率和成苗率。

1.2.2 切花乒乓菊繼代增殖培養(yǎng)基篩選 采用3因素3 水平正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表2。每處理接種 10 瓶，每瓶接 3 個(gè)瓶苗，重復(fù)3 次，30 d 后統(tǒng)計(jì)各品種切花在不同培養(yǎng)基中芽的增殖倍數(shù)并記錄生長(zhǎng)情況。

1.3 切花乒乓菊組培苗瓶外生根

從脫毒苗上取8～10 cm 的頂梢為插穗，保留2～3節(jié)，插穗下端蘸取不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑溶液（100 mg/L NAA、100 mg/L IBA、100 mg/L ABT），基質(zhì)采用珍珠巖和草炭（體積比 3∶7），扦插深度 3～5 cm;溫度控制在15～25 ℃，空氣濕度80%～90%，使葉片不出現(xiàn)萎蔫[2]。每處理扦插 180 株，重復(fù) 3 次。35 d 后每個(gè)處理隨機(jī)抽樣，統(tǒng)計(jì)生根數(shù)以及最長(zhǎng)根長(zhǎng)[3]（表3）。

2 結(jié)果與分析

2.1 切花乒乓菊莖尖組織滅菌時(shí)間篩選

由圖1 可知，6 個(gè)切花乒乓菊品種的成活率隨著滅菌時(shí)間的增長(zhǎng)呈現(xiàn)先上升后急劇下降的趨勢(shì)，各品種的成苗率隨著滅菌時(shí)間的增加而不同。A1、A3、A6 在滅菌8 min 時(shí)，成活率和成苗率最高，分別為 91%、94%，88%、90%，82%、91%。A2、A4、A5 在6 min 時(shí)，成活率和成苗率最高，分別為80%、82%，79%、81%，74%、79%。各品種最適滅菌時(shí)間的成活率大小依次為 A1、A3、A6、A2、A4、A5；成苗率大小依次為 A1、A6、A3、A2、A4、A5。A1、A3、A6 滅菌時(shí)間為 8 min 時(shí)效果最佳，A2、A4、A5 滅菌時(shí)間為 6 min時(shí)效果最佳。

表2 L9(33)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

表3 切花乒乓菊脫毒一代苗生長(zhǎng)性狀

圖1 切花乒乓菊各品種莖尖組織滅菌時(shí)間及效果

2.2 切花乒乓菊繼代增殖培養(yǎng)基篩選

由表4 可知，不同處理各品種增殖倍數(shù)差異明顯，且品種之間也存在顯著性差異。A1 的處理4 與其他處理存在顯著差異，增殖倍數(shù)最高，為9.20，處理9 增殖倍數(shù)最小，為4.67，即A1 的繼代增殖最優(yōu)培養(yǎng)基為6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.15 mg/L+蔗糖30 g/L。A2 的處理6 與其他處理之間存在顯著差異，增殖倍數(shù)達(dá)到 10.60，而處理1 的增殖倍數(shù)最小，為4.80，A2 繼代增殖最優(yōu)培養(yǎng)基為 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.45 mg/L+蔗糖 25 g/L。A3、A4 的處理 4 和處理5 增殖倍數(shù)與其他處理之間存在顯著差異，效果最佳的均為處理4，即 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.15 mg/L+蔗糖 30 g/L。A5 的各處理之間差異顯著，其中效果最優(yōu)的為處理 8，增殖倍數(shù)為 8.80，即6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖 25 g/L 為最佳。A6 的處理6 與其他處理差異顯著，即6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.45 mg/L+蔗糖 25 g/L，增殖倍數(shù)最優(yōu)達(dá)到8.40。

表4 切花乒乓菊各品種繼代增殖正交分析結(jié)果

由表 5 可知， 各繼代苗中，A1、A2 隨著繼代次數(shù)的增加，增殖倍數(shù)在2 代苗時(shí)達(dá)到最大，為9.40、9.80；A3、A5、A6 在 3 代苗時(shí)增殖倍數(shù)達(dá)到最大，為9.2、8.4、8.8；A4 隨著繼代次數(shù)的增加， 增殖倍數(shù)持續(xù)增長(zhǎng)，在4 代苗時(shí)達(dá)到8.60。

2.3 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)切花乒乓菊脫毒苗瓶外生根的影響

由表 6 可知，100 mg/L NAA、100 mg/L IBA、100 mg/L ABT 均對(duì)切花乒乓菊脫毒苗瓶外生根有一定的促進(jìn)作用。3 種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)A1 的生根數(shù)和根長(zhǎng)影響不顯著，100 mg/L ABT 時(shí)，達(dá)到最大值，生根數(shù)和最長(zhǎng)根長(zhǎng)分別為20.20、47.16 mm。3 種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)A2 的生根數(shù)和最長(zhǎng)根長(zhǎng)影響顯著，生根數(shù)分別為 11.60、14.20、19.20，最長(zhǎng)根長(zhǎng)分別為 34.62、29.68、35.67 mm。各調(diào)節(jié)劑對(duì)A3 的生根數(shù)和根長(zhǎng)影響極顯著，使用100 mg/L IBA 時(shí)達(dá)到最大值，生根數(shù)和根長(zhǎng)分別為24.60、53.16 mm。3 種調(diào)節(jié)劑對(duì)A4的生根數(shù)和根長(zhǎng)影響顯著，生根數(shù)分別為12.00、13.40、12.20，根長(zhǎng)分別為 44.33、47.40、43.19 mm。3種調(diào)節(jié)劑對(duì)A5 的生根數(shù)和根長(zhǎng)影響不顯著，生根數(shù)分別為 13.40、11.20、11.60，根長(zhǎng)分別為 34.62、31.30、29.68 mm。3 種調(diào)節(jié)劑對(duì)A6 的生根數(shù)和根長(zhǎng)影響顯著，100 mg/L NAA 時(shí)達(dá)到最大值，生根數(shù)和最長(zhǎng)根長(zhǎng)分別為12.80、37.82 mm。綜合生根數(shù)以及最長(zhǎng)根長(zhǎng)，A3、A4 最佳脫毒苗瓶外生根生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為 100 mg/L IBA，A1、A2 為 100 mg/L ABT，A4、A5為100 mg/L NAA。

表5 切花乒乓菊各品種繼代增殖正交分析結(jié)果

表6 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)切花乒乓菊脫毒苗瓶外生根的影響

3 討論與結(jié)論

3.1 討論

通過(guò)切花乒乓菊6 個(gè)品種莖尖組織脫毒與瓶外生根試驗(yàn)可知，6 個(gè)品種脫毒苗在各自最適培養(yǎng)基中均可正常生長(zhǎng)，且各具特點(diǎn)。A1、A3、A4 的株高、節(jié)間距大于其他品種，僅A2 具有分枝，A5、A6 的生長(zhǎng)周期（株高10 cm 時(shí)）最長(zhǎng)，分別為44 d和41 d，其他品種均在30 d 左右。6 個(gè)品種脫毒苗瓶外生根率均為100%。楊文雅[4]以9 個(gè)品種切花多頭菊的莖尖為外植體，研究不同激素濃度對(duì)其繼代增殖的影響，研究結(jié)果顯示繼代增殖最佳激素配比為 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。陳黎等[5]以黃山貢菊的莖尖、葉片及根為外植體，進(jìn)行了芽的誘導(dǎo)、繼代增殖及瓶外生根壯苗試驗(yàn)，結(jié)果表明 MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.01 mg/L 是黃山貢菊芽繼代增殖的最佳培養(yǎng)基。高琳娜[6]對(duì)黃金菊進(jìn)行了組織培養(yǎng)試驗(yàn)，結(jié)果表明最有利于黃金菊腋芽增殖的適宜培養(yǎng)基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L。將本試驗(yàn)結(jié)果與前人研究對(duì)比可知，適用于菊花組培的生長(zhǎng)激素為6-BA 和NAA，但不同品種的最適激素配比差異較大。生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑可以促進(jìn)植物插穗根原基的形成，從而促進(jìn)根尖分化，縮短植物生根周期，提高生根率[7]。本試驗(yàn)表明，不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)切花乒乓菊脫毒苗扦插生根率的影響存在差異，這與大多數(shù)研究結(jié)果一致，也印證了脫毒對(duì)于切花乒乓菊性狀改良的效果，既可以降低生產(chǎn)成本，又可縮短育苗周期，提高生產(chǎn)效率，因此脫毒苗培育可作為切花乒乓菊的主要生產(chǎn)方式。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，6 個(gè)切花乒乓菊品種間的差異較大，應(yīng)根據(jù)實(shí)際需求選擇相宜的品種應(yīng)用于切花乒乓菊脫毒苗生產(chǎn)。

3.2 結(jié)論

1）滅菌時(shí)間：紫色、酒紅色、深粉色品種滅菌時(shí)間為8 min 時(shí)效果最佳；綠色、白色、黃色品種滅菌時(shí)間為6 min 時(shí)效果最佳。

2）繼代增殖優(yōu)選培養(yǎng)基：紫色、酒紅色、白色品種為 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.15 mg/L+蔗糖 30 g/L；綠色、深粉色品種為6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.45 mg/L+蔗糖25 g/L；黃色品種為6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖 25 g/L。

3）繼代增殖：除白色品種持續(xù)增長(zhǎng)外，其他品種均呈先增長(zhǎng)后降低的趨勢(shì)，紫色和綠色品種在第2代時(shí)增殖倍數(shù)最大，酒紅、黃色和深粉品種在第3 代時(shí)增殖倍數(shù)最大。

4）100 mg/L NAA、100 mg/L IBA、100 mg/L ABT均有利于切花乒乓菊脫毒苗瓶外生根。紫色、綠色品種瓶外生根生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為100 mg/L ABT；酒紅色、黃色、深粉色品種為 100 mg/L NAA；白色生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為100 mg/L IBA。