張偉，徐斌，洪汝濤

(1.安徽理工大學第一附屬醫(yī)院消化內科，安徽 淮南 232007； 2.安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院消化內科，安徽 桐城 230022)

胃息肉是胃黏膜的增生性病變，增生組織自黏膜凸向胃腔，主要包括增生性息肉、腺瘤性息肉、胃底腺息肉、炎性息肉4種病理類型[1-2]。臨床上多認為胃息肉是胃癌的癌前病變，癌變率為6.0%～47.0%，其中腺瘤性息肉的癌變率最高，為10.0%～23.1%[3-4]，而胃底腺息肉既往認為不會發(fā)生癌變，但臨床也偶有發(fā)生癌變的個案。胃息肉向胃癌的演變是一個漫長而復雜的過程，在此過程中若能早期發(fā)現(xiàn)并干預可顯著降低胃癌的發(fā)生率。近年來，隨著內鏡檢查技術的不斷提高與廣泛普及，胃息肉的檢出率也呈升高趨勢，相關文獻顯示，胃息肉在消化內鏡檢查中的檢出率為1.0%～10.0%[5]。隨著胃息肉與胃癌研究的不斷深入，部分學者發(fā)現(xiàn)錯配修復基因PMS2、MSH6以及細胞間質表皮轉化因子(cellular mesenchymal to epithelial transition factor，C-met)可能參與胃息肉向胃癌的演變，為胃癌的防治提供了重要的基因學證據(jù)[6-7]。為進一步探尋胃息肉向胃癌演變的發(fā)生發(fā)展機制，本研究主要探討胃息肉及胃癌組織中PMS2、MSH6、C-met的表達情況及其在胃息肉向胃癌轉化中的預測價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年7月至2019年12月安徽理工大學第一附屬醫(yī)院收治的143例胃息肉患者及45例胃癌患者作為研究對象，其中增生性息肉42例，男16例、女26例，年齡39～70歲，平均(57.8±7.5)歲；腺瘤性息肉23例，男15例、女8例，年齡42～68歲，平均(57.0±7.5)歲；胃底腺息肉35例，男14例、女21例，年齡43～69歲，平均(54.9±8.2)歲；炎性息肉43例，男19例、女24例，年齡38～66歲，平均(55.4±7.9)歲。胃癌患者中男17例、女28例，年齡47～72歲，平均(57.2±8.5)歲。5組患者的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究經安徽理工大學第一附屬醫(yī)院倫理委員會批準，患者均簽署了知情同意書。

1.2納入與排除標準 納入標準：經消化內鏡及病理組織學檢查確診為胃息肉或胃癌；年齡35～70歲。排除標準：家族遺傳性胃息肉；既往有惡性腫瘤切除史或當前合并有其他系統(tǒng)惡性腫瘤；妊娠期或哺乳期女性；存在認知功能障礙，不能配合完成全程治療。

1.3主要試劑與儀器 兔抗人PMS2多克隆抗體(批號：H00005395-D01P)、兔抗人MSH6多克隆抗體(批號：A-6702-050)、兔抗人C-met單克隆抗體(批號：MAB11027)購自武漢艾美捷科技有限公司生產；蘇木精-伊紅染色液(批號：G1120)、檸檬酸鈉抗原修復液(批號：C1032)、磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer solution，PBS)(批號：P1032-500)購自北京索萊寶科技有限公司生產；辣根過氧化物酶標記鏈霉卵白素免疫組織化學試劑盒(批號：KB1973)、濃縮型二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑盒(批號：BH1805)購自上海恪敏生物科技有限公司生產；顯微鏡、組織切片機(德國Leica公司)；組織脫水機(美國Thermo Shandon公司)。

1.4方法

1.4.1判定病理類型 消化內鏡下用活檢鉗取息肉或腫瘤活組織標本，置于4%的甲醛溶液中固定后，常規(guī)行乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片、撈片、烤片及蘇木精-伊紅染色，鏡下觀察組織病理類型。

1.4.2檢測PMS2、MSH6、C-met表達水平 采用免疫組織化學法進行檢測，另取備用標本切片并置于60 ℃恒溫箱中烤片90 min后，依次于二甲苯及梯度乙醇中浸泡透明、脫蠟；PBS沖洗3次，每次5 min，檸檬酸鈉抗原修復液微波修復20 min；自然冷卻后，PBS沖洗3次，每次5 min，加入3% H2O2室溫孵育20 min；PBS沖洗3次，每次5 min，加入山羊血清封閉15 min；棄血清，加入一抗4 ℃孵育過夜；自然回溫后，PBS沖洗3次，每次5 min，加入生物素標記二抗室溫孵育20 min；PBS沖洗3次，每次5 min，加入鏈霉親和素-過氧化物酶室溫孵育20 min；PBS沖洗3次，每次5 min，二氨基聯(lián)苯胺顯色劑室溫顯色；自來水沖洗終止反應，蘇木素復染3 min，流動自來水沖洗至無色；1%鹽酸乙醇分化，自來水沖洗后，依次于梯度乙醇及二甲苯中浸泡脫水、透明，中性樹膠封片。

以胞質呈現(xiàn)棕黃和(或)棕褐色的細胞為陽性細胞，用半定量法判定PMS2、MSH6、C-met表達情況，高倍鏡下(×400)每張切片隨機選取5個視野計算陽性細胞百分比，結果取平均值。無陽性細胞記為0分，陽性細胞比值≤10%記為1分，10%<陽性細胞比值≤50%記為2分，50%<陽性細胞比值≤75%記為3分，陽性細胞比值>75%記為4分；無著色記為0分，淡黃色記為1分，棕黃色記為2分，棕褐色記為3分。兩項得分相乘≥3分即為表達陽性[8]。

2 結 果

2.1胃息肉及胃癌組織中PMS2、MSH6、C-met表達情況比較 不同病理類型胃息肉及胃癌組織中PMS2、MSH6、C-met陽性表達率比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，與增生性息肉組比較，腺瘤性息肉組、胃底腺息肉組、胃癌組的PMS2、MSH6陽性表達率降低(P<0.05)，炎性息肉組PMS2的陽性表達率升高(P<0.05)，炎性息肉組MSH6陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與腺瘤性息肉組比較，胃底腺息肉組和炎性息肉組PMS2、MSH6陽性表達率升高(P<0.05)，胃癌組PMS2陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，胃癌組MSH6陽性表達率降低(P<0.05)；與胃底腺息肉組比較，炎性息肉組PMS2、MSH6陽性表達率升高(P<0.05)，胃癌組PMS2、MSH6陽性表達率降低(P<0.05)；與炎性息肉組比較，胃癌組PMS2、MSH6陽性表達率降低(P<0.05)。與增生性息肉組比較，腺瘤性息肉組、胃底腺息肉組、胃癌組的C-met陽性表達率升高(P<0.05)，炎性息肉組降低(P<0.05)；與腺瘤性息肉組比較，胃底腺息肉組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)， 炎性息肉組降低(P<0.05)，胃癌組升高(P<0.05)；與胃底腺息肉組比較，炎性息肉組降低(P<0.05)，胃癌組升高(P<0.05)；與炎性息肉組比較，胃癌組升高(P<0.05)。見表1、圖1。

表1 胃息肉及胃癌組織內PMS2、MSH6、C-met陽性表達率比較 [例(%)]

2.2PMS2、MSH6、C-met表達水平與胃息肉病理類型及病變嚴重程度的相關性 Spearman相關分析結果顯示，PMS2、MSH6與胃息肉病理類型及病變嚴重程度呈負相關(r=-0.324、r=-0.319、r=0.298，均P<0.001)，C-met與胃息肉病理類型及病變嚴重程度呈正相關(r=0.298，P<0.001)。

2.3PMS2、MSH6、C-met在胃息肉及胃癌組織中表達的相關性 Spearman相關分析結果顯示，胃息肉及胃癌組織中PMS2與MSH6的表達呈正相關(r=0.796，P<0.001)，PMS2、MSH6與C-met的表達呈負相關(r=-0.492、r=-0.483，均P<0.001)。

2.4PMS2、MSH6、C-met在胃息肉向胃癌轉化中的診斷價值 PMS2預測胃息肉向胃癌轉化的ROC曲線下面積(area under curve，AUC)為0.878，當臨界值為35.6%時，靈敏度為83.3%，特異度為74.8%；MSH6預測胃息肉向胃癌轉化的ROC曲線下面積為0.865，當臨界值為35.6%時，靈敏度為82.5%，特異度為73.6%；C-met預測胃息肉向胃癌轉化的ROC曲線下面積為0.837，當臨界值為74.5%時，靈敏度為77.8%，特異度為71.2%。見表2、圖2。

1a：炎性息肉組織(×200)；1b：增生性息肉組織(×200)；1c：胃底腺息肉組織(×200)；1d：腺瘤性息肉組織(×200)；1e：胃癌組織(×400)；C-met：細胞間質表皮轉化因子

表2 PMS2、MSH6、C-met在胃息肉向胃癌轉化中的診斷價值

C-met：細胞間質表皮轉化因子；ROC：受試者工作特征曲線

3 討 論

胃息肉常發(fā)生于胃體及胃竇，表面多光滑，與周圍組織界限清楚，其發(fā)病與外界因素及胃內微環(huán)境變化有關。研究顯示，隨著質子泵抑制劑的廣泛應用、幽門螺桿菌根除治療的普及推廣，胃息肉的病理類型已由原來的增生性息肉為主(約占70.0%)逐漸演變?yōu)槲傅紫傧⑷鉃橹?約占77.0%，而增生性息肉僅占約17.0%)[9-10]，特別是長期應用質子泵抑制劑已成為胃底腺息肉大幅增加的主要原因[11]。相關研究表明，胃息肉的存在與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，且不同病理類型胃息肉發(fā)展為胃癌的概率也不同，其中腺瘤性息肉發(fā)展為胃癌的概率明顯高于其他類型[12]，盡早明確胃息肉類型對患者預后具有重要意義。近年來有學者指出，錯配修復基因中的PMS2、MSH6及原癌基因C-met均可參與胃息肉向胃癌的發(fā)展，檢測其表達水平對胃癌的預防及治療具有指導意義[13]。

正常情況下，人體中時刻都發(fā)生著基因的重組與復制，在此過程中不可避免地會出現(xiàn)堿基的錯配與重組的錯配，錯配修復可檢測并糾正錯配、缺失及異常插入的核苷酸序列而保持基因遺傳的正確性和穩(wěn)定性。但錯配修復相關基因一旦發(fā)生突變就會出現(xiàn)錯配修復功能失效，導致微衛(wèi)星不穩(wěn)定及基因錯誤修復，且微衛(wèi)星不穩(wěn)定可進一步導致抑癌基因失活，致癌基因激活，從而增加細胞突變及惡變的概率[14-15]。PMS2、MSH6均屬于錯配修復基因，劉杰等[13]研究指出PMS2、MSH6突變可導致胃息肉向胃癌發(fā)展。其原因是PMS2、MSH6的陽性表達提示修復系統(tǒng)的存在，可糾正基因復制與重組過程中的錯誤，使生物體的遺傳具有正確性和穩(wěn)定性，從而避免腫瘤惡變；而PMS2、MSH6陰性表達則說明修復系統(tǒng)失活，無法糾正基因復制和重組過程中的錯誤，從而促進惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[16-17]。C-met由原癌基因編碼合成，具有酪氨酸激酶活性，是重要的肝細胞生長因子受體，除在細胞間傳導信息外，還可控制細胞骨架的重排，在細胞的增殖、分化過程中發(fā)揮著重要作用[18-19]。正常情況下，機體組織內C-met表達水平較低，而正常組織發(fā)生惡變時其表達水平明顯升高，并可通過自分泌或旁分泌方式激活多種信號通路而參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[20-21]。

本研究結果顯示，不同病理類型胃息肉及胃癌組織中PMS2、MSH6、C-met陽性表達率比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，其中PMS2、MSH6的陽性表達率比較，胃癌組織<腺瘤性息肉<胃底腺息肉<增生性息肉<炎性息肉；C-met陽性表達率比較，胃癌組織>腺瘤性息肉>胃底腺息肉>增生性息肉>炎性息肉；相關分析結果顯示，PMS2、MSH6、C-met表達水平與胃息肉病理類型及病變嚴重程度呈顯著相關性，且PMS2表達與MSH6表達呈正相關，PMS2、MSH6表達與C-met表達呈負相關。這一結果說明，PMS2、MSH6、C-met參與不同病理類型胃息肉向胃癌的發(fā)生發(fā)展，其中PMS2、MSH6在炎性息肉組織內的陽性表達率最高，可阻止胃息肉向胃癌的演變，而C-met在腺瘤性息肉組織內的陽性表達率最高，可促進胃息肉向胃癌的演變，與既往研究顯示的腺瘤性息肉癌變率最高且PMS2、MSH6表達與C-met表達呈負相關的結果相一致[12,16]。另外，本研究經ROC曲線分析結果顯示，PMS2預測胃息肉向胃癌轉化的靈敏度為83.3%、特異度為74.8%，MSH6預測胃息肉向胃癌轉化的靈敏度為82.5%、特異度為73.6%，C-met預測胃息肉向胃癌轉化的靈敏度為77.8%，特異度為71.2%。明確胃息肉的病理類型并檢測PMS2、MSH6、C-met表達情況對防治胃息肉向胃癌轉化具有重要意義。

綜上所述，不同病理類型胃息肉及胃癌組織中PMS2、MSH6、C-met陽性表達率不同，PMS2、MSH6、C-met表達情況與胃息肉病理類型及病變嚴重程度顯著相關，推測PMS2、MSH6、C-met可能參與不同病理類型胃息肉向胃癌的發(fā)生發(fā)展。但本研究樣本量較小，有待進一步多中心大樣本研究的證實。