任艷娥

（遼寧省朝陽縣畜產(chǎn)品安全監(jiān)察所，遼寧 朝陽 122000）

隨著我縣畜產(chǎn)品安全檢驗室的建立和完善，基層檢驗人員通過不斷的理論學習并在實際操作中不斷摸索經(jīng)驗，檢驗水平不斷提高，本人也在工作之余總結(jié)了ELISA試劑盒在“瘦肉精”檢測分析操作中幾個關(guān)鍵環(huán)節(jié)的應注意的問題，現(xiàn)歸納如下：

1 連續(xù)加液環(huán)節(jié)的關(guān)鍵問題

1.1 加液環(huán)節(jié)建議“吸二打一”方式

加酶標工作液、抗體工作液洗板、底物及終止液等環(huán)節(jié)，屬于連續(xù)加液操作，建議采用“吸二打一”的方式，“吸二打一”的方法：也就是吸液時移液器按到底，打液時，按到移液器第一個停止位置，慢吸液體，快速打下液體，槍頭需垂直于板孔，不可插入板孔，避免溶液掛壁和交叉污染。這種操作方法優(yōu)于“吸一打一”加樣過程中，在板孔內(nèi)不出現(xiàn)或者很少出現(xiàn)氣泡，同時提高了加樣速度，縮短前后樣本反應的時間差

1.2 在加樣的過程中還應注意問題

1.2.1 加樣的過程中避免漏加或者重加

1.2.2 避免加樣的過程中忘記更換槍頭

1.2.3 避免忘記記錄樣本的加樣順序

1.2.4 如果樣本量大于4條酶標板條時，建議使用多道移液器操作，避免時間差導致結(jié)果不準確

2 洗板操作的關(guān)鍵問題

2.1 準確加液

按說明書操作，確保每孔所加洗滌液量的準確和均一，間隔30s，人工清洗需4～5次，機洗3次即可，調(diào)好針頭與孔底的距離，過多會溢出板孔，污染其它樣本，過少則達不到洗滌的效果。

2.2 快速甩板

快速甩盡板孔內(nèi)的液體。防止板孔里的液體對流，產(chǎn)生交叉污染，拍板最后一次洗板后，用吸水紙墊厚毛巾拍干。拍干后觀察板孔，未被清除的氣泡用未使用過的槍頭戳破或洗耳球輕輕吹破。

3 反應顯色環(huán)節(jié)，判斷反應時間是關(guān)鍵

ELISA試劑盒原理屬性決定了“溫度”和“操作”會影響實驗OD值，所以試劑盒的試劑顯色時間需要根據(jù)實驗室的室溫環(huán)境、反應溫度決定，試劑盒要求是反應溫度是25±2℃顯色15min，OD值讀數(shù)會控制在1.5～2.5區(qū)間。如果室溫及反應溫度不在25±2℃區(qū)間，可以反應10 min時把顯色酶標板取出，放到空白紙上觀察，如顯色較深，則立刻終止反應，如顯色較淺，需要延長反應時間，但最長不能超過30min。

4 讀數(shù)環(huán)節(jié)中的關(guān)鍵問題分析

縣級檢測機構(gòu)普遍配備了酶標儀，可對樣本進行定量及半定量的分析，在最后一步向加完板孔中加完酸性終止液后，讀數(shù)時間嚴格控制在5min內(nèi)。

4.1 OD值偏低問題分析

4.1.1 試劑盒可能變質(zhì)；

4.1.2 試劑盒操作中漏加或者錯加液體；

4.1.3 實驗時間未按照實驗要求記錄；

4.1.4 混用不同批次的試劑；

4.1.5 試劑盒未按要求回溫。

4.2 OD值偏高問題分析

4.2.1 實驗時間記錄不正確；

4.2.2 實驗室溫度高于要求溫度；

4.2.3 混用不同批次的試劑；

4.2.4 洗板操作不徹底；

4.2.5 洗液配置不正確。

如果是由于以上原因?qū)е翺D值的不準確，影響了檢驗結(jié)果的準確性需重新檢驗。

以上僅為本人近幾年在“瘦肉精”及藥物殘留檢驗工作中總結(jié)的幾點經(jīng)驗，供同行參考。